川明參多糖的提取工藝及其免疫活性研究
本文關(guān)鍵詞:川明參多糖的提取工藝及其免疫活性研究
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【摘要】:川明參屬傘形科川明參屬,在形態(tài)上與明黨參相近,是我國特有的單種屬植物,主要分布在四川,多為栽培,其干燥根為四川常用道地中藥材及滋補(bǔ)食品。研究表明,具有潤肺化痰、和胃、生津、解毒等功效,主治肺熱咳嗽、熱病傷陰,為滋陰要藥。實(shí)驗(yàn)室前期研究表明, 川明參多糖硫(Chuanmingshen Violaceum Polysaccharides, CVP)酸化后具有抗病毒作用,本次研究對川明參多糖提取工藝、體內(nèi)外免疫活性進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。1.川明參多糖提取工藝研究本研究采用苯酚-硫酸法和DNS法相結(jié)合對多糖定量;CVP最佳提取工藝通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)進(jìn)行確定。結(jié)果顯示:CVP的最佳提取工藝為提取溫度為100℃,提取時(shí)間為4h,料液比為1:30,粉碎粒度為80目。結(jié)果表明,本研究得到的提取、純化干燥方法高效、簡便、成本低,且采用本方法純化干燥得到多糖純度達(dá)93.85%。2.川明參多糖及其硫酸化物對小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖活性的影響本研究采用四甲基偶氮唑鹽(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltet-razolium bromide, MTT)法檢測不同濃度的CVP及SCVP對靜息期細(xì)胞、伴刀豆球蛋白A(Concanavalin A, ConA)處理細(xì)胞、脂多糖(Lipopoly saccharide, LPS)處理細(xì)胞的增殖情況。結(jié)果顯示:與對照組相比較,CVP各濃度對靜息期細(xì)胞和LPS處理細(xì)胞的增殖均無顯著影響,但與ConA具有協(xié)同增殖作用:SCVP能活化淋巴細(xì)胞促進(jìn)其顯著增殖,與ConA和LPS具有協(xié)同增殖作用,并有一定的量效關(guān)系。結(jié)果表明,CVP及SCVP能促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞體外增殖,且SCVP對小鼠脾淋巴細(xì)胞具有有絲分裂原性。3.川明參多糖及其硫酸化物對環(huán)磷酰胺致免疫低下小鼠免疫水平的影響本研究采用CY來誘導(dǎo)小鼠免疫低下;免疫器官變化情況通過測定胸脾指數(shù)來衡量;CVP及SCVP不同劑量對靜息期細(xì)胞、ConA處理細(xì)胞、LPS處理細(xì)胞增殖活性的變化情況運(yùn)用MTT法進(jìn)行檢測;血清IFN-γ和IL-2采用ELISA試劑盒檢測。結(jié)果顯示:與模型組相比CVP和SCVP各試驗(yàn)劑量組均能顯著(P0.05)提高免疫低下小鼠的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù);CVP和SCVP各試驗(yàn)劑量3種處理方式脾臟淋巴細(xì)胞光密度(OD)值均顯著(P0.05)高于模型組;與模型組相比CVP和SCVP各試驗(yàn)劑量組均能顯著提高免疫低下小鼠血清細(xì)胞因子IFN-γ和IL-2的水平。結(jié)果表明,CVP和SCVP可以通過提高免疫低下小鼠免疫器官指數(shù)、各處理脾臟淋巴細(xì)胞增殖和血清IFN-γ和IL-2含量,從而提高機(jī)體的免疫力。4.川明參多糖對雞新城疫疫苗免疫應(yīng)答的影響本研究對7日齡雞分組、注射新城疫疫苗、連續(xù)7天按要求口服CVP,于14日齡、21日齡、28日齡采集相關(guān)樣品,通過對血清抗體水平、紅細(xì)胞免疫功能、T淋巴細(xì)胞增殖活性和T淋巴細(xì)胞亞群的測定,進(jìn)而評價(jià)CVP對疫苗免疫應(yīng)答的影響。結(jié)果顯示:在第14日齡和28日齡時(shí),CVP給藥各組抗體效價(jià)均顯著高于(P0.05)對照組;在第14日齡和21日齡時(shí),CVP給藥各組外周血淋巴細(xì)胞增殖率均顯著高于(P0.05)對照組;在第14日齡和28日齡時(shí),CVP給藥組的紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)率均顯著(P0.05)高于對照組;在第21日齡和28日齡時(shí),CVP給藥組的紅細(xì)胞免疫復(fù)合物花環(huán)率均顯著(P0.05)低于對照組;在第21日齡和28日齡時(shí),CVP中劑量組的T淋巴細(xì)胞亞群CD4+/CD8+比率顯著(P0.05)高于對照組。結(jié)果表明,CVP能增強(qiáng)疫苗免疫后的體液免疫的水平,且延長了疫苗的保護(hù)時(shí)間;CVP能夠促進(jìn)細(xì)胞免疫功能,并有一定的劑量依賴關(guān)系;CVP能夠延遲循環(huán)免疫復(fù)合物的消除;CVP具有誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞亞群CD4+/CD8’比率上升的作用。
【學(xué)位授予單位】:四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2015
【分類號】:S853.7
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,本文編號:1197240
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