本文關(guān)鍵詞：蝦蟹養(yǎng)殖池塘益生菌的分離篩選及降解特性初步研究

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【摘要】：本實(shí)驗(yàn)前期采集了位于江蘇省連云港市贛榆區(qū)混養(yǎng)三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)與日本囊對(duì)蝦(Marsupenaeus japonicus)池塘的表層沉積物,利用不同培養(yǎng)基,分別對(duì)沉積物中的復(fù)合菌進(jìn)行了五、六個(gè)周期的富集和馴化培養(yǎng),每周期結(jié)束之后,都分別檢測(cè)復(fù)合菌對(duì)COD、氨態(tài)氮的降解能力。當(dāng)幾個(gè)周期全部結(jié)束之后,又分別將復(fù)合菌中的單株菌通過(guò)平板進(jìn)行分離、16S rRNA進(jìn)行鑒定,通過(guò)血平板及單株菌對(duì)COD、氨態(tài)氮的降解能力進(jìn)行篩選,之后將經(jīng)過(guò)鑒定和篩選的單株菌按一定比例配合之后,再次檢測(cè)組合菌對(duì)COD、氨態(tài)氮的降解能力。本實(shí)驗(yàn)后期選擇了一株短小芽孢桿菌,比較了在不同環(huán)境因子下其對(duì)無(wú)機(jī)氮的降解能力。目前,為使養(yǎng)殖環(huán)境保持清潔、養(yǎng)殖動(dòng)物健康成長(zhǎng),利用養(yǎng)殖環(huán)境中天然存在的或從養(yǎng)殖生物體內(nèi)分離的菌來(lái)對(duì)環(huán)境中的污染物進(jìn)行降解受到廣泛關(guān)注。不過(guò)從蝦蟹養(yǎng)殖池塘中篩選能夠高效降解污染物的菌則少見(jiàn)報(bào)道。本研究目的是獲得能夠降解蝦蟹養(yǎng)殖池塘中有機(jī)物污染和無(wú)機(jī)氮污染的兩類菌,旨在為菌規(guī)�；囵B(yǎng)及在海水養(yǎng)殖污水處理的潛在應(yīng)用提供依據(jù)、為蝦蟹養(yǎng)殖池塘生態(tài)環(huán)境的改善及蝦蟹養(yǎng)殖池塘微生態(tài)制劑的研究提供菌株和理論支持。本論文實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及主要研究成果如下：1.蝦蟹養(yǎng)殖池塘有機(jī)物降解菌富集馴化與分離篩選采集蝦蟹混養(yǎng)池塘沉積物,利用特定餌料培養(yǎng)基,并通過(guò)定期增加培養(yǎng)基中餌料添加量的方式,對(duì)沉積物中的復(fù)合菌進(jìn)行了六個(gè)周期(7天／周期)的富集馴化培養(yǎng)。在COD含量約為1000mg/L、菌接種量為10%的餌料降解溶液中,后期復(fù)合菌在5天內(nèi)對(duì)COD的最大去除率分別達(dá)到了64%、70%和88%。在六個(gè)周期富集馴化結(jié)束后,從復(fù)合菌中分離出16株菌,經(jīng)16S rRNA分析,其中8株屬于弧菌屬(vibrio sp.),1株屬于芽孢桿菌目(Bacillalessp.),2株屬于芽孢桿菌屬(Bacillus sp.),2株屬于交替假單胞菌屬(Pseudoalteromonas sp.),1株屬于氣單胞菌屬(Aeromonas sp.),1株屬于希瓦氏菌屬(Shewanella sp.)。經(jīng)血平板初步篩選出4株不具潛在致病性的菌,1株屬于芽孢桿菌目,1株為巨大芽孢桿菌(Bacillusmegaterium),2株為交替假單胞菌,在菌接種量為1.0×107cfu/mL的降解溶液中,各株菌在5天內(nèi)對(duì)COD的最大去除率分別達(dá)到了40%、40%、56%和46%。將這4株詩(shī)按一定比例組合后,在5天內(nèi)對(duì)COD的最大去除率可達(dá)到72%。研究表明,經(jīng)富集馴化后的復(fù)合菌及從中分離篩選出的4株不具潛在致病性的細(xì)菌及按一定比例重組后的蔭在調(diào)控養(yǎng)殖環(huán)境有機(jī)物污染方面都具有潛在應(yīng)用價(jià)值。2.蝦蟹養(yǎng)殖池塘氨氮降解菌富集馴化與分離篩選利用特定培養(yǎng)基,對(duì)蝦蟹混養(yǎng)池塘沉積物中的氨氮降解復(fù)合菌進(jìn)行了五個(gè)周期(14天／周期)的富集馴化培養(yǎng)。每周期結(jié)束后,在菌接種量為l0%,氨氮含量約為120mg/L的基礎(chǔ)降解溶液中,5天內(nèi)復(fù)合菌對(duì)氨態(tài)氮的最大去除率分別為29%,60%,69%,74%,72%。五個(gè)周期的富集馴化培養(yǎng)結(jié)束后,從復(fù)合菌中分離出12株菌,經(jīng)16S rRNA序列分析,8株屬于芽孢桿菌屬(Bacillus),4株屬于鹽單胞菌屬(Halomonas) 。根據(jù)菌株對(duì)紅細(xì)胞的溶血性,初步篩選出6株菌,其中2株為芽孢桿菌,4株為鹽單胞菌。在菌接種量為106cfu/mL的降解溶液中,5天內(nèi)各單株菌對(duì)氨態(tài)氮的最大去除率分別為59%、33%、42%、41%、40%和43%；菌接種量為1×107cfu/mL時(shí),5天內(nèi)各單株菌對(duì)氨態(tài)氮的最大去除率分別為70%、71%、88%、79%、51%和55%。將這6株菌按特定比例重新組合后,組合菌C在5天內(nèi)對(duì)氨態(tài)氮的去除能力較高,去除率達(dá)到62%。3.一株異養(yǎng)硝化-好氧反硝化菌株的脫氮特性研究本研究測(cè)定了短小芽孢桿菌E6在不同培養(yǎng)時(shí)間、溫度、鹽度、pH、菌接種量、C：N(質(zhì)量比)、碳源等條件下對(duì)氨態(tài)氮、亞硝酸態(tài)氮、硝酸態(tài)氮及總無(wú)機(jī)氮降解能力。將菌株E6接種到氨態(tài)氮濃度為107.72 mg/L、亞硝酸態(tài)氮濃度為8.55 mg/L、硝酸態(tài)氮濃度為39.20mg/L的氮降解基礎(chǔ)溶液后,5天內(nèi)其對(duì)氨態(tài)氮、亞硝酸態(tài)氮、硝酸態(tài)氮以及總無(wú)機(jī)氮的去除率分別達(dá)到47.59%、93.22%、64.84%和54.45%。在本研究條件下,菌株E6在溫度為28-34℃、鹽度為20-60%、pH為(6-7)、菌接種量為5%、碳氮比值為20、碳源為蔗糖時(shí)對(duì)無(wú)機(jī)氮具有較佳去除能力,對(duì)氨態(tài)氮、亞硝酸態(tài)氮、硝酸態(tài)氮和總無(wú)機(jī)氮的最大去除率分別可以達(dá)到70%、100%、81%和75%。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S917.1

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本文編號(hào)：1249495