本文關鍵詞：圈養(yǎng)非人靈長類動物腸道菌測定及水蘇糖對腸道菌群的影響

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【摘要】：試驗主要以福州動物園圈養(yǎng)條件下靈長類動物為研究對象,采用實時熒光定量PCR (qPCR)的方法定量分析其糞便樣品中雙歧桿菌、乳酸桿菌及大腸桿菌含量。通過分析糞便中菌群的含量,間接研究現(xiàn)有飼養(yǎng)條件下,靈長類腸道健康狀況及菌群結構；以福州動物園獸類表演場籠養(yǎng)的獼猴為試驗動物,飼喂6w雙歧桿菌促生長因子——水蘇糖(功能性低聚糖),觀察水蘇糖對獼猴糞便菌群結構的影響,分析水蘇糖調節(jié)腸道菌群結構的機制。同時,采集獼猴血液,檢測飼喂水蘇糖后獼猴血液生理生化指標的變化,分析水蘇糖促進機體代謝及作用機理。(1)對福州動物園圈養(yǎng)獼猴、綠狒、環(huán)尾狐猴和黑帽懸猴糞便菌群進行定量檢測后對比分析,得出糞便中雙歧桿菌平均數(shù)量：獼猴為4.5×107CFU·g-1、綠狒為7.9×107CFU·g-1、環(huán)尾狐猴為1.9×108CFU·g-1、黑帽懸猴為1.4×108CFU·g-1,其中環(huán)尾狐猴極顯著高于獼猴(P0.01),黑帽懸猴顯著高于獼猴(P0.05)；獼猴幼年體和老年體有顯著差異(P0.05)；綠狒幼年體和老年體有顯著差異(P0.05)；環(huán)尾狐猴幼年體與成年體有顯著差異(P0.05)。糞便中的乳酸桿菌平均數(shù)量獼猴為4.1×106CFU·g-1、綠狒為4.8×10CFU·g-1、環(huán)尾狐猴為9.3×106CFU·g-1、黑帽懸猴為9.3×106CFU·g-1,獼猴與環(huán)尾狐猴,獼猴與黑帽懸猴之間差異極顯著(P0.01),綠狒與環(huán)尾狐猴,綠狒與黑帽懸猴之間差異顯著(P0.05)；不同種類的不同年齡段之間只有獼猴成年體與老年體之間差異顯著(P0.05)。糞便中大腸桿菌平均數(shù)量獼猴為1.1×107CFU·g-1綠狒為8.5×106CFU·g-1環(huán)尾狐猴為46×106CFU·g-1、黑帽懸猴為4.3×106CFU·g-1,其中獼猴與環(huán)尾狐猴,獼猴與黑帽懸猴之間差異顯著(P0.05)；不同種類的不同年齡段之間無明顯差異(P0.05)。(2)將福州動物園獸類表演場籠養(yǎng)獼猴分為幼年組、成年組及老年組,同時設立對照組,在為期6w的水蘇糖飼喂過程中定量檢測了獼猴糞便雙歧桿菌、乳酸桿菌及大腸桿菌的數(shù)量變化。結果表明,試驗組雙歧桿菌在1～2w增長顯著(P0.01),不同年齡段均有增加,幼年體、成年體和老年體3～6w增長趨勢降低,最終可達109CFU·g-1以上。乳酸桿菌在試驗期間增長趨勢較慢,但0～6w不同年齡段均有2～4倍的數(shù)量變化(P0.05)。大腸桿菌數(shù)量在試驗期間不同年齡段有顯著減少(P0.05)。(3)對水蘇糖飼喂試驗前后獼猴血液生理生化指標進行比較分析。結果顯示,紅細胞、淋巴細胞、血液總蛋白、白蛋白、腺苷脫氨酶、載脂蛋白、膽固醇、甘油三酯、HDL膽固醇和血鈣等指標有顯著提高(P0.05)。谷丙轉氨酶含量減少極顯著(P0.01),表明水蘇糖可以顯著的影響血液膽固醇、甘油三酯等脂類在體內的代謝,對血鈣也有良好的吸收促進作用。因此水蘇糖可以通過改善獼猴腸道菌群結構,促進機體營養(yǎng)物質消化吸收,提高獼猴的免疫機能和抗病能力。
【關鍵詞】：靈長類 雙歧桿菌 乳酸桿菌 水蘇糖 血液生理生化指標
【學位授予單位】：福建農林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S852.6
【目錄】：

• 摘要8-10
• Abstract10-12
• 綜述12-22
• 1 靈長類腸道菌群概況12-16
• 1.1 腸道微生態(tài)結構分布概述及研究進展12-13
• 1.2 動物腸道有主要生物學意義的微生物概述13-14
• 1.3 腸道菌群的生理功能14-15
• 1.4 腸道菌群紊亂15-16
• 1.4.1 腸道菌群紊亂的原因15-16
• 1.4.2 腸道菌群紊亂的預防和治療16
• 2 水蘇糖促進益生菌增殖對腸道微生態(tài)的調節(jié)作用16-18
• 2.1 益生菌16-17
• 2.1.1 雙歧桿菌16
• 2.1.2 乳酸桿菌16-17
• 2.2 雙歧桿菌和乳酸桿菌對宿主的主要生理意義17
• 2.2.1 定植抗力作用17
• 2.2.2 免疫屏障作用17
• 2.2.3 其它作用17
• 2.3 水蘇糖對雙歧桿菌的增殖作用17-18
• 2.3.1 雙歧桿菌促生長因子17-18
• 2.3.2 雙歧桿菌對水蘇糖的發(fā)酵機理18
• 3 腸道菌群研究的主要方法18-20
• 3.1 經典研究方法18
• 3.2 現(xiàn)代分子生物學研究方法18-20
• 3.2.1 16S rDNA PCR技術19
• 3.2.2 指紋圖譜技術19
• 3.2.3 核酸探針技術19
• 3.2.4 實時熒光定量PCR技術19-20
• 4 糞便菌群的影響因素20
• 4.1 年齡對雙歧桿菌的影響20
• 4.2 飲食對雙歧桿菌的影響20
• 5 糞便細菌總DNA的提取技術20
• 6 本試驗的研究目的和意義20-22
• 第一章 福州動物園靈長類動物腸道菌群定量分析22-32
• 1 材料和方法22-28
• 1.1 材料22
• 1.1.1 主要試驗試劑22
• 1.1.2 主要試驗儀器22
• 1.2 試驗方法22-28
• 1.2.1 試驗動物調查及樣品采集22-23
• 1.2.2 PCR引物設計23-24
• 1.2.3 糞便細菌全基因組DNA提取24
• 1.2.4 雙歧桿菌、乳酸桿菌及大腸桿菌外標準品提取及保存24-25
• 1.2.4.1 普通PCR擴增目的片段24-25
• 1.2.4.2 雙歧桿菌標準品制備25
• 1.2.4.3 乳酸桿菌標準品制備25
• 1.2.4.4 大腸桿菌標準品制備25
• 1.2.5 雙歧桿菌、乳酸桿菌及大腸桿菌qPCR分析25-26
• 1.2.6 雙歧桿菌、乳酸桿菌及大腸桿菌標準曲線26-27
• 1.2.7 溶解曲線與假陽性27-28
• 2 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與處理28
• 3 結果28-30
• 3.1 不同靈長類糞便菌群定量比較分析28-29
• 3.2 雙歧桿菌qPCR檢測結果29
• 3.3 乳酸桿菌qPCR檢測結果29-30
• 3.4 大腸桿菌qPCR檢測結果30
• 4 討論30-32
• 第二章 水蘇糖對福州動物園獼猴腸道菌群的影響32-37
• 1 材料和方法32-33
• 1.1 材料32-33
• 1.1.1 試驗動物32-33
• 1.1.2 主要試驗材料及儀器33
• 1.2 方法33
• 1.2.1 飼養(yǎng)試驗33
• 1.2.2 糞便樣品采集33
• 1.2.3 糞便樣品細菌全DNA提取33
• 1.2.4 雙歧桿菌、乳酸桿菌及大腸桿菌qPCR分析33
• 2 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與處理33
• 3 結果與分析33-35
• 3.1 水蘇糖對獼猴腸道雙歧桿菌的影響33-34
• 3.2 水蘇糖對獼猴腸道乳酸桿菌的影響34
• 3.3 水蘇糖對獼猴腸道大腸桿菌的影響34-35
• 3.4 水蘇糖水蘇糖對靈長類糞便外觀變化的影響35
• 4 討論35-37
• 第三章 水蘇糖對福州動物園獼猴血液生理機能的影響37-42
• 1 材料和方法37
• 1.1 材料37
• 1.1.1 試驗動物37
• 1.1.2 主要試驗材料及儀器37
• 1.2 方法37
• 1.2.1 飼養(yǎng)試驗37
• 1.2.2 血液樣品采集37
• 1.2.5 血液生理生化指標檢測37
• 2 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與處理37
• 3 結果與分析37-40
• 3.1 水蘇糖對獼猴血細胞含量的影響37-38
• 3.2 水蘇糖對獼猴血液肝功能生化指標的影響38-39
• 3.3 水蘇糖對獼猴血液腎功能指標及離子的影響39
• 3.4 水蘇糖對獼猴血液蛋白質、脂類和糖類代謝指標的影響39-40
• 4 討論40-42
• 結論42-43
• 本試驗的創(chuàng)新點43
• 本試驗不足之處和有待進一步研究的問題43-44
• 參考文獻44-50
• 附錄一 試驗主要儀器50-51
• 附錄二 試驗主要材料及試劑51-52
• 附錄三 飼喂水蘇糖前后獼猴糞便的外觀變化52-53
• 附錄四 獼猴血液生理生化檢測報告53-54
• 致謝54

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本文編號：1092440