本文關(guān)鍵詞：5-羥色胺與機體痛覺相關(guān)性研究

  更多相關(guān)文章： 福爾馬林疼痛模型 五羥色胺 五羥色胺受體 五羥色胺轉(zhuǎn)運體 基因型 c-Fos蛋白

【摘要】：疼痛是臨床工作中最為常見的一種癥狀,常常給患者帶來了極大的痛苦。傷害性損傷是導(dǎo)致疼痛發(fā)生的主要原因,外周神經(jīng)損傷以及組織損傷均可導(dǎo)致發(fā)生疼痛。研究顯示,疼痛的發(fā)生機制主要分為以下兩種：一為外周傷害性的信息不斷傳入；二為機體脊髓內(nèi)的感覺神經(jīng)元興奮性出現(xiàn)變化。5-羥色胺(5-HT)在機體的中樞神經(jīng)以及外周神經(jīng)系統(tǒng)當(dāng)中均勻分布。在外周神經(jīng)系統(tǒng)中,5-HT主要的來源為肥大細(xì)胞以及血小板。根據(jù)對拮抗劑、特異激動劑選擇性的不同,將5-HT的受體分為以下7種類型,即5-HT1、5-HT2、5-HT3、5-HT4、 5-HT5、5-HT6以及5-HT7受體,同時根據(jù)這7中亞型的分子結(jié)構(gòu)以及其亞基的不同,又可將其細(xì)分為14種不同的亞型。根據(jù)目前研究顯示5-羥色胺、5-羥色胺受體以及5-羥色胺轉(zhuǎn)運體均與病理性神經(jīng)痛有著密切的關(guān)系。對疼痛的感受因人而異,很多因素都會影響人對傷害性刺激的感受。以往的痛感誘導(dǎo)實驗結(jié)果表明,遺傳學(xué)因素可占到25～60%不等。此外,也有研究表明,遺傳學(xué)因素也與長期持續(xù)性疼痛狀況的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。本實驗分為總體分為兩大部分：一、5-HTT (5-Hydroxytryptamine transporter) SS基因型與乙醇刺激造成的促傷害性感知相關(guān)研究；二、延胡索乙素對福爾馬林致痛大鼠L4-L5段脊髓灰質(zhì)后角內(nèi)5-HT以及相關(guān)受體和轉(zhuǎn)運體表達變化的影響。第—部分：本研究的目的在于探索5-HTT基因型與醫(yī)用酒精消毒時刺痛的敏感性之間的關(guān)系。作者首次從臨床的角度研究編碼5-羥色胺轉(zhuǎn)運體(5-HTT)的基因SLC6A4的啟動子上基因多態(tài)性與傷害性刺激敏感度之間的關(guān)系。217位在小腿外側(cè)區(qū)域輕度皮膚擦傷的門診患者被招募進入本研究,所有的血液樣本通過聚合酶鏈擴增(PCR)及酶切技術(shù)進行了基因分型。招募對象對醫(yī)用酒精處理后的痛感強度采用視覺模擬評分法(VAS)來進行評價。第二部分：通過足底注射福爾馬林的方法建立福爾馬林足底疼大鼠模型,并對其進行行為學(xué)觀察,以縮腿及舔爪時間之和作為行為學(xué)的反應(yīng)指標(biāo),以及L4-L5腰段脊髓灰質(zhì)后角內(nèi)c-Fos蛋白表達的測定來判斷福爾馬林致痛模型是否成功。接著通過免疫組織化學(xué)的方法對L4-L5腰段脊髓灰質(zhì)后角內(nèi)5-HT、5-HTT、5-H2A受體觀察,同時利用westernblot的方法測定了上述幾種物質(zhì)的表達量在由福爾馬林足底致痛過程中疼痛感覺之間的關(guān)系,通過不同時間段對c-Fos蛋白、5-HT、5-H2A受體、5-HTT這四者的表達測定,探索了c-Fos蛋白、5-HT、5-H2A受體、5-HTT這四者與時間變化關(guān)系。實驗結(jié)果第一部分：1.5-HTT基因型組的分布通過對217位受試者基因型的測定,發(fā)現(xiàn)有61位受試者被確定為5-HTT低表達,其中男性占36.06%,女性占63.93%；86位受試者5-HTT中等表達,男性占18.60%,女性占81.40%；70位受試者5-HTT高表達,男性占32.86%,女性占67.14%。高、中、低表達人員分別占總受試者人數(shù)的28.11%、39.63%和32.25%。2.VAS評分的基線標(biāo)準(zhǔn)化滅菌生理鹽水處理被用作VAS評分的基線。盡管5-HTT低表達組的VAS平均得分高于其它兩個組,但均無顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(p0.05)。實驗結(jié)果顯示,采用滅菌生理鹽水處理對各組的VAS基線均無明顯的影響。此外,性別間也未觀察到明顯差異。3.依賴于5-HTT基因型的敏感性基于標(biāo)準(zhǔn)化的VAS評分基線,3種5-HTT基因型分組對乙醇刺激痛的敏感性的VAS評分有顯著的差異。與5-HTT高表達和中等表達組相比,編碼5-HTT低表達基因型組的受試者對乙醇的刺激痛表現(xiàn)出了較強的反應(yīng),而在5-HTT高表達和中等表達組之間無顯著統(tǒng)計學(xué)差異。在每組中,性別間差異未有體現(xiàn)。第二部分1.延胡索乙素對福爾馬林足底致痛大鼠行為學(xué)的影響通過實驗發(fā)現(xiàn),大鼠足底注射福爾馬林之后所產(chǎn)生的行為學(xué)反應(yīng)主要是明顯的縮腿舔爪反應(yīng)。即注射福爾馬林側(cè)足出現(xiàn)卷曲縮退和用舌舔患部的舔爪反應(yīng)。動物的這種反應(yīng)在注射福爾馬林后的第一個5min內(nèi)大鼠開始有舔爪反應(yīng),而且非常明顯,但在第二個5min內(nèi)舔爪反應(yīng)明顯下降,而之后的第三個5min開始大鼠舔爪反應(yīng)不斷直至結(jié)束。另外,與福爾馬林模型組相比布洛芬組大鼠與延胡索乙素組(大、中、小)大鼠的舔爪縮腿時間明顯減少(P0.05,n=6)；2.福爾馬林足底致痛大鼠脊髓后角c-Fos蛋白、5-HT、5-HT2A受體以及5-HTT表達隨時間變化大鼠給予足底注射福爾馬林后30、60、90main時L4-L5腰段脊髓灰質(zhì)后角均有c-Fos蛋白、5-HT、5-HT2A受體以及5-HTT的表達,且均在60min時,表達最明顯。3.延胡索乙素對福爾馬林足底致痛大鼠脊髓后角c-Fos蛋白表達影響大鼠足底注射福爾馬林后60min時,模型組大鼠L4-L5腰段脊髓灰質(zhì)后角內(nèi)c-Fos表達量明顯高于正常組大鼠(P0.05,n=6)；而布洛芬組大鼠以及延胡索乙素組(大、中、小)大鼠的c-Fos表達量明顯低于模型組(P0.05,n=6)。4.延胡索乙素對福爾馬林足底致痛大鼠脊髓后角5-HT表達影響注射福爾馬林后60min后,模型組大鼠L4-L5腰段脊髓灰質(zhì)后角內(nèi)5-HT表達量明顯增加,與正常組大鼠相比差異顯著(P0.05,11=6)；而布洛芬組大鼠以及延胡索乙素組(大、中、小)大鼠的5-HT表達量明顯低于模型組(P0.05,n=6)。5.延胡索乙素對福爾馬林足底致痛大鼠脊髓后角5-HT2A受體表達影響福爾馬林注射后60min時,模型組大鼠L4-L5腰段脊髓灰質(zhì)后角內(nèi)5-HT2A受體表達量比正常組大鼠明顯增高(P0.05,n=6)；而布洛芬組大鼠以及延胡索乙素組(大、中、小)大鼠的表達量則明顯低于模型組(P0.05,n=6)。6.延胡索乙素對福爾馬林足底致痛大鼠脊髓后角5-HTT表達影響足底注射福爾馬林制備明顯60min后,模型組L4-L5脊髓灰質(zhì)后角內(nèi)5HT表達量明顯高于正常組大鼠(P0.05,n=6)；而布洛芬組大鼠以及延胡索乙素組(大、中、小)表達量明顯低于模型組(P0.05,n=6)。結(jié)論1.機體的疼痛感覺敏感性與5-HTT的相關(guān)基因存在一定的關(guān)聯(lián)；2.福爾馬林止痛模型誘導(dǎo)的L4-L5脊髓灰質(zhì)后角內(nèi)c-Fos、5-HT、5-HT2A受體以及5-HT轉(zhuǎn)運體的表達存在時間段表達性差異,在60min時達到表達高峰；3.c-Fos、5-HT、5-HT2A受體以及5-HT轉(zhuǎn)運體的表達參與了由福爾馬林誘導(dǎo)的機體疼痛感覺過程；4.延胡索乙素對由福爾馬林引起的疼痛效應(yīng)具有一定的抑制作用且中、高劑量的延胡索乙素的抑制作用比布洛芬的效果更加顯著,該作用可能是通過調(diào)節(jié)5-HT以及其相關(guān)受體和轉(zhuǎn)運體來實現(xiàn)。
【關(guān)鍵詞】：福爾馬林疼痛模型 五羥色胺 五羥色胺受體 五羥色胺轉(zhuǎn)運體 基因型 c-Fos蛋白
【學(xué)位授予單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R402
【目錄】：

• 摘要9-13
• ABSTRACT13-18
• 英文縮寫詞表18-19
• 第一章 前言19-22
• 第二章 材料與方法22-31
• 2.1 5-HTT SS基因型與乙醇刺激造成的促傷害性感知相關(guān)研究22-24
• 2.1.1 實驗方法22-24
• 2.1.1.1 受試對象22
• 2.1.1.2 疼痛評分22
• 2.1.1.3 實驗儀器與試劑22-23
• 2.1.1.4 基因分型23
• 2.1.1.5 統(tǒng)計學(xué)分析23-24
• 2.2 延胡索乙素對福爾馬林致痛大鼠L4-L5段脊髓灰質(zhì)后角內(nèi)5-HT以及相關(guān)受體和轉(zhuǎn)運體表達變化的影響24-31
• 2.2.1 實驗材料24-27
• 2.2.1.1 實驗動物24
• 2.2.1.2 實驗儀器24-25
• 2.2.1.3 藥品25-26
• 2.2.1.4 實驗藥物配制26-27
• 2.2.2 實驗方法27-31
• 2.2.2.1 實驗分組27
• 2.2.2.2 福爾馬林足底致痛模型制備27
• 2.2.2.3 行為學(xué)指標(biāo)觀察27
• 2.2.2.4 免疫組織化學(xué)染色法27-29
• 2.2.2.4.1 L4-L5腰段脊髓組織的固定、取材、切片28
• 2.2.2.4.2 免疫組織化學(xué)染色28-29
• 2.2.2.5 Western blotting(蛋白質(zhì)的免疫印跡分析)29-30
• 2.2.2.6 統(tǒng)計學(xué)處理30-31
• 第三章 實驗結(jié)果31-48
• 3.1 5-HTT SS基因型與乙醇刺激造成的促傷害性感知相關(guān)研究31-34
• 3.1.1 5-HTT基因型組的分布31-32
• 3.1.2 VAS評分的基線標(biāo)準(zhǔn)化32-33
• 3.1.3 依賴于5-HTT基因型的敏感性33-34
• 3.2 延胡索乙素對福爾馬林致痛大鼠L4-L5段脊髓灰質(zhì)后角內(nèi)5-HT以及相關(guān)受體和轉(zhuǎn)運體表達變化的影響34-48
• 3.2.1 延胡索乙素對福爾馬林足底致痛大鼠行為學(xué)的影響34-35
• 3.2.2 福爾馬林足底痛對大鼠脊髓后角C-FOS、5-HT、5-H2A、5-HTT表達的影響35-40
• 3.2.2.1 福爾馬林足底致痛大鼠脊髓后角C-FOS蛋白表達隨時間變化35-36
• 3.2.2.2 福爾馬林足底致痛大鼠脊髓后角5-HT表達隨時間變化36-37
• 3.2.2.3 福爾馬林足底致痛大鼠脊髓后角5-H2A受體表達隨時間變化37-39
• 3.2.2.4 福爾馬林足底致痛大鼠脊髓后角5-HTT表達隨時間變化39-40
• 3.2.3 延胡索乙素對福爾馬林足底致痛大鼠脊髓后角C-FOS、5-HT、5-H2A、5-HTT表達的影響40-48
• 3.2.3.1 延胡索乙素對福爾馬林足底致痛大鼠脊髓后角C-FOS蛋白表達影響41-42
• 3.2.3.2 延胡索乙素對福爾馬林足底致痛大鼠脊髓后角5-HT表達影響42-44
• 3.2.3.3 延胡索乙素對福爾馬林足底致痛大鼠脊髓后角5-H2A受體表達影響44-45
• 3.2.3.4 延胡索乙素對福爾馬林足底致痛大鼠脊髓后角5-HTT表達影響45-48
• 第四章 討論48-54
• 4.1 5-HTT SS基因型與乙醇刺激造成的促傷害性感知相關(guān)研究48-50
• 4.2 延胡索乙素對福爾馬林致痛大鼠L4-L5段脊髓灰質(zhì)后角內(nèi)5-HT以及相關(guān)受體和轉(zhuǎn)運體表達變化的影響50-54
• 第五章 結(jié)論54-55
• 參考文獻55-61
• 文獻綜述61-95
• 參考文獻82-95
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文95-96
• 致謝96

【參考文獻】

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本文編號：714966