本文關(guān)鍵詞：三種致奶牛流產(chǎn)病原多重巢式PCR檢測方法的建立與應(yīng)用

  更多相關(guān)文章： 奶牛 流產(chǎn) 多重巢式PCR 新孢子蟲 布氏桿菌 弓形蟲

【摘要】：近些年來,養(yǎng)殖奶牛流產(chǎn)率居高不下,某些地區(qū)奶牛的流產(chǎn)率甚至可以達到20%以上,給養(yǎng)殖戶來帶難以忽視的經(jīng)濟損失。因此,快速并準(zhǔn)確的檢測出引起奶牛流產(chǎn)的原因,對預(yù)防和控制奶牛流產(chǎn)具有相當(dāng)重要的意義。通過隨機調(diào)查走訪后,發(fā)現(xiàn)周口地區(qū)各個奶牛養(yǎng)殖場(飼養(yǎng)小區(qū))部分奶牛流產(chǎn)率高達21%。其中在第2-4胎的母牛流產(chǎn)率明顯高于其他胎次,流產(chǎn)率可以達到16.95%~25.53%;母牛流產(chǎn)多發(fā)于春秋季,該時間段內(nèi)流產(chǎn)數(shù)量占總流產(chǎn)數(shù)的48.76%(236/484)。新孢子蟲、布氏桿菌和弓形蟲是引起奶牛流產(chǎn)的三種常見病原,為同步檢測引起奶牛流產(chǎn)的三種常見病原新孢子蟲、布氏桿菌和弓形蟲,本研究分別設(shè)計針對新孢子蟲ITS1基因(Nc-ITS1)、布氏桿菌16S r RNA基因(Ba-16S rRNA)及弓形蟲529 bp重復(fù)序列基因(Tg-529 bp)的特異性巢式PCR引物,建立并優(yōu)化了能夠同時檢測這三種病原的多重巢式PCR方法。結(jié)果顯示,多重巢式PCR對Nc-ITS1、Ba-16S r RNA及Tg-529 bp擴增產(chǎn)物的大小分別為601 bp、380bp、245 bp。外引物退火溫度為57℃,內(nèi)引物為53℃;Taq酶、d NTP和Mg2+濃度分別為1.0 U、2.0 mmol/L和1.0 mmol/L;Ba-16S rRNA、Nc-ITS1和Tg-529 bp外、內(nèi)引物濃度均為0.4μmol/L。該多重巢式PCR對Nc-ITS1和Ba-16S rRNA檢測敏感性達3×102拷貝/反應(yīng),對Tg-529 bp達3×101拷貝/反應(yīng),對住肉孢子蟲、大腸桿菌、沙門氏菌、李氏桿菌、金黃色葡萄球菌和鏈球菌擴增均無目的條帶,表明本研究構(gòu)建優(yōu)化的多重巢式PCR檢測方法擁有良好的敏感性和特異性。同時使用該方法與單巢式PCR方法對30臨床流產(chǎn)樣本進行診斷,其診斷結(jié)果一致。表明該方法在臨床樣品檢測中擁有較好的應(yīng)用效果。應(yīng)用該方法檢測周口地區(qū)的172份臨床樣品,結(jié)果顯示新孢子蟲陽性52份,布氏桿菌陽性4份,弓形蟲陽性2份,其中新孢子蟲和布氏桿菌混合感染1份。結(jié)果表明,新孢子蟲病是造成周口地區(qū)奶牛發(fā)生流產(chǎn)的主要原因之一,為進一步防控該地區(qū)奶牛流產(chǎn)提供一定參考。
【學(xué)位授予單位】：河南科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S858.23

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