本文關(guān)鍵詞：雞IFIT5基因的克隆、表達及其抗病毒功能研究

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【摘要】：IFIT家族是一類主要受干擾素、病毒和脂多糖誘導表達的干擾素誘導基因。其編碼的蛋白可通過抑制翻譯起始,識別、結(jié)合并隱退特定類型的病毒核酸或蛋白以及參與調(diào)節(jié)細胞固有的和非固有的免疫反應等方式來抵抗病毒的入侵。然而,目前該家族基因在禽類上的研究甚少。本研究首先通過分子克隆的方法獲取了雞IFIT5基因CDS區(qū)全長序列,并對其相關(guān)分子生物信息進行了分析與預測。其次,采用qRT-PCR技術(shù)構(gòu)建了雞IFIT5基因的組織表達譜,并在機體和細胞水平上檢測了雞IFIT5基因?qū)Σ煌玖π鲁且卟《径局旰筒煌T導刺激物的免疫應答差異。最后,在細胞水平上采用siRNA干擾和外源過表達技術(shù)初步探究了雞MDA-5、LGP-2、MAVS和IRF-3對IFIT5基因的表達調(diào)控作用以及雞IFIT5基因?qū)RF-3和NF-κB信號通路的影響。取得的主要結(jié)果如下：(1)雞IFIT5基因CDS區(qū)全序列長1440bp,由兩個外顯子組成,共可編碼479個氨基酸。其推導氨基酸序列與鳥類對應序列的相似度均不超過70%,與哺乳動物對應序列的相似度均不超過50%。(2)雞IFIT5基因在脾、心、肺、胸腺、腎和小腸組織中具有相對較高的mRNA表達豐度,在法氏囊、腦、胸肌和腿肌組織中具有相對較低的mRNA表達豐度,而在肝臟組織中幾乎不表達。(3)雞IFIT5基因在兩攻毒組雞只的胸腺和脾臟組織中的表達量變化均呈先上升后下降的趨勢且在第二天達到峰值,在Mukteswar攻毒雞只的法氏囊組織中呈先上升后下降的趨勢且在第一天達到峰值,在F48E9攻毒雞只的法氏囊組織中則呈持續(xù)上升趨勢。(4)雞IFIT5和IFN-β基因在轉(zhuǎn)染poly I:C和poly dA:dT 4 h后表達水平顯著上調(diào)。(5)雞IFIT5和IFN-P基因在感染Mukteswar毒株后存在明顯協(xié)同表達關(guān)系,且在8h后的二次感染過程中雞IFIT5基因的表達量相對于IFN-β基因呈現(xiàn)出明顯的延后上調(diào)。(6)過表達雞MDA、MAVS和IRF-3基因可顯著增強雞IFIT5基因的免疫應答水平,而干擾雞MDA-5、LGP-2、MAVS和IRF-3基因可顯著抑制雞IFIT5基因的免疫應答水平。(7)過表達雞IFIT5基因可顯著增強IRF-3和NF-κB應答基因的免疫應答水平。上述結(jié)果表明：雞IFIT5基因在非刺激狀態(tài)下的表達分布具有明顯的組織特異性,在受到RNA病毒或DNA病毒刺激時表達量會明顯上調(diào),且其表達水平會受到雞MDA-5、LGP-2、MAVS和IRF-3蛋白的調(diào)控。此外,雞IFIT5蛋白對IRF-3和NF-κB信號通路具有正向調(diào)控作用。
【關(guān)鍵詞】：雞 IFIT5 克隆 表達 新城疫病毒
【學位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S831
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 主要符號說明9-12
• 1 文獻綜述12-27
• 1.1 IFIT家族簡介12-13
• 1.2 IFIT家族基因結(jié)構(gòu)與表達研究進展13-18
• 1.2.1 IFIT家族基因結(jié)構(gòu)特征13
• 1.2.2 IFIT家族基因表達特性13-14
• 1.2.3 IFIT家族基因表達調(diào)控通路14-18
• 1.3 IFIT家族蛋白結(jié)構(gòu)與功能研究進展18-23
• 1.3.1 IFIT家族蛋白結(jié)構(gòu)特征18-19
• 1.3.2 IFIT家族蛋白功能研究19-23
• 1.4 IFIT5的研究進展23-26
• 1.5 研究目的及意義26-27
• 2 材料與方法27-40
• 2.1 試驗材料27-30
• 2.1.1 試驗動物與病毒來源27
• 2.1.2 主要儀器設備27-28
• 2.1.3 主要試劑及耗材28-29
• 2.1.4 主要分析軟件及網(wǎng)站29-30
• 2.2 試驗方法30-40
• 2.2.1 試驗技術(shù)路線30
• 2.2.2 SPF雞的孵化、飼喂、攻毒和采樣30
• 2.2.3 cDNA模板的制備30-32
• 2.2.4 雞IFIT5基因CDS區(qū)的克隆與測序32-35
• 2.2.5 真核表達載體的構(gòu)建35-36
• 2.2.6 細胞試驗36-37
• 2.2.7 實時熒光定量PCR37-39
• 2.2.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析39-40
• 3 結(jié)果與分析40-57
• 3.1 雞IFIT5基因CDS區(qū)的克隆與測序40
• 3.2 雞IFIT5基因CDS區(qū)序列分析40-45
• 3.2.1 雞IFIT5基因CDS區(qū)核苷酸序列分析40-42
• 3.2.2 雞IFIT5基因推導氨基酸序列分析42-45
• 3.3 雞IFIT5基因mRNA水平的組織表達譜構(gòu)建45-46
• 3.4 雞IFIT5基因在機體中對不同毒力新城疫病毒的免疫應答差異46-49
• 3.4.1 兩攻毒組胸腺組織中IFIT5基因的表達差異46-47
• 3.4.2 兩攻毒組脾臟組織中IFIT5基因的表達差異47
• 3.4.3 兩攻毒組法氏囊組織中IFIT5基因的表達差異47-49
• 3.5 雞IFIT5基因在雞胚成纖維細胞中對不同刺激物的免疫應答差異49-51
• 3.5.1 Poly I：C對雞IFIT5基因的免疫誘導作用49
• 3.5.2 Poly dA：dT對雞IFIT5基因的免疫誘導作用49
• 3.5.3 新城疫病毒Mukteswar毒株對雞IFIT5基因的免疫誘導作用49-51
• 3.6 雞MDA-5、LGP-2、MAVS和IRF-3基因?qū)FIT5表達水平的調(diào)控作用51-53
• 3.6.1 過表達雞MDA-5、LGP-2、MAVS和IRF-3基因?qū)FIT5免疫應答水平的影響51
• 3.6.2 干擾雞MDA-5、LGP-2、MAVS和IRF-3基因表達對IFIT5免疫應答水平的影響51-53
• 3.7 雞IFIT5蛋白的亞細胞定位53
• 3.8 過表達雞IFIT5基因?qū)RF-3和NF-κB應答基因表達水平的影響53-57
• 4 討論57-62
• 4.1 雞IFIT5基因CDS區(qū)序列分析57
• 4.2 雞IFIT5基因的組織表達分布特點57-58
• 4.3 兩攻毒組中IFIT5基因的免疫應答差異58-59
• 4.4 雞胚成纖維細胞對不同刺激物的免疫應答差異59-60
• 4.5 雞MDA-5、LGP-2、MAVS和IRF-3對IFIT5基因的表達調(diào)控60
• 4.6 雞IFIT5對IRF-3和NF-κB信號通路的影響60-62
• 5 結(jié)論62-64
• 參考文獻64-70
• 致謝70-72
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術(shù)論文72

【相似文獻】

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 楊輝林;雞IFIT5基因的克隆、表達及其抗病毒功能研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學;2015年

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本文編號：1001906