本文關(guān)鍵詞：毛果楊PtrDREB28轉(zhuǎn)錄因子功能的研究

  更多相關(guān)文章： 毛果楊 大青楊 抗逆性 遺傳轉(zhuǎn)化 PtrDREB28

【摘要】：毛果楊轉(zhuǎn)錄因子中發(fā)現(xiàn)了一個DREB亞族PtrDREB28基因,通過其表達(dá)研究發(fā)現(xiàn)其可能與植物逆境脅迫及次生壁的形成有關(guān)。首先對毛果楊DREB亞族進(jìn)行了生物信息學(xué)分析。鑒定出毛果楊DREB亞族75個基因。DREB亞族基因進(jìn)行基于序列的系統(tǒng)發(fā)生樹的研究,分析得出DREB亞族可分為A-1到A-6六個亞群。DREB亞族基因進(jìn)行了染色體定位,結(jié)果得出毛果楊DREB家族串聯(lián)復(fù)制和并列復(fù)制占毛果楊DREB亞族蛋白編碼基因的56%(42/75)。DREB亞族基因進(jìn)行了基因結(jié)構(gòu)分析,毛果楊DREB亞族基因結(jié)構(gòu)保守,除個別基因存在內(nèi)含子外,其余基因都沒有內(nèi)含子結(jié)構(gòu)。DREB亞族基因進(jìn)行了motif分析,在基因我們得研究中,motif 3,為β-折疊1,motif1指β折疊2和3,motif2為α-螺旋,他存在于每一個毛果楊DREB亞族成員中。DREB亞族基因進(jìn)行了EST電子表達(dá)分析,結(jié)果表明有16個基因有較高的轉(zhuǎn)錄表達(dá)累積次數(shù)。DREB亞族基因在成熟的葉、嫩葉、根、節(jié)間和莖節(jié)進(jìn)行了基因芯片表達(dá)分析,成熟的葉片中PtrDREB13、15、33、51和53為上調(diào)表達(dá)；嫩葉中PtrDREB13、27、28、67和69為上調(diào)表達(dá)；節(jié)間PtrDREB20、30、49、70和74為上調(diào)表達(dá)；莖節(jié)處PtrDREB28、73和74為上調(diào)表達(dá)；根中PtrDREB7、11和18為上調(diào)表達(dá)。DREB亞族基因中挑選15個基因進(jìn)行非生物脅迫分析,除PtrDREB30基因沒有表達(dá)外,其余基因均有上調(diào)表達(dá),結(jié)果顯示這些基因能夠被逆境脅迫誘導(dǎo)表達(dá)。其次,本實驗選取PtrDREB28進(jìn)行克隆,構(gòu)建35S-PtrDREB28-GFP載體,利用基因槍技術(shù)瞬時轉(zhuǎn)化洋蔥表皮進(jìn)行亞細(xì)胞定位,結(jié)果顯示Ptr DREB28基因定位在細(xì)胞核中。PtrDREB28基因啟動子克隆及順式作用元件分析,結(jié)果識別9個順式作用元件,其中A-box、Box 4、TCT-motif原件為光調(diào)控元件、Box Ⅲ為蛋白結(jié)合位點、Box-W1為真菌調(diào)控元件、Skn-1-motif為胚乳特異性表達(dá)啟動子、CCGTCC-box為分生組織特異性激活元件、CAAT-box和TATA-box為核心啟動子元件。再次,構(gòu)建Ptr DREB28基因過表達(dá)和抑制表達(dá)載體,遺傳轉(zhuǎn)化大青楊,獲得Ptr DREB28過表達(dá)轉(zhuǎn)基因株系15個株系和抑制表達(dá)轉(zhuǎn)基因株系2個株系。最后,過表達(dá)轉(zhuǎn)基因大青楊和野生型大青楊在4℃24h,42℃ 8h的非生物脅迫條件下,野生型葉片受損程度較大,轉(zhuǎn)基因株系POD和SOD活性較強(qiáng),MDA含量較低。80mM Nacl脅迫一個月,轉(zhuǎn)基因株系有側(cè)枝萌生但野生型植株則沒有,轉(zhuǎn)基因株系根系發(fā)育良好。轉(zhuǎn)基因株系可降低木質(zhì)部發(fā)育程度,可加深皮層、木質(zhì)部和髓細(xì)胞壁的纖維素染色。
【學(xué)位授予單位】：東北林業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S792.11;Q943.2

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 顧民達(dá);加快林紙結(jié)合步伐 實現(xiàn)造紙工業(yè)現(xiàn)代化[J];中華紙業(yè);2001年12期

2 王承亮;蘇振華;馮文英;;生物技術(shù)在制漿造紙工業(yè)中的應(yīng)用[J];湖北造紙;2010年02期

3 吳芬;鄒葉茂;龍松華;;植物細(xì)胞壁的研究進(jìn)展[J];湖南農(nóng)業(yè)科學(xué);2010年05期

4 王清鋒;論龍須草的開發(fā)價值及在我國的利用現(xiàn)狀與展望[J];自然資源學(xué)報;1993年04期

5 姚光裕;生物技術(shù)在制漿造紙工業(yè)中的應(yīng)用[J];造紙信息;2001年04期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 梁欣欣;利用DREB轉(zhuǎn)錄因子改良小麥耐鹽性的研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2004年

2 姜素云;農(nóng)桿菌介導(dǎo)的黑麥草叢生芽芽尖的遺傳轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)基因植株再生[D];山東大學(xué);2005年

，

本文編號：1192216