本文關(guān)鍵詞：優(yōu)質(zhì)肉雞脂肪沉積相關(guān)基因的篩選及其在前脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中的表達(dá)研究

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【摘要】：為了研究?jī)?yōu)質(zhì)雞脂肪沉積的分子調(diào)控機(jī)制,本試驗(yàn)采用優(yōu)質(zhì)雞HS1系為試驗(yàn)材料,AA肉雞為對(duì)照,在個(gè)體和細(xì)胞水平上研究脂肪代謝相關(guān)基因的表達(dá)規(guī)律,以期找出調(diào)控脂質(zhì)代謝的候選基因,為優(yōu)質(zhì)雞的后續(xù)選育提供科學(xué)依據(jù)。本試驗(yàn)選取了AA肉雞和優(yōu)質(zhì)雞HS 1系21d胚胎的肝臟組織進(jìn)行數(shù)字基因表達(dá)譜測(cè)序分析(DGE),篩選出了品種間差異表達(dá)的基因,尤其是脂肪代謝相關(guān)基因,從轉(zhuǎn)錄組水平分析兩種雞脂肪代謝存在差異的遺傳機(jī)理；運(yùn)用Real-Time PCR定量分析AA肉雞和優(yōu)質(zhì)雞HS1系在28 d、49 d和70 d時(shí)ACC、FAS、PGC-1 α.PPARγ. SREBP-1c和PLIN1基因的表達(dá),從個(gè)體水平上研究DGE所得結(jié)果；取12d的AA肉雞腹部脂肪,培養(yǎng)原代雞前脂肪細(xì)胞,分析ACC、FAS、PGC-1α、PPARγ、SREBP-1c和PLIN1基因在脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中的表達(dá)規(guī)律,從細(xì)胞水平上探究候選基因在脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中的作用機(jī)制。采用DGE技術(shù)對(duì)AA肉雞和優(yōu)質(zhì)雞HS1系肝臟轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,每個(gè)文庫(kù)分別獲得了約690-957萬(wàn)個(gè)的表達(dá)標(biāo)簽,約685-950萬(wàn)個(gè)的Clean data:通過(guò)比對(duì),鑒定出14977個(gè)基因,其中有1270個(gè)基因在P0.05水平上存在顯著差異,有493個(gè)基因在P0.01水平上存在差異極顯著。通過(guò)GO和Pathway分析,這些差異基因富集到細(xì)胞凋亡、細(xì)胞循環(huán)、鞘脂類代謝、醚脂類代謝、PPARs信號(hào)通路、脂肪細(xì)胞因子信號(hào)通路、mTOR信號(hào)通路和胰島素信號(hào)通路等生物學(xué)過(guò)程。其中,有34個(gè)與脂代謝相關(guān)的基因在AA肉雞和優(yōu)質(zhì)雞HS1系間差異顯著,包括PPARγ和PLIN1等基因。脂肪代謝相關(guān)因子PPARγ和PLIN1在優(yōu)質(zhì)肉雞HS1系肝臟中的表達(dá)量分別是AA肉雞的3.79和5.42倍。此外,與PPARγ密切相關(guān)的幾個(gè)基因SREBP-1c.FAS,ACC和PGC-1α在AA肉雞和優(yōu)質(zhì)雞HS1系間也存在差異,其倍比分別為0.29、0.76、0.17和0.61。定量分析AA肉雞和優(yōu)質(zhì)雞HS1系肝臟、腹脂和皮脂中幾個(gè)候選基因,發(fā)現(xiàn)品種、日齡和組織因素對(duì)ACC、FAS、PGC-1α、PPARγ、SREBP-1c和PLIN1基因的表達(dá)均存在較大影響,具體表現(xiàn)為除脂肪合成相關(guān)基因FAS外,其它五個(gè)基因在28 d、49 d和70 d時(shí)在優(yōu)質(zhì)雞HS1系的肝臟和腹脂中的表達(dá)量均高于AA肉雞；隨著日齡的增加,ACC、FAS、PPARγ、SREBP-1c和PLINl在優(yōu)質(zhì)雞HS1系腹脂中的表達(dá)均呈先降低后升高趨勢(shì),PGC-1α在兩種雞肝臟中均呈先增后減趨勢(shì),在腹脂中均呈不斷上升趨勢(shì)；PGC-1α在肝臟中的表達(dá)量高于腹脂和皮脂,ACC、FAS、SREBP-1c、 PPARγ和PLIN1均表現(xiàn)為在腹脂中表達(dá)量高于肝臟和皮脂。此外,本試驗(yàn)進(jìn)行了雞前脂肪細(xì)胞的原代培養(yǎng)和誘導(dǎo)分化。采用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)曲線,發(fā)現(xiàn)誘導(dǎo)組和對(duì)照組雞前體脂肪細(xì)胞都在36 h時(shí)開始大量增殖；60h時(shí)增殖速度達(dá)到最大；72 h時(shí)細(xì)胞增殖速度下降。采用油紅O提取比色法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)脂肪含量,發(fā)現(xiàn)誘導(dǎo)組和對(duì)照組前脂肪細(xì)胞內(nèi)脂肪含量均在24 h較少,24 h后開始大幅度增加,60 h時(shí)達(dá)到最高水平；72h時(shí)明顯下降,且表現(xiàn)為誘導(dǎo)后24 h開始誘導(dǎo)組脂肪含量高于對(duì)照組。同時(shí),對(duì)脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中對(duì)ACC、FAS、PGC-1α、 PPARγ.SREBP-1c和PLIN1進(jìn)行定量分析,發(fā)現(xiàn)這些基因在的表達(dá)均表現(xiàn)為在48 h表達(dá)量最高,24 h和70 h表達(dá)量相對(duì)較低；且誘導(dǎo)分化48 h和70 h的表達(dá)量均為誘導(dǎo)組高于對(duì)照組。本試驗(yàn)首次利用數(shù)字基因表達(dá)譜技術(shù)全面篩選了AA肉雞和優(yōu)質(zhì)雞HS1系21d胚胎肝臟中差異表達(dá)基因,鑒定出了14977個(gè)在AA肉雞和優(yōu)質(zhì)雞HS1系上表達(dá)的基因,其中1270個(gè)存在顯著差異。AA肉雞和優(yōu)質(zhì)雞HS1系生長(zhǎng)過(guò)程中,品種、日齡和組織因素對(duì)ACC、FAS、PGC-1α、PPARγ.sREBP-1c和PLINl基因的表達(dá)均存在較大影響。脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中ACC、(?)REBP-1c和PLIN1的表達(dá)在誘導(dǎo)分化后48h和70 h誘導(dǎo)組顯著高于對(duì)照組,FAS和PPARγ的表達(dá)在72 h誘導(dǎo)組顯著高于對(duì)照組,推測(cè)這些基因可能對(duì)脂肪細(xì)胞的分化具有促進(jìn)作用。
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S831

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