本文關(guān)鍵詞：培元固本法的理論探討及其對老年性癡呆作用的研究

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【摘要】：目的:培元固本法是中醫(yī)學(xué)的重要治法之一,在各種疾病尤其是老年病的防治過程中起著重要作用,歷代醫(yī)家極為重視培元固本法,對其多有闡發(fā)。本課題從中醫(yī)培元固本法的自身發(fā)展脈絡(luò)出發(fā),梳理其基本概念和理論內(nèi)涵,對其進(jìn)行分析歸納總結(jié),并結(jié)合本課題組前期的研究基礎(chǔ),以老年性癡呆為切入點,探討元氣與老年性癡呆發(fā)病的關(guān)系和培元固本法防治老年性癡呆的作用及機(jī)制。以APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠作為老年性癡呆的動物模型,觀察培元固本中藥復(fù)方補元清腦顆粒治療老年性癡呆的作用及其對PI3K/Akt信號通路的影響,旨在為中醫(yī)培元固本法的理論研究和培元固本法防治老年病的研究提供理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。方法:1.理論探討:整理與中醫(yī)培元固本法有關(guān)的古今文獻(xiàn),分析培元固本法的中醫(yī)學(xué)概念、內(nèi)涵,探討中醫(yī)培元固本法的理論,及其防治老年性癡呆的理論依據(jù)。2.實驗研究:以APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠作為老年性癡呆的動物模型,以PI3K/Akt信號通路為研究靶點,研究培元固本中藥復(fù)方補元清腦顆粒對老年性癡呆的作用及其機(jī)制。以Morris水迷宮測試、跳臺測試為行為學(xué)指標(biāo),檢測小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力;以Western Blot法檢測小鼠海馬組織PI3K/Akt信號通路主要蛋白的含量;以Real Time-PCR檢測小鼠海馬組織PI3K/Akt信號通路主要mRNA的表達(dá),及其上游β淀粉樣前體蛋白(APP)mRNA的表達(dá);免疫組織化學(xué)染色法檢測小鼠海馬組織PI3K/Akt信號通路主要蛋白的含量;電鏡觀察小鼠海馬CA1區(qū)細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果:1.Morris水迷宮測試結(jié)果顯示:與空白組比較,模型組小鼠上平臺潛伏期、第1次抵原平臺時間和游泳總路程明顯增加(P0.01),穿越平臺次數(shù)、目標(biāo)象限時間均明顯減少(P0.01);與模型組比較,各組小鼠的上平臺潛伏期、游泳總路程均減少(p0.01,p0.05),目標(biāo)象限時間均增加(p0.01,p0.05),補元清腦顆粒高劑量組和等效劑量組小鼠的穿越平臺次數(shù)增加(p0.01,p0.05),兩組之間呈現(xiàn)出一定的量效關(guān)系;與西藥陽性對照組多奈哌齊組比較,補元清腦顆粒高劑量組和等效劑量組小鼠的游泳總路程明顯減少(p0.01);與中藥陽性對照組菖蒲益智丸組比較,補元清腦顆粒高劑量組和等效劑量組小鼠的游泳總路程明顯減少(p0.01),補元清腦顆粒高劑量組小鼠的穿越平臺次數(shù)增加(p0.05)。2.跳臺測試結(jié)果顯示:與空白組比較,模型組小鼠的出錯次數(shù)明顯增加(p0.01),潛伏期明顯縮短(p0.01);與模型組比較,多奈哌齊組和補元清腦顆粒高劑量組小鼠的出錯次數(shù)減少(p0.01,p0.05),多奈哌齊組和菖蒲益智丸組小鼠的潛伏期延長(p0.01,p0.05)。3.westernblot結(jié)果顯示:與空白組比較,模型組小鼠海馬組織的akt、bcl-2蛋白相對表達(dá)量減少(p0.05);與模型組比較,多奈哌齊組、菖蒲益智丸組小鼠海馬組織的akt蛋白相對表達(dá)量增加(p0.01,p0.05),菖蒲益智丸組小鼠海馬組織的bax蛋白相對表達(dá)量減少(p0.05),各組小鼠海馬組織的bcl-2蛋白相對表達(dá)量增加(p0.01,p0.05)。4.realtime-pcr結(jié)果顯示:與空白組比較,模型組appmrna、pi3kmrna、aktmrna、bcl-2mrna表達(dá)下調(diào),baxmrna表達(dá)上調(diào)。與模型組比較,多奈哌齊組和補元清腦顆粒等效劑量組pi3kmrna、aktmrna、bcl-2mrna表達(dá)上調(diào),appmrna、baxmrna表達(dá)下調(diào);菖蒲益智丸組appmrna、pi3kmrna、aktmrna、bcl-2mrna、baxmrna表達(dá)下調(diào);補元清腦顆粒高劑量組appmrna、pi3kmrna、aktmrna、bcl-2mrna表達(dá)上調(diào),baxmrna表達(dá)下調(diào)。5.免疫組織化學(xué)法結(jié)果顯示:①小鼠海馬組織ca1區(qū)bax免疫組化染色:空白組小鼠海馬ca1區(qū)細(xì)胞帶完整,排列整齊,細(xì)胞形態(tài)正常,細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)著淺黃棕色顆粒。與空白組比較,模型組小鼠海馬ca1區(qū)細(xì)胞著深棕色顆粒。與模型組比較,各組小鼠海馬ca1區(qū)細(xì)胞染色較淺,其中多奈哌齊組、菖蒲益智丸組和補元清腦顆粒高劑量組細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)著淺黃棕色顆粒,補元清腦顆粒等效劑量組細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)著棕色顆粒。②小鼠海馬組織CA1區(qū)Bcl-2免疫組化染色結(jié)果:空白組小鼠海馬CA1區(qū)細(xì)胞帶完整,排列整齊,細(xì)胞形態(tài)正常,細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)著深棕黃顆粒。與空白組比較,模型組小鼠海馬CA1區(qū)細(xì)胞排列紊亂,染色較淺。與模型組比較,各組小鼠海馬CA1區(qū)細(xì)胞排列有序,染色較深,其中多奈哌齊組、菖蒲益智丸組和補元清腦顆粒高劑量組細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)著深棕黃色顆粒,補元清腦顆粒等效劑量組細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)著棕色顆粒。6.電鏡結(jié)果顯示:空白組小鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的核膜完整,核仁明顯。其他各組與正常組比較,均出現(xiàn)凋亡表現(xiàn),其中模型組最為顯著。與多奈哌齊組比較,補元清腦顆粒高劑量組和等效劑量組神經(jīng)元細(xì)胞核的核仁不明顯,胞質(zhì)內(nèi)空泡較多。與菖蒲益智丸組比較,補元清腦顆粒高劑量組神經(jīng)元胞質(zhì)顏色較淺,胞核體積較大,染色質(zhì)聚集較少,胞漿內(nèi)空泡較少;補元清腦顆粒等效劑量組神經(jīng)元胞核體積較大。結(jié)論:1.元氣是人體各項生命活動的基礎(chǔ),是腦部生理功能的根本。元氣充沛,則腦清神明;元氣虧虛,則髓海失養(yǎng),痰瘀上蒙,清竅不明。通過培元固本法來培補元氣,固護(hù)脾腎,使先后天相互補充,相互滋長,達(dá)到防治老年性癡呆的目的。2.培元固本法對APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力具有改善作用。3.培元固本法具有激活A(yù)PP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠PI3K/Akt信號通路,抗細(xì)胞凋亡的作用。
【關(guān)鍵詞】：《黃帝內(nèi)經(jīng)》 元氣 老年性癡呆 培元固本
【學(xué)位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R277.7
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• Abstract9-13
• 縮略詞表13-14
• 前言14-15
• 第一部分 培元固本法的理論探討15-38
• 1.“元”的概念15
• 2.“本”的概念15-16
• 3.“元氣”的概念16-21
• 3.1“氣”的概念16-19
• 3.2“元氣”的涵義19-21
• 4.元氣與衰老及老年性癡呆的關(guān)系21-33
• 4.1 腎中元精及其與元氣的關(guān)系21-27
• 4.2 腦中元神及其與元氣的關(guān)系27-33
• 5.培元固本，養(yǎng)生延衰33-38
• 5.1“培元固本學(xué)派”的形成和發(fā)展33-36
• 5.2 培元固本法的理論對養(yǎng)生防病的指導(dǎo)36-38
• 第二部分 培元固本法是防治老年性癡呆的重要治法38-45
• 1.老年性癡呆的病因病機(jī)38-42
• 1.1 元氣失調(diào)，痰濁蒙竅38-39
• 1.2 精氣虧虛，髓海不足39-40
• 1.3 情志不遂，元神失用40-42
• 2.培元固本，防治癡呆42
• 3.補元清腦顆粒組方分析42-45
• 第三部分 培元固本法對APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠作用的研究45-66
• 實驗一 培元固本法對APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠行為學(xué)的影響45-51
• 1.實驗材料45-46
• 1.1 實驗動物45
• 1.2 實驗用藥及制備45-46
• 1.3 實驗儀器46
• 2.實驗方法46
• 2.1 動物分組46
• 2.2 動物給藥46
• 3.學(xué)習(xí)記憶水平檢測46-48
• 3.1 Morris水迷宮測試46-47
• 3.2 跳臺測試47-48
• 4.統(tǒng)計學(xué)處理48
• 5.結(jié)果48-51
• 5.1 Morris水迷宮測試48-49
• 5.2 跳臺測試49-51
• 實驗二 培元固本法對APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠PI3K/Akt信號通路的影響51-66
• 1.實驗材料51-55
• 1.1 實驗動物51
• 1.2 實驗用藥及制備51
• 1.3 實驗儀器51-52
• 1.4 實驗試劑52-54
• 1.5 實驗用到的溶液配制方法54-55
• 2.實驗方法55-61
• 2.1 動物取材55
• 2.2 Western Blot法檢測PI3K/Akt信號通路主要蛋白的含量55-58
• 2.3 Real Time-PCR檢測PI3K/Akt信號通路主要mRNA表達(dá)58-59
• 2.4 免疫組織化學(xué)法檢測PI3K/Akt信號通路主要蛋白含量59-60
• 2.5 透射電子顯微鏡觀察小鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)60-61
• 3.統(tǒng)計學(xué)處理61
• 4.結(jié)果61-66
• 4.1 小鼠海馬組織Western Blot實驗結(jié)果61-62
• 4.2 小鼠海馬組織Real Time-PCR實驗結(jié)果62-64
• 4.3 小鼠海馬CA1區(qū)免疫組化染色結(jié)果64
• 4.4 小鼠海馬CA1區(qū)電鏡結(jié)果64-66
• 第四部分 討論66-81
• 1.APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠作為老年性癡呆模型的選擇66-67
• 1.1 APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠神經(jīng)病理改變66-67
• 1.2 APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠行為學(xué)改變67
• 2.培元固本法對APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響67-70
• 3.培元固本法對APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠PI3K/Akt信號通路的影響70-79
• 3.1 細(xì)胞凋亡70-75
• 3.2 年性癡呆與Aβ 誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞凋亡75-77
• 3.3 老年性癡呆與PI3K/Akt信號通路77-79
• 4.結(jié)論79
• 5.展望79-81
• 參考文獻(xiàn)81-92
• 附錄 綜述92-102
• 參考文獻(xiàn)98-102
• 附圖102-105
• 在校期間公開發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及科研成果105-106
• 致謝106

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本文編號：763222