發(fā)布時間：2017-11-06 00:29

  本文關鍵詞：不同鹽度脅迫下綠竹差異蛋白質(zhì)組學研究

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【摘要】：福建東南沿海地區(qū)將綠竹等大型叢生竹引種作為沿海防護林樹種,極大改善了沿海防護林的生態(tài)結(jié)構(gòu),其中綠竹為適應性較好的竹種之一,研究其耐鹽機制對選育抗鹽株系顯得尤為重要,目前相關研究都是從鹽脅迫對綠竹的生理生化水平上進行的,未涉及到竹類耐鹽相關的蛋白組學水平,未發(fā)現(xiàn)鹽脅迫對竹類差異蛋白質(zhì)組的相關研究報道。本研究結(jié)合前人研究的成果,以福建省漳州市赤山林場沿海沙地防護林引種綠竹為研究材料,通過無性系綠竹材料的獲取、葉片蛋白電泳體系的構(gòu)建、鹽脅迫響應蛋白分離并通過質(zhì)譜技術(shù)鑒定,研究響應蛋白的種類與功能,探討綠竹對鹽脅迫的差異蛋白響應機制,進而從分子水平研究綠竹在鹽脅迫時蛋白表達的變化,從基因水平為竹類耐鹽性鑒定及耐鹽性新品種選育提供理論基礎。在無性系綠竹材料獲取的研究中,通過8組綠竹正交扦插處理,統(tǒng)計生根率,分析得出適用于綠竹扦插育苗的扦插方案：扦插材料選用帶兜部的完整綠竹側(cè)枝,留3-4節(jié),去枝葉,流水浸泡過夜后用500ppmABT生根粉溶液進行激素處理,處理后枝條扦插至沙土泥炭混合基質(zhì)中。綠竹葉片全蛋白的雙向電泳體系構(gòu)建研究中,獲得適用于綠竹葉片雙向電泳體系：蛋白樣品采用TCA/丙酮+SDS酚抽提取法獲取,在17cm pH3-10 IPG膠條中水化上樣采用被動水化24小時,一向IEF時樣品膠條采用膠面向上模式聚集,聚焦程序設置為80000Vh,可獲得重復性好、分辨率高的凝膠圖像。對綠竹無性系種苗分別用0.3%和0.5% NaCl處理兩周后對葉片總蛋白進行雙向電泳,0.3%濃度對照組和試驗組分別測得895、884、841、754、786、738個蛋白點；0.5%濃度對照組和試驗組分別測得980、953、942、762、715、730個蛋白點。0.3%輕度脅迫誘導發(fā)現(xiàn)394個鹽脅迫響應蛋白點：36個新增蛋白點,7個消減蛋白點,213個上調(diào)蛋白點,138個下調(diào)蛋白。挑選6個顯著差異點進行MALDI-TOF-MS檢測,發(fā)現(xiàn)與粳稻同源功能蛋白Os02g0598300和假定蛋白TRIUR3_08890為新增表達蛋白,類小米DNA引發(fā)酶大亞基、磷酸丙糖異構(gòu)酶在鹽脅迫誘導中表達上調(diào),類小米DNA錯配修復蛋白MSH7、tRNA二甲基烯丙基轉(zhuǎn)移酶在鹽脅迫誘導中表達下調(diào)。0.5%重度脅迫誘導發(fā)現(xiàn)338個鹽脅迫響應蛋白點：115個新增蛋白點,73個消減蛋白點,93個上調(diào)蛋白點,57個下調(diào)蛋白。切取9個表達差異較顯著的蛋白點進行MALDI-TOF-MS檢測,發(fā)現(xiàn)未知蛋白loc100276336、70kDa熱激相關蛋白、argonaute 1B蛋白、甘油醛-3-磷酸脫氫酶2、Rubisco大亞基結(jié)合蛋白α亞基在鹽脅迫響應中表達上調(diào),假定蛋白osi_20531、 ATP合成酶、TIR-NBS-LRR類抗病蛋白在鹽脅迫響應中表達下調(diào)。本研究發(fā)現(xiàn)70 kDa熱激相關蛋白和Rubisco大亞基結(jié)合蛋白Q亞基在綠竹鹽脅迫響應中都高豐度表達,它們在綠竹抗鹽機制中承擔重要功能。而且在綠竹葉片蛋白內(nèi)發(fā)現(xiàn)TIR-NBS-LRR類抗病蛋白尚屬首次。
【學位授予單位】：福建農(nóng)林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S795.5

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