本文關(guān)鍵詞：妊娠中晚期鄰苯二甲酸二（2-乙基己基）酯暴露對(duì)胎鼠生長(zhǎng)發(fā)育的影響及其機(jī)制的研究

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【摘要】：鄰苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)是使用最普遍的一種增塑劑,廣泛用于食品包裝、化妝品、建筑材料、兒童玩具等領(lǐng)域,可增加塑料制品的延展性和柔韌度。研究表明DEHP是一種環(huán)境內(nèi)分泌干擾物(environmental endocrine disruptors,EEDs),具有類(lèi)似雌激素的作用,進(jìn)入機(jī)體后會(huì)干擾體內(nèi)正常內(nèi)分泌物質(zhì)的合成、釋放、轉(zhuǎn)運(yùn)及代謝過(guò)程,從而破壞人體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。大量流行病學(xué)資料和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí),DEHP具有生殖毒性、胚胎發(fā)育毒性、神經(jīng)毒性、免疫毒性等,進(jìn)入體內(nèi)會(huì)引發(fā)多器官的損傷。我國(guó)DEHP用量大、使用范圍廣,因由此帶來(lái)的環(huán)境和健康問(wèn)題不容忽視。本實(shí)驗(yàn)從孕中期起通過(guò)灌胃方式給予Wistar大鼠不同劑量DEHP溶液,建立了簡(jiǎn)便、有效的妊娠中、晚期DEHP毒性評(píng)價(jià)系統(tǒng),以觀察胎鼠生長(zhǎng)發(fā)育的情況。將大鼠胎盤(pán)作為核心組織,對(duì)相關(guān)分子在基因和蛋白水平進(jìn)行檢測(cè),為闡明DEHP胚胎發(fā)育毒性的作用機(jī)制提供理論依據(jù)。目的1、孕中晚期通過(guò)灌胃給予Wistar大鼠不同劑量的DEHP溶液,建立妊娠中晚期大鼠DEHP染毒模型。2、探討孕中晚期不同劑量DEHP暴露對(duì)大鼠胎盤(pán)組織形態(tài)學(xué)和超微結(jié)構(gòu)的影響。3、探討孕中晚期不同劑量DEHP暴露對(duì)胎鼠生長(zhǎng)發(fā)育的影響。4、探討DEHP胚胎發(fā)育毒性的作用機(jī)制。方法1、將60只雌性Wistar大鼠隨機(jī)分為4組:對(duì)照組(玉米油)、低劑量組(100mg/kg)、中劑量組(500mg/kg)和高劑量組(1000mg/kg)。妊娠11日起孕鼠每日灌胃給予DEHP溶液,妊娠第19日處死母鼠,觀察大鼠孕期一般情況。2、記錄各劑量組胎鼠數(shù)量,計(jì)數(shù)活胎數(shù)、死胎數(shù)和畸胎數(shù),測(cè)量胎鼠體重、身長(zhǎng)和尾長(zhǎng),計(jì)算胎鼠心、肝、腎臟器系數(shù)。3、測(cè)量胎盤(pán)質(zhì)量,取胎盤(pán)組織分別做HE染色和電鏡制片,觀察不同組間胎盤(pán)形態(tài)學(xué)和超微結(jié)構(gòu)的變化。4、選用大鼠全基因組表達(dá)譜芯片檢測(cè)高劑量組和對(duì)照組間基因的變化,將差異表達(dá)基因按功能和通路進(jìn)行分類(lèi)。5、熒光定量PCR驗(yàn)證部分差異基因WT1、PPARα、FX、HNF1a、SFRP2、SPP1和AREG m RNA水平的變化。6、檢測(cè)過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體PPARs的三個(gè)亞型和視黃醛X受體αm RNA和蛋白水平的變化。7、選取PPARs下游通路中脂代謝相關(guān)分子FATP4、FABPs、FAT/CD36、CPT1A、ACOX-1、SCD-1、LPL、EL,檢測(cè)它們m RNA水平和蛋白水平的變化。結(jié)果1、DEHP灌胃后各組孕鼠一般情況良好,無(wú)流產(chǎn)和早產(chǎn),無(wú)動(dòng)物死亡。中和高劑量組孕鼠體重增加緩慢。2、光鏡結(jié)果顯示低劑量組胎盤(pán)結(jié)構(gòu)無(wú)明顯改變,中和高劑量組胎盤(pán)結(jié)構(gòu)的改變主要在迷路帶和海綿滋養(yǎng)層。表現(xiàn)為海綿滋養(yǎng)層變薄,細(xì)胞變性、壞死,迷路帶擴(kuò)張淤血。高劑量組胎盤(pán)改變最顯著。3、電鏡下各劑量組胎盤(pán)超微結(jié)構(gòu)的改變主要表現(xiàn)在微絨毛、線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細(xì)胞器的變化。高劑量組胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞,出現(xiàn)明顯的凋亡小體。4、中和高劑量組胎鼠畸形率和死亡率明顯升高。胎鼠體重減輕,身長(zhǎng)和尾長(zhǎng)變小,生長(zhǎng)受限。胎鼠肝和腎的臟器系數(shù)減小。5、高劑量組和對(duì)照組相比,基因芯片共檢出表達(dá)大于2倍以上差異基因951個(gè),其中表達(dá)上調(diào)基因424個(gè),表達(dá)下調(diào)基因527個(gè)。6、對(duì)篩選出的差異表達(dá)基因進(jìn)行GO功能分析,上調(diào)基因主要參與的生物學(xué)過(guò)程包括:組織發(fā)育、創(chuàng)傷修復(fù)、甾體類(lèi)激素代謝、應(yīng)激反應(yīng)等。下調(diào)基因主要參與類(lèi)固醇代謝、有機(jī)物的轉(zhuǎn)運(yùn)、脂代謝等。7、應(yīng)用KEGG pathway數(shù)據(jù)庫(kù)分析,上調(diào)最顯著的pathway是刺激神經(jīng)的配體-受體和細(xì)胞因子-細(xì)胞因子受體。下調(diào)最顯著的pathway是補(bǔ)體和凝血級(jí)聯(lián)反應(yīng)、脂肪的消化和吸收。8、熒光定量PCR驗(yàn)證,WT1、PPARα和AREG m RNA的表達(dá)上調(diào),FX、HNF1a、SFRP2、SPP1的表達(dá)下調(diào)。與芯片結(jié)果一致。9、RXEα、PPARα和PPARγ在基因水平和蛋白水平隨著染毒劑量的增加,表達(dá)增強(qiáng)。PPARβ的表達(dá)無(wú)變化。10、FATP4、FABPs和FAT/CD36蛋白水平的表達(dá)在中和高劑量組明顯升高,高劑量組表達(dá)量最高。FATP4、FABPs、FAT/CD36、CPT1A、ACOX-1、SCD-1、LPL、ELm RNA的表達(dá)呈遞增趨勢(shì),高劑量組升高顯著。結(jié)論1、妊娠中晚期DEHP暴露可影響胎盤(pán)及胚胎的發(fā)育,導(dǎo)致不良妊娠結(jié)局。2、DEHP對(duì)胎盤(pán)和胎兒的損傷具有明顯的劑量-反應(yīng)關(guān)系,1000mg/kg DEHP暴露劑量對(duì)胎兒影響最大。3、DEHP對(duì)胚胎發(fā)育的影響涉及多個(gè)基因、多條通路,是多因素共同作用的結(jié)果。每個(gè)基因的功能并不是獨(dú)立存在的,各基因之間相互聯(lián)系、相互作用,共同組成了一個(gè)錯(cuò)綜復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)。4、DEHP可能通過(guò)激活PPARs影響胎盤(pán)脂代謝通路,最終導(dǎo)致胚胎發(fā)育異常。
【關(guān)鍵詞】：鄰苯二甲酸二(2-乙基己基)酯 胎盤(pán) 胎鼠 生長(zhǎng)發(fā)育 基因芯片 熒光定量PCR 過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體 脂代謝
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R714.5
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表5-7
• 中文摘要7-11
• 英文摘要11-15
• 前言15-17
• 文獻(xiàn)回顧17-30
• 第一部分 鄰苯二甲酸二（2-乙基己基）酯對(duì)胎鼠生長(zhǎng)發(fā)育的影響30-45
• 1 材料30-31
• 2 方法31-34
• 3 結(jié)果34-40
• 4 討論40-44
• 小結(jié)44-45
• 第二部分 鄰苯二甲酸二（2-乙基己基）酯對(duì)大鼠胎盤(pán)基因表達(dá)譜的影響45-69
• 1 材料46-47
• 2 方法47-51
• 3 結(jié)果51-65
• 4 討論65-68
• 小結(jié)68-69
• 第三部分 部分差異表達(dá)基因的驗(yàn)證69-85
• 1 材料69-70
• 2 方法70-74
• 3 結(jié)果74-81
• 4 討論81-84
• 小結(jié)84-85
• 第四部分 鄰苯二甲酸二（2-乙基己基）酯對(duì)胎盤(pán)脂代謝相關(guān)分子的影響85-108
• 1 材料85-88
• 2 方法88-92
• 3 結(jié)果92-103
• 4 討論103-107
• 小結(jié)107-108
• 參考文獻(xiàn)108-120
• 附錄120-121
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果121-122
• 致謝122

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本文編號(hào)：647763