本文關(guān)鍵詞：HMGB1對大鼠心肌缺血再灌注損傷的作用及信號傳導(dǎo)通路

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【摘要】：研究背景冠心病是一種發(fā)病率、死亡率和致殘率極高的常見病和多發(fā)病,嚴(yán)重威脅人類健康,已成為嚴(yán)重的社會公共衛(wèi)生問題之一。心肌缺血發(fā)生時,能夠及時、有效地恢復(fù)缺血心肌的血流灌注,是減少缺血心肌損傷和恢復(fù)心臟功能的重要措施之一,也是改善缺血性心臟病患者預(yù)后的關(guān)鍵。隨著對急性心肌梗死(acute myocardial infarction, AMI)患者進(jìn)行溶栓治療、急癥經(jīng)皮穿刺冠狀動脈介入治療術(shù)(percutaneous coronary intervention, PCI)、冠狀動脈旁路移植術(shù)(coronary artery bypass grafting, CABG)和激光心肌血運(yùn)重建術(shù)等技術(shù)在臨床上的推廣應(yīng)用,使缺血心肌的血液灌注得以及時有效的恢復(fù)。大量基礎(chǔ)和臨床研究[1,2]證實,缺血心肌的再灌注本身也會誘發(fā)一系列新的病理生理變化,進(jìn)一步加重心肌組織細(xì)胞的損傷,出現(xiàn)再灌注心律失常、心肌舒縮功能障礙、代謝異常以及心肌超微結(jié)構(gòu)改變等,即發(fā)生心肌缺血再灌注損傷(myocardial ischemia reperfusion injury,MIRI),直接影響患者的心臟功能和預(yù)后。心肌缺血再灌注(ischemic reperfusion, I/R)損傷是極其復(fù)雜的病理生理過程,即缺氧器官在恢復(fù)血流和氧輸送的情況下心肌損傷加劇的現(xiàn)象。在血液中氧氣和營養(yǎng)缺乏的條件下,恢復(fù)血流灌注的結(jié)果就是通過氧化應(yīng)激誘導(dǎo)炎癥和氧化還原損傷而不是恢復(fù)器官的正常功能[3]。多種因素包括氧自由基損傷、ATP敏感性鉀通道、鈣離子負(fù)荷超載、能量代謝障礙、細(xì)胞凋亡及血管內(nèi)皮細(xì)胞功能失調(diào)等參與了MIRI的病理生理過程。減輕缺血所致的心肌細(xì)胞死亡(壞死和凋亡)的最有效途徑就是恢復(fù)心肌的有效血流灌注,但再灌注本身可以導(dǎo)致心肌再灌注損傷。因此,明確MIRI的機(jī)制,對減輕或者消除MIRI具有重要的臨床意義。高遷移率族蛋白1[high mobility group protein box 1, HMGB1)是一種古老的生物分子,由215個氨基酸殘基組成,其相對分子量為30KD。有3個獨立的結(jié)構(gòu)域(A盒、B盒、C盒),均由約80個氨基酸殘基組成,是結(jié)合DNA的功能結(jié)構(gòu)域,位于N端的A盒和B盒與DNA都有很高的親和力。A盒、B盒均帶有正電荷,而位于C端的C盒則完全帶負(fù)電荷；B盒同時也是HMGB1引起炎癥反應(yīng)的功能性結(jié)構(gòu)域。HMGB1在哺乳類之間具有99%的同源性,在進(jìn)化上具有高度保守的特點[4]。研究表明：在正常生理狀態(tài)下,HMGB1表達(dá)于絕大多數(shù)的器官和組織,屬于非組蛋白的核蛋白。在生理狀態(tài)下,HMGB1位于生物體的細(xì)胞核內(nèi),并參與某些基因的轉(zhuǎn)錄、表達(dá)及細(xì)胞分化的調(diào)控過程,但HMGB1本身不是基因的核轉(zhuǎn)錄因子[5]。在正常生理情況下,HMGB1在細(xì)胞核內(nèi)與DNA的結(jié)合是松散的,但當(dāng)細(xì)胞遭受機(jī)械損傷或壞死的時候(而非細(xì)胞凋亡),HMGB1易于從受損的細(xì)胞核內(nèi)釋放到細(xì)胞外,繼而誘發(fā)炎癥反應(yīng)。因此,HMGB1被認(rèn)為是機(jī)體壞死細(xì)胞發(fā)出的內(nèi)源性的危險信號。多種免疫細(xì)胞,如巨噬細(xì)胞在炎癥發(fā)生后可主動分泌HMGB1,一些感染性刺激因子(如LPS)和非感染性刺激因子(如TNF-α、IL-1β)均可刺激免疫細(xì)胞分泌HMGB1。近年來的研究表明：HMGB1能夠抑制衰竭心臟的心肌重構(gòu)[6],給予HMGB1治療可改善心功能、減少心肌梗死面積[7]。與缺血再灌注組相比,給予外源性HMGB1進(jìn)行預(yù)適應(yīng)可使心肌酶LDH.CK、腫瘤壞死因子-α(timor necrosis factor-α, TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(interleukin-6, IL-6)和梗死面積顯著降低[8]。亦有研究表明：機(jī)體內(nèi)源性的HMGB1可促進(jìn)心肌梗死大鼠心肌血管新生和心功能的恢復(fù)。心肌梗死后給與外源性的HMGB1可通過心肌細(xì)胞再生使左室功能得到一定程度的恢復(fù)；內(nèi)源性HMGB1在糖尿病大鼠缺血性血管再生過程中具有決定性作用,給予外源性HMGB1蛋白可通過VEGF依賴方式促進(jìn)糖尿病鼠缺血后肢側(cè)支循環(huán)的形成[9]。提示HMGB1可以減輕心室重構(gòu)、促進(jìn)心肌細(xì)胞再生,對缺血心肌具有保護(hù)作用,從而使心功能得到改善。但也有研究表明：HMGB1表達(dá)增加與阿霉素所致心肌細(xì)胞凋亡有關(guān),應(yīng)用藥物(A-box)或從遺傳角度阻止HMGB1表達(dá)能夠減輕阿霉素所致的心肌細(xì)胞凋亡和心功能不全[10]。心肌細(xì)胞源性HMGB1可通過JNK通路促進(jìn)I/R誘致的在體心肌細(xì)胞凋亡和體外培養(yǎng)心肌細(xì)胞的缺氧復(fù)氧所致的細(xì)胞凋亡。此外,處于缺氧／復(fù)氧條件下的心肌細(xì)胞釋放的HMGB1參與心肌細(xì)胞TNF-a的生成,繼之HMGB1與其心肌上的Toll樣受體4(toll like receptor 4, TLR4)結(jié)合,HMGB1與TNF-a通過活化JNK通路導(dǎo)致心肌細(xì)胞凋亡[11]。上述研究提示：HMGB1可參與藥物和I/R所致的心肌細(xì)胞凋亡,并促進(jìn)心功能的惡化。我們的研究表明：大鼠心肌I/R發(fā)生后,其心肌HMGB1蛋白表達(dá)明顯高于假手術(shù)組,而給辛伐他汀預(yù)處理后,I/R組大鼠心肌HMGB1表達(dá)明顯下降[12]。臨床研究表明：不穩(wěn)定性心絞痛／非ST段抬高性心肌梗死(UA/NSTEMI)患者發(fā)病24小時內(nèi),血清HMGB1升高。入院時血清HMGB1升高是UA/NSTEMI患者心血管原因死亡的獨立預(yù)測指標(biāo)[13]。我們的研究表明：AMI患者入院時,血清HMGB1明顯高于不穩(wěn)定性心絞痛組和對照組,血清HMGB1含量與冠心病患者疾病嚴(yán)重程度正相關(guān),HMGB1升高是AMI患者預(yù)后不良的獨立預(yù)測指標(biāo)之一[14]。我們應(yīng)用辛伐他汀對AMI大鼠進(jìn)行后適應(yīng)的研究發(fā)現(xiàn),在再灌注前靜脈給予辛伐他汀可以引起AMI大鼠心肌損傷標(biāo)志物和氧化應(yīng)激標(biāo)志物的下降、心肌梗死面積的減少；AMI可使大鼠心肌HMGB1的表達(dá)增加,辛伐他汀后適應(yīng)可以顯著降低大鼠心肌HMGB1的表達(dá),并與劑量呈正相關(guān),提示降低HMGB1的比表達(dá)可對再灌注心肌產(chǎn)生保護(hù)作用[15]。也有研究表明：HMGB1對大鼠心肌梗死的作用具有劑量依賴性,大劑量可使心功能惡化,小劑量可以改善心功能[7]。外源性HMGB1可能通過TGF-p/SMDA信號通路防止心肌梗死后心肌發(fā)生不良重構(gòu)[16]�？傊�,目前對外源性HMGB1對缺血心肌的作用尚無定論。磷脂酰肌醇-3-激酶／絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶(Phosphoinositide 3-kinase/ protein kinase B, PI3K/Akt)通路是機(jī)體內(nèi)重要的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路之一。已證實P13K/Akt信號通路在細(xì)胞的存活、凋亡以及增殖等活動中發(fā)揮重要的生物學(xué)功能[17],激活P13K/Akt信號傳導(dǎo)通路可以有效地阻止心肌細(xì)胞凋亡,保護(hù)心肌免受I/R損傷[18]。前期研究亦經(jīng)證實激活PDK/Akt信號傳導(dǎo)通路可以調(diào)節(jié)HMGB1的表達(dá)[19]。PI3K/Akt信號通路參與了HMGB1預(yù)適應(yīng)對MIRI的保護(hù)作用[20]。已有研究證明：外源性HMGB1也可以通過TGF-β/SMDA信號通路防止心肌梗死后心肌發(fā)生不良重構(gòu)。近期研究表明,抑制HMGB1表達(dá)可以減輕心肌I/R造成的心肌損傷和細(xì)胞壞死,但是給予外源性的HMGB1可以加重MIRI損傷[21]。因此,外源性HMGB1對I/R心肌的作用如何,調(diào)控其作用的信號傳導(dǎo)通路是什么,值得進(jìn)一步研究。前期的研究多在梗死心肌局部注射HMGB1,該途徑給藥需開胸創(chuàng)傷大,并發(fā)癥多,其研究結(jié)果不適于臨床研究借鑒,且其結(jié)果與靜脈注射是否存在差異等尚未明了。因此,本研究擬構(gòu)建大鼠心肌I/R模型,經(jīng)靜脈給予HMGB1,探討靜脈HMGB1對I/R心肌的作用,并探討其信號傳導(dǎo)通路。本研究共分兩分部進(jìn)行：第一部分HMGB1對大鼠心肌缺血再灌注損傷的作用；第二部分PI3K/Akt信號通路介導(dǎo)HMGB1對大鼠心肌缺血再灌注損傷作用的調(diào)控機(jī)制。第一部分：HMGB1對大鼠心肌缺血再灌注損傷的作用研究目的通過構(gòu)建在體大鼠急性心肌I/R模型,觀察不同劑量的靜脈HMGB1對I/R大鼠心肌的作用。主要觀察：(1)HMGB1對IL-6、TNF-α和心臟肌鈣蛋白I(cardiac tropnin I,cTNI)等炎癥和心肌損傷標(biāo)志物的影響；(2)觀察心肌組織丙二醛(malonaldehyde, MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)等氧化應(yīng)激產(chǎn)物的改變；(3)對心肌梗死面積和心肌細(xì)胞凋亡率的影響,以探討不同劑量的HMGB1對大鼠MIRI損傷的作用。研究方法取雄性Wistar大鼠(體重250g-300g),隨機(jī)分為假手術(shù)組(Sham,n=15)、缺血再灌注組(I/R, n=15)、I/R+HMGB50組(HMGB50,50ng/kg, n=15)、I/R+ HMGB 100組(HMGB100, 100ng/kg, n=15)、I/R+HMGB200 (組 HMGB200, 200ng/kg, n=15)共5組。I/R+HMGB1各組結(jié)扎心臟冠脈前降支(left anterior descending, LAD) 30min后,再灌注4h,分別按照HMGB150ng/kg,100ng/kg和200ng/kg的劑量溶于0.5ml生理鹽水中,于再灌注前10min經(jīng)尾靜脈注射。Sham組只放置結(jié)扎線,不結(jié)扎LAD血管。于再灌注4h后,進(jìn)行下述測定：1、酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme link immunosorb assay, ELISA)測定血清IL-6、TNF-α、cTnI和心肌組織MDA含量和SOD活性；3、心肌梗死范圍測定；2、病理學(xué)觀察(H.E.染色)；4、TUNEL(Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end-labeling, TUNEL)法檢測心肌細(xì)胞凋亡。研究結(jié)果1、如圖1所示：圖1(a)為正常心電圖表現(xiàn),為竇性心律。結(jié)扎LAD30min后,心動圖ST段弓背上抬,提示LAD結(jié)扎成功[圖1(b)]所示。松開結(jié)扎線,恢復(fù)LAD再灌注后,出現(xiàn)室性心律失常,即再灌注心律失常[圖1(c)]所示。I/R組大鼠中共有8只(53.3%)發(fā)生室性早搏,2只發(fā)生心室顫動(未完成實驗,剔除未統(tǒng)計)。HMGB1干預(yù)各組室性心律失常的發(fā)生率下降(p0.05):HMGB50組7只(46.7%)出現(xiàn)室性早搏,1只發(fā)生心室顫動；HMGB100組6只(40.0%),2只發(fā)生心室顫動；HMGB200組6只(40.0%),1只發(fā)生心室顫動。所有發(fā)生心室顫動的大鼠均死亡,未列入研究統(tǒng)計,最后各組完成實驗的各組大鼠均為15只。表明HMGB1干預(yù)可以減少I/R大鼠室性心律失常的發(fā)生(p0.05)2、如表1(a-e)和圖(2-6)所示,I/R組血清IL-6(377.46±16.86/166.87±15.45pg/ml)、TNF-α(77.23±1.01/16.68±2.57 pg/ml)、cTnl (78.46±8.6/0.13±0.12 μg/l)和心肌MDA含量顯著高于sham組(8.59±0.71/1.48±0.17nmol/mg,均p0.01)；心肌SOD活性明顯低于sham組(71.33±±5.81/140.77±±10.55u/mg,p0.01)。與I/R組比較,HMGB50、HMGB100和HMGB200各組血清IL-6(296.97±24.08、271.05±±16.94和227.62±16.22 pg/ml,均p0.01)、TNF-a(58.62±5.83、52.69±6.74和45.7±8.71 pg/ml,均p0.01)、cTnI(66.26±6.87、58.74±±7.05和52.40±6.70μg/l,均p0.01)和心肌MDA(6.81±1.43、5.50±0.88和3.88±1.12 nmol/mg,均p0.01)含量顯著降低,心肌SOD含量(83.47±5.75、92.55±6.01和117.26±10.31 u/mg,均p0.01)明顯升高,并呈劑量依賴性。3、如表1(f)和圖8所示,與I/R組[(56.30±4.47)%]比較,HMGB50、 HMGB100和HMGB200各組心肌梗死面積[(45.80±4.37)%、(40.60±5.04)%和(34.10±5.99)%,均p0.01]明顯降低。如圖7所示,正常灌注心肌呈藍(lán)色、缺血危險區(qū)心肌呈磚紅色、梗死區(qū)心肌呈白色。4、如圖9所示,I/R組心肌纖維紊亂,梗死區(qū)心肌細(xì)胞核溶解。各HMGB1處理組上述改變明顯減輕,劑量越大,改變越輕微。5、如表1(g)和圖(10-11)所示,I/R組心肌細(xì)胞凋亡率顯著高于sham組[(29.09±2.41)%/(5.43±1.58)%,p0.01]。與I/R組相比,HGB50、HMGB100和HMGB200各組心肌細(xì)胞凋亡率[(29.09±2.41)%/(24.90±4.43)%、(16.04±1.99)%和(13.39±1.64)%,均p0.01]下降,HMGB1劑量越高,細(xì)胞凋亡率越低。結(jié)論1、心肌缺血再灌注損傷表現(xiàn)為心肌細(xì)胞嚴(yán)重壞死,心肌纖維結(jié)構(gòu)紊亂,炎性細(xì)胞浸潤；血清IL-6、TNF-a和c-TnI等心肌炎癥和損傷標(biāo)志物升高；心肌MDA含量升高和SOD含量下降等氧化應(yīng)激產(chǎn)物變化。2、HMGB1可以減輕心肌缺血再灌注損傷,對心肌產(chǎn)生保護(hù)作用。抑制炎癥反應(yīng)和減輕氧化應(yīng)激、抑制心肌細(xì)胞凋亡,可能是HMGB1減少心肌梗死面積,對缺血再灌注心肌損傷保護(hù)的作用機(jī)制之一。第二部分：PI3K/Akt信號通路介導(dǎo)HMGB1對大鼠心肌缺血再灌注損傷保護(hù)的調(diào)控機(jī)制研究目的構(gòu)建在體大鼠急性心肌I/R模型,觀察靜脈注射HMGB1對心肌I/R大鼠血清IL-6、TNF-α、c-TnI和心肌組織MDA含量、SOD活性及其心肌梗死面積的影響。探討靜脈HMGB1對大鼠再灌注心肌的保護(hù)作用,并應(yīng)用P13K抑制劑渥曼青霉素(Wortmannin),探討PI3K/Akt信號通路介導(dǎo)HMGB1保護(hù)心肌缺血再灌注損傷的調(diào)控作用及其機(jī)制。研究方法取雄性Wistar大鼠(體重250g-300g),隨機(jī)分為五組,即假手術(shù)組(Sham,n=20)、缺血再灌注組(I/R,n=20).I/R+HMGB200組(n=20).I/R+Wortmannin組(I/R+Wortmannin,n=20).I/R+HMGB200+Wortmannin組(I/R+HMGB200 +Wortmannin,n=20).I/R+HMGB200組：結(jié)扎LAD 30min,再灌注4h;HMGB1(200ng/kg)溶于0.5ml生理鹽水中,分別于再灌注前10min注射HMGB1和15min尾靜脈注射0.5ml生理鹽水；I/R+Wortmannin組：結(jié)扎LAD 30min,再灌注4h,渥曼青霉素(20μg/kg)溶于0.5ml二甲基亞砜中,再灌注前10min和15min分別尾靜脈注射0.5ml生理鹽水和渥曼青霉素；I/R+HMGB200+Wortmannin組：結(jié)扎LAD 30min,再灌注4h。HMGB1(200ng/kg)和渥曼青霉素(20μg/kg)分別溶于0.5ml生理鹽水和二甲基亞砜中,分別于再灌注前10min和15min尾靜脈注射。再灌注4h后：1、ELISA法測定血清IL-6、TNF-α、cTnI含量,并測定心肌組織中MDA和SOD含量；2、TTC方法測定心肌梗死面積；3、病理學(xué)觀察(H.E.染色)；4、TUNEL法檢測心肌細(xì)胞凋亡；5.Westen blotting測定t-Akt、p-Akt、缺氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxic inducible factor-1α,HIF-1α)和血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白的表達(dá)。再灌注4h后,各組大鼠均留取4只存活四周后做下述檢測：1、超聲心動圖觀測心功能的變化；2.Masson染色觀測心肌纖維化的程度。研究結(jié)果1、各組血清IL-6、TNF-α、cTNI和心肌組織MDA含量和SOD活性的比較：如表1(a-e)和圖(1-5)所示,I/R組、I/R+HMGB200組、I/R+Wortmannin組和 I/R+HMGB200+Wortmannin組血清IL-6(377.46±16.86 pg/ml,227.62±16.22 pg/ml, 363.45±11.59 pg/ml and 363.28±11.42 pg/ml).TNF-α(77.23±1.01 pg/ml,45.70± 8.71 pg/ml,74.32±1.42 pg/ml and 76.35±3.35 pg/ml).cTnI(78.46±8.60 ng/ml, 52.40±6.70 ng/ml,73.53±4.53ng/ml and 77.58±6.24 ng/ml)和MDA(8.59±0.71 nmol/mg,3.88±1.12 nmol/mg,7.04±0.53 nmol/mg and 9.04±0.42 nmol/mg)顯著高于Sham組,SOD含量降低(71.33±5.81 u/mg,117.26±10.31 u/mg,68.43±3.55 u/mg and 75.28±7.53 u/mg,均P0.01).I/R組(377.46±16.86 pg/ml,77.23±1.0 pg/ml,78.46±8.60 ng/ml,8.59±0.71 nmol/mg)、I/R+Wortmannin組(363.45±11.53 pg/ml,74.32±1.42pg/ml, 73.53±4.53ng/ml,7.04±0.53 nmol/mg)和I/R+HMGB200+Wortmannin組 (363.28±11.42 pg/ml,76.35±3.35 pg/ml,77.58±6.24 ng/ml,9.04±0.42 nmol/mg)血清IL-6、TNF-α、cTNI和心肌MDA含量顯著高于I/R+HMGB200組(227.62±16.22 pg/ml,45.70±8.71 pg/ml,52.40±6.70 ng/ml,3.88±1.1 nmol/mg)(均p0.01),SOD含量顯著低于I/R+HMGB200組(71.33±5.81 u/mg,68.43±3.55u/mg and 75.28±7.53 u/mg,vs 140.77±10.55 u/mg,均P0.01)；I/R組與I/R+HMGB200+wortmannin組相比無明顯差異。2、各組大鼠心肌梗死面積的比較：如圖(6-7)和表1(f)所示,與I/R組[(56.30±4.47)%],I/R+wortmannin組[(55.35±5.25)%]和I/R+HMGB200+wortmannin組[(53.55±3.25)%]比較,I/R+HMGB200處理組心肌梗死面積[(34.10±5.99)%]明顯降低(均P0.01)；I/R組與I/R+HMGB200+wortmannin組比較無明顯差別。3、HE染色觀察結(jié)果：如圖8所示,sham組可見心肌組織中無炎細(xì)胞浸潤,心肌纖維排列規(guī)則；I/R組,I/R+wortmannin組和I/R+HMGB200+wortmannin組可見有大量炎細(xì)胞浸潤,心肌細(xì)胞水腫,肌纖維溶解斷裂；HMGB1處理組可見有少量炎細(xì)胞浸潤,肌纖維排列大致正常。4、各組心肌細(xì)胞凋亡結(jié)果：如圖(9-10)和表1(g)所示,與sham組[(5.43±1.58)%]相比,I/R組[(29.09 ±2.41)%]、I/R+HMGB200組[(13.39±1.64)%]、I/R+wortmannin組[(25.64±3.53)%]和I/R+HMGB200+wortmannin組[(27.13±3.53%]心肌細(xì)胞凋亡率顯著增加(均p0.01)。I/R+ wortmannin組[(25.64±3.53)%]和I/R+HMGB200+wortmannin組[(27.13±3.53)%]心肌細(xì)胞凋亡率明顯高于I/R+HMGB200 [(13.39 ± 1.6)%](均p0.01)。5、如圖11所示p-Akt、HIF-1α和VEGF蛋白表達(dá)的比較：與sham組比較,I/R組、I/R+HMGB200組、I/R+wortmannin組和I/R+ HMGB200+wortmannin組p-Akt、HIF-1α和VEGF蛋白的表達(dá)顯著增加(p0.01)；與I/R組比較,I/R+wortmannin組p-Akt、HIF-1α和VEGF蛋白的表達(dá)顯著增加(p0.01),I/R+wortmannin組和I/R+HMGB200+wortmannin組與I/R組無明顯差異。與I/R+HMGB200組比較,I/R+wortmannin組和I/R+HMGB200+wortmannin組p-Akt、HIF-1α和VEGF蛋白表達(dá)明顯降低(P0.01)。6、超聲心動圖心功能參數(shù)的變化：如圖(12-15)和表1(h-k)所示,與sham組相比,I/R組左室收縮期內(nèi)徑(LVIDs) (5.55 ± 1.13 mm vs 4.11 ± 0.85 mm, p0.01)、左室舒張期內(nèi)徑(LVIDd) (6.61 ± 0.85 mm vs 4.04 ± 0.28 mm, p0.01)、左室舒張末期容積(LVEDV) (0.71 ± 0.16 ml vs 0.41 ± 0.02 ml, p0.01)、左室收縮末期容積(LVESV) (0.50 ± 0.22 ml vs 0.28 ± 0.07 ml, p0.05)和左室質(zhì)量指數(shù)(LV Mass) (1.43 ± 0.11 g vs 1.13 ± 0.08 g, p0.01)明顯增加,左室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)(46.68±3.92%vs 89.90±7.13%,p0.01)和左室縮短分?jǐn)?shù)(FS)(37.90±13.07%vs 77.09±5.64%,p0.01)顯著下降。與I/R組相比,I/R+HMGB200組左室收縮期內(nèi)徑(LVIDs)(4.48±0.60mmvs 5.55±1.13mm,p0.01)、左室舒張期內(nèi)徑(LVIDd)(5.07±0.64 mm vs 6.61±0.85mm,p0.05)、左室舒張末期容積(LVEDV)(0.54±0.10 ml vs 0.71±0.16 ml,p0.01)、左室收縮末期容積(LVESV)(0.29±O.12 ml vs0.50±0.22 ml,p0.05)和左室質(zhì)量指數(shù)(LV Mass)(1.20±0.11 g vs 1.43士0.11 g,p0.01)明顯降低,左室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)(77.39±4.98% vs 46.68±3.92%,p0.01)和左室縮短分?jǐn)?shù)(FS)(59.71±13.40%vs 37.90±13.07%,p0.01)增加。與I/R+HMGB200組相比,I/R+wortmannin組和I/R+HMGB200+wortmannin組左室收縮期內(nèi)徑(LVIDs)(4.48±0.60 mm vs 6.28士0.64 and 5.89±0.59 mm,均p0.01)、左室舒張期內(nèi)徑(LVIDd)(5.07±0.64 mm vs 6.73士0.78 mm 和6.21士1.0 mm,p0.01、p0.05)、左室舒張末期容積(LVEDV)(0.54±O.10 ml vs 0.78士0.06 ml和0.72±0.12 ml,p0.01)、左室收縮末期容積(LVESV)(0.29±0.12 mlvs 0.45±0.07 ml和0.43±0.11 ml,p0.05)和左室質(zhì)量指數(shù)(LV Mass)(1.20±0.11 g vs 1.50±1.17 g和1.41±0.44 g,均p0.01)明顯增加,左室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)(77.39±4.98%vs 42.88±6.36%和45.87±6.22%,p0.01)和左室縮短分?jǐn)?shù)(FS)(59.71±13.40%vs 25.02±3.49%和39.70±8.43%,p0.01)顯著降低。7.Masson染色觀測心肌纖維化的程度：如圖(16-17)和表1(1)所示,與sham相比,I/R組心肌CVF明顯增加(1.29±0.41%vs 35.31±3.92%,p0.01)。與I/R組比較,I/R+HMGB200處理組CVF值明顯下降(35.31±7.92% vs 10.94±1.54%,p0.01)。與I/R+HMGB200處理組相比,I/R+wortmannin組和I/R+HMGB200+wortmannin組CVF值顯著升高(10.94±1.54%vs 34.10±2.76%和29.02±2.01%,均p0.01)結(jié)論1、心肌缺血再灌注損傷表現(xiàn)為心肌細(xì)胞壞死、血清心肌損傷標(biāo)志物cTnI和血清炎癥因子(如IL-6和TNF-α)以及氧化應(yīng)激產(chǎn)物MDA升高、心肌纖維結(jié)構(gòu)紊亂、心肌纖維化以及p-Akt、HIF-1α和VEGF蛋白表達(dá)降低和心功能下降。2、靜脈HMGB1干預(yù)可以減輕心肌缺血再灌注損傷,表現(xiàn)為心肌梗死面積縮小、心肌細(xì)胞凋亡率下降、心肌損傷標(biāo)志物降低、心肌組織p-Akt、HIF-la和VEGF蛋白表達(dá)增加、心肌纖維化明顯減輕,從而對缺血再灌注心肌產(chǎn)生保護(hù)作用。3、PI3K/Akt信號通路的激活介導(dǎo)了HMGB1對心肌缺血再灌注損傷保護(hù)的調(diào)控。
【關(guān)鍵詞】：缺血再灌注 心肌 高遷移率族蛋白 大鼠 心肌 缺血再灌注 高遷移率族蛋白1 渥曼青霉素 PI3K/Akt信號通路
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R542.2
【目錄】：

• 中文摘要6-17
• ABSTRACT17-28
• 符號說明28-30
• 第一部分 HMGB1對大鼠心肌缺血再灌注損傷的作用30-71
• 前言30-31
• 材料和方法31-40
• 結(jié)果40-42
• 討論42-49
• 創(chuàng)新性和局限性49
• 結(jié)論49-50
• 附圖表50-60
• 參考文獻(xiàn)60-71
• 第二部分 PI3K/Akt信號通路介導(dǎo)HMGB1在大鼠心肌缺血再灌注保護(hù)的調(diào)控機(jī)制71-129
• 前言71-73
• 材料和方法73-83
• 結(jié)果83-87
• 討論87-94
• 創(chuàng)新性和局限性94-95
• 結(jié)論95-96
• 附圖表96-115
• 參考文獻(xiàn)115-129
• 致謝129-130
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文130-131
• 學(xué)位論文評閱及答辯表131-132
• 英文論文1132-146
• 英文論文2146-156

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本文編號：719020