本文關(guān)鍵詞：非小細(xì)胞肺癌中PD-L1的表達(dá)調(diào)控及其機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 非小細(xì)胞肺癌 表皮生長(zhǎng)因子受體酪氨酸激酶抑制劑 PD-L1 NF-κB

【摘要】：研究背景及目的肺癌是世界上發(fā)病率最高的實(shí)體瘤之一,而其中非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)又占據(jù)了大部分比例。雖然針對(duì)NSCLC的治療方法如傳統(tǒng)手術(shù)、基于鉑類藥物的化療以及放療等都有迅速的發(fā)展,但是進(jìn)展期及發(fā)生轉(zhuǎn)移的NSCLC患者仍舊預(yù)后不良。因此,著力探索更新更有效的臨床治療策略是一個(gè)亟待解決的問(wèn)題�，F(xiàn)今,靶向表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)的治療藥酪氨酸激酶抑制劑(TKI)吉非替尼和厄洛替尼已經(jīng)成為了治療存在EGFR突變NSCLC患者的一線藥物。同時(shí),靶向免疫“檢查點(diǎn)”如PD-1、PD-L1和CTLA-4的治療藥也已經(jīng)被報(bào)道能顯著延長(zhǎng)腫瘤患者的中位無(wú)進(jìn)展生存期。但是,如何設(shè)計(jì)更合理的治療策略以及如何聯(lián)合以上兩種新治療措施以達(dá)到更好療效仍舊所知甚少。最近有研究發(fā)現(xiàn),具有EGFR突變的NSCLC細(xì)胞株會(huì)比具有其它突變類型的細(xì)胞株表達(dá)更高水平的PD-L1,但是其潛在的調(diào)節(jié)機(jī)制未有報(bào)道。本課題著力于尋找不同NSCLC細(xì)胞株EGFR突變狀態(tài)和PD-L1表達(dá)的相關(guān)性并考察EGFR-TKIs對(duì)EGFR-TKI敏感型以及獲得性耐藥型兩種NSCLC細(xì)胞株在體內(nèi)及體外模型中的影響,同時(shí)探討該作用的相關(guān)機(jī)制。因此,該項(xiàng)工作能夠?yàn)榕R床抗腫瘤免疫治療的完善提供新的策略。研究方法1.NSCLC細(xì)胞株EGFR突變狀態(tài)和PD-L1表達(dá)的相關(guān)性分析提取NSCLC細(xì)胞株的總DNA并用PNA-LNA PCR檢測(cè)EGFR突變狀態(tài)。流式細(xì)胞分析檢測(cè)NSCLC細(xì)胞株的PD-L1表達(dá)水平。在NSCLC細(xì)胞株的培養(yǎng)環(huán)境中加入人源性重組EGF并用流式細(xì)胞分析和實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)其PD-L1的表達(dá)。2.EGFR-TKIs對(duì)EGFR-TKI敏感型和獲得性耐藥型NSCLC細(xì)胞株P(guān)D-L1表達(dá)的影響體外實(shí)驗(yàn)部分,在NSCLC細(xì)胞株培養(yǎng)環(huán)境中加入不同劑量梯度(0、2.5、5、10、100nM)的吉非替尼刺激一定時(shí)間(48小時(shí))或者加入同一劑量(100n M)吉非替尼刺激不同時(shí)間(0、6、12、24、48小時(shí)),通過(guò)流式細(xì)胞分析和免疫熒光檢測(cè)其PD-L1的表達(dá)。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)部分,裸鼠皮下注射nsclc細(xì)胞株,待腫瘤長(zhǎng)至一定大小給予吉非替尼灌胃治療,之后測(cè)量腫瘤的體積和重量以及用流式細(xì)胞分析和免疫熒光檢測(cè)腫瘤組織中pd-l1的表達(dá)水平。3.nsclc細(xì)胞株中egfr介導(dǎo)的pd-l1表達(dá)上調(diào)過(guò)程的機(jī)制研究體外實(shí)驗(yàn)部分,用westernblotting檢測(cè)不同nsclc細(xì)胞株中nf-κbp65在胞漿和胞核的表達(dá)水平。用不同劑量(0、50、100μm)的nf-κb抑制劑pdtc刺激nsclc細(xì)胞株一段時(shí)間并用流式細(xì)胞分析檢測(cè)其pd-l1表達(dá)。在nsclc細(xì)胞株培養(yǎng)環(huán)境中用不同劑量(0、2.5、5、10、100nm)吉非替尼刺激一段時(shí)間,用westernblotting分別檢測(cè)其胞漿和胞核nf-κbp65的表達(dá)水平。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)部分,在上述的吉非替尼治療的裸鼠荷瘤模型中,用免疫熒光檢測(cè)各組裸鼠腫瘤組織中nf-κbp65的表達(dá)水平。研究結(jié)果1.nsclc細(xì)胞株中egfr活化水平和pd-l1表達(dá)相關(guān)pna-lnapcr發(fā)現(xiàn)nsclc細(xì)胞株pc-9、hcc827和h1650具有egfr基因第19號(hào)外顯子的突變而h460、h1299和spc-1a的egfr基因無(wú)突變。流式細(xì)胞分析顯示egfr突變型細(xì)胞株的pd-l1比egfr野生型細(xì)胞株的pd-l1表達(dá)更高。流式細(xì)胞分析和定量pcr顯示外源性rhegf刺激egfr野生型細(xì)胞株后能有效上調(diào)其pd-l1的表達(dá)。2.吉非替尼能夠可逆性降低egfr突變型nsclc細(xì)胞株pd-l1的表達(dá),且該作用具有濃度和時(shí)間依賴性流式細(xì)胞分析和免疫熒光顯示不同濃度的吉非替尼刺激pc-9和hcc827一段時(shí)間或者一定濃度吉非替尼刺激pc-9和hcc827不同持續(xù)時(shí)間都能降低其pd-l1的表達(dá)水平,且降低程度與藥物作用的濃度及時(shí)間呈正相關(guān)。同時(shí),流式細(xì)胞分析發(fā)現(xiàn)撤去吉非替尼的刺激或者同時(shí)加入外源性rhegf能夠恢復(fù)吉非替尼預(yù)處理的pc-9細(xì)胞株pd-l1的表達(dá)水平。3.吉非替尼能夠降低egfr-tki獲得性耐藥nsclc細(xì)胞株的pd-l1表達(dá),并且該作用具有濃度和時(shí)間依賴性流式細(xì)胞分析顯示吉非替尼也能夠有效降低吉非替尼獲得性耐藥pc-9細(xì)胞株pd-l1的表達(dá),并且pd-l1降低程度與吉非替尼作用的濃度和持續(xù)時(shí)間呈正相關(guān)。4.在pc-9細(xì)胞株異種種植裸鼠模型中,吉非替尼的治療能夠抑制腫瘤的生長(zhǎng)并且降低腫瘤組織pd-l1的表達(dá)水平吉非替尼治療能夠有效減少裸鼠pc-9皮下種植瘤的體積和重量。同時(shí),流式細(xì)胞分析和免疫熒光顯示吉非替尼治療組裸鼠腫瘤組織中PD-L1的表達(dá)水平比對(duì)照組腫瘤組織的表達(dá)水平明顯升高。5.NF-κB通路參與EGFR-TKI對(duì)PD-L1的調(diào)控過(guò)程Western Blotting結(jié)果顯示,相較于EGFR突變型NSCLC細(xì)胞株,在EGFR野生型細(xì)胞株中NF-κB p65在胞漿的表達(dá)水平更高而在胞核的表達(dá)水平更低。流式細(xì)胞分析發(fā)現(xiàn)NF-κB抑制劑PDTC處理PC-9細(xì)胞株其PD-L1的表達(dá)水平明顯升高且升高程度依賴于PDTC的劑量。Western Blotting顯示不同濃度的吉非替尼刺激PC-9細(xì)胞株嫩能夠升高NF-κB p65胞漿表達(dá)并降低NF-κB p65胞核表達(dá)且改作用具有濃度依賴性,但吉非替尼對(duì)H1299細(xì)胞株NF-κB p65的表達(dá)無(wú)影響。PC-9細(xì)胞株裸鼠異種種植模型中,免疫熒光顯示吉非替尼灌胃治療也能夠降低腫瘤組織中NF-κB p65的核表達(dá)。研究結(jié)論1.PD-L1在EGFR突變型NSCLC細(xì)胞株中高表達(dá)并且其在EGFR野生型細(xì)胞株中的表達(dá)受EGFR信號(hào)調(diào)控。2.EGFR-TKI能夠有效降低EGFR-TKI敏感型以及EGFR-TKI獲得性耐藥型NSCLC細(xì)胞株中PD-L1的表達(dá)水平,并且該作用具有藥物濃度及時(shí)間依賴性。3.EGFR-TKI治療能抑制腫瘤生長(zhǎng)并降低腫瘤組織中PD-L1的表達(dá)。4.EGFR信號(hào)對(duì)PD-L1表達(dá)的作用是通過(guò)NF-κB通路實(shí)現(xiàn)的。
【關(guān)鍵詞】：非小細(xì)胞肺癌 表皮生長(zhǎng)因子受體酪氨酸激酶抑制劑 PD-L1 NF-κB
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R734.2
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表5-7
• 英文摘要7-11
• 中文摘要11-14
• 第一章 前言14-16
• 第二章 PD-L1在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株的表達(dá)與EGFR突變狀態(tài)的相關(guān)性研究16-29
• 2.1 材料與方法16-23
• 2.2 結(jié)果23-27
• 2.3 討論27-29
• 第三章 EGFR-TKI對(duì)EGFR突變藥物敏感型人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株P(guān)D-L1表達(dá)水平的作用研究29-43
• 3.1 材料與方法29-34
• 3.2 結(jié)果34-41
• 3.3 討論41-43
• 第四章 EGFR-TKI對(duì)EGFR突變耐藥型人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株P(guān)D-L1表達(dá)水平的作用研究43-51
• 4.1 材料與方法43-46
• 4.2 結(jié)果46-49
• 4.3 討論49-51
• 第五章 EGFR-TKI對(duì)EGFR突變型人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株體內(nèi)成瘤的治療作用研究51-61
• 5.1 材料與方法51-55
• 5.2 結(jié)果55-59
• 5.3 討論59-61
• 第六章 EGFR信號(hào)對(duì)人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株P(guān)D-L1表達(dá)調(diào)控的機(jī)制研究61-76
• 6.1 材料與方法61-68
• 6.2 結(jié)果68-73
• 6.3 討論73-76
• 全文結(jié)論76-77
• 參考文獻(xiàn)77-85
• 文獻(xiàn)綜述一 非小細(xì)胞肺癌中PD-1/PD-L1通路的作用及其與EGFR突變的關(guān)系研究進(jìn)展85-96
• 參考文獻(xiàn)90-96
• 文獻(xiàn)綜述二EGFR-TKI用于肺癌治療的研究進(jìn)展96-114
• 參考文獻(xiàn)102-114
• 博士研究生期間發(fā)表文章和待發(fā)文章114-115
• 致謝115-116

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

1 趙曉紅,王勛陵,牛靜萍,王靜;蘭州市交通要道顆粒物污染狀況及其致突變活性的研究[J];環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào);2001年04期

2 張雪梅,張雪怡,張志,楊文敏;大氣顆粒有機(jī)提取物的染色體損傷作用研究[J];環(huán)境與健康雜志;2002年03期

3 徐春雨;徐東群;常君瑞;王秦;汪靜;董小艷;李韻譜;王桂芳;;環(huán)境空氣污染對(duì)交通警察血清氧化應(yīng)激指標(biāo)的影響[J];環(huán)境與健康雜志;2009年09期

4 李朋昆;高知義;蔣蓉芳;蓋冰冰;秦逸秋;宋偉民;;細(xì)顆粒物暴露對(duì)人群DNA損傷的影響[J];環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學(xué);2010年05期

5 丁國(guó)武,王文軍,王曉云;蘭州市不同地區(qū)大氣懸浮顆粒物的遺傳毒性研究[J];蘭州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1999年01期

6 朱惠剛;趙啟宇;蔣頌輝;;大氣顆粒物致突變性研究[J];上海環(huán)境科學(xué);1991年06期

7 彭寶成，葉舜華;越江隧道線公交車司機(jī)和售票員細(xì)胞遺傳學(xué)效應(yīng)調(diào)查[J];中國(guó)工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志;1995年06期

8 姚加欽;趙賢四;朱惠剛;;小鼠微核試驗(yàn)檢測(cè)大氣顆粒物致突變性[J];上海環(huán)境科學(xué);1993年03期

，

本文編號(hào)：699045