發(fā)布時間：2017-07-31 05:15

  本文關鍵詞：何首烏對糖尿病的骨形態(tài)成分變化及BMP-2,TGF-β1,IGF-1的表達研究

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【摘要】：研究目的第一從臨床觀察何首烏湯劑對糖尿病性骨質疏松癥患者的療效分析。第二建立糖尿病性骨質疏松大鼠模型,從形態(tài)學、病理學、超微病理學、分子生物學四個層面觀察糖尿病性大鼠骨的動態(tài)變化情況,了解何首烏對糖尿病性大鼠模型骨的形態(tài)及成分的影響。研究方法實驗一:隨機選取臨床50例糖尿病性骨質疏松患者,分為2組(A組基礎治療組B組何首烏組)每組25例患者,對A組行基礎治療結合胰島素控制血糖治療,B組在基礎治療和胰島素控制血糖的基礎上加用何首烏口服治療。分別在第0周、4周、8周、12周觀察其血清鈣(S-Ca)、血清磷(S-P)、堿性磷酸酶、骨鈣素、骨密度變化及臨床VAS、QOL、SF-MPQ、麻木評分。實驗二:取100只大鼠,分空白對照組20只(A組)其余80只大鼠行STZ法8周后造成糖尿病性骨質疏松大鼠模型,選取成功成模大鼠60只隨機分為3組:糖尿病組20只(B組)、胰島素組20只(C組)、何首烏組20只(D組)。各組實驗動物予以相應的干預后,分別于第0、8、12、16周檢測:體重、血糖、糖化血紅蛋白、血脂、骨密度、血清磷(S-P)、血清鈣(S-Ca)、堿性磷酸酶、骨鈣素;于第12、16周分批處死,檢測HE染色、掃描電鏡分析。實驗三:于第12、16周觀察糖尿病SD大鼠BMP-2、TGF-β1、IGF-Ⅰ在大鼠骨組織中的免疫組化及Westernblot表達情況,并用不同軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。研究結果實驗一:1、兩組患者治療前后VAS評分比較:B組(何首烏治療組)患者治療后VAS評分12周比治療前0周及4周明顯升高(P0.05);組間相比,b組(何首烏治療組)在治療后12周的vas評分較a組(基礎治療組)明顯升高(p0.05)。2、兩組患者治療前后qol評分比較:b組(何首烏治療組)患者治療后12周qol評分均較治療前0周和4周明顯升高(p0.05),a組(基礎治療組)qol評分12周比0周差異有統(tǒng)計學意義(p0.05);組間相比,b組(何首烏治療組)在治療后12周的qol評分較a組(基礎治療組)明顯升高(p0.05)。3、兩組患者治療前后sf-mpq評分比較:b組(何首烏治療組)患者8周和12周與0周和4周相比sf-mpq評分均顯著降低,差異均具明顯統(tǒng)計學差異(p0.05),a組(基礎治療組)患者12周sf-mpq評分與0周相比和12周相比差異有統(tǒng)計學意義(p0.05);而組間比較,b組(何首烏治療組)與a組(基礎治療組)相比較,sf-mpq評分在12周后具有統(tǒng)計學差異(p0.05),說明b組治療對疼痛改善程度要優(yōu)于a組。4、兩組患者在治療前后末梢皮膚麻木的情況比較:b組(何首烏治療組)患者8周、12周麻木程度與0周、4周相比均有顯著性差異(p0.05),a組(基礎治療組)患者12周麻木程度與0周相比和4周相比差異有統(tǒng)計學意義(p0.05);兩組間比較,b組(何首烏治療組)在治療后12周的麻木評分較a組(基礎治療組)有顯著性(po.05)。5、兩組疾病療效比較:兩組治療后12周疾病療效比較,基礎治療組25例,顯效5例(20.00%),有效11例(44.00%),無效9例(36.00%),總有效率64.00%。何首烏治療組25例,顯效8例(32.00%),有效13例(52.00%),無效4例(16.00%),總有效率84.00%。治療總有效率優(yōu)于對照組,有統(tǒng)計學意義(p0.01)。6、糖化血紅蛋白測定結果:第8、12周糖化血紅蛋白測定結果顯示b組(何首烏組)中患者與0周和4周相比有統(tǒng)計學意義(p㩳0.05),在第12周a組(基礎治療組)中患者與0周相比有統(tǒng)計學意義(p㩳0.05);其余各組無明顯統(tǒng)計學意義。7、治療前后兩組血鈣,磷變化及鈣磷乘積變化:兩組患者血鈣在治療前均在正常范圍。兩組患者血鈣在治療前及治療后均正常,差異亦無統(tǒng)計學意義(p0.05);兩組患者血磷在治療前及治療后均正常,差異亦無統(tǒng)計學意義(p0.05);鈣磷乘積:差異亦無統(tǒng)計學意義(p0.05)。8、血清akp(堿性磷酸酶):b組血清akp(堿性磷酸酶)含量在第12周和8周與0周相比,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。a組血清akp(堿性磷酸酶)在第12周與0周相比,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。其余各組無統(tǒng)計學意義。9、血清bgp(骨鈣素):b組血清bgp含量在第12周和8周與0周相比,差異有統(tǒng)計學意義p0.05。a組血清bgp含量在第12周與0周相比,差異有統(tǒng)計學意義p0.05。其余各組無統(tǒng)計學意義。10、骨密度測定:差異無統(tǒng)計學意義(p0.05)。實驗二:1、一般情況1.1平均體重測量:在第16周糖尿病組b組與空白對照組a組、胰島素組c組、何首烏組d組相比,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。1.2血糖測量,在第8周糖尿病組(b組)、胰島素組(c組)、何首烏組(d組)與空白對照組(a組)相比較,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。在第12、16周糖尿病組(b組)與空白對照組(a組)、胰島素組(c組)、何首烏組(d組)相比較,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。1.3糖化血紅蛋白測定:第16周糖尿病組(b組)與空白對照組(a組)和何首烏組(d組)相比,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。組內比較糖尿病組(b組)第16周與0周相比,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。2、血脂代謝情況測定血清總膽固醇、甘油三脂、hdl-c和ldl第8周空白對照組與胰島素組、何首烏組、糖尿病組比較,差異有統(tǒng)計學意義p0.05;第12周空白對照組、何首烏組與糖尿病組比較,差異有統(tǒng)計學意義p0.05。第16周空白對照組、胰島素組、何首烏組與糖尿病組比較,差異有統(tǒng)計學意義p0.05。糖尿病組第16周與0周相比,差異有統(tǒng)計學意義p0.05。3、相關生化指標檢測血清ca含量:第16周糖尿病組(b組)與胰島素組(c組)、空白對照組(a組)和何首烏組(d組)比較,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05);組間比較,糖尿病組(b組)第16周與0周比較,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。血清p含量:在各個時間段組間和組內相比較均無明顯統(tǒng)計學意義(p0.05)。鈣磷乘積:第16周糖尿病組與與空白對照組(a組)和何首烏組(d組)比較均降低有統(tǒng)計學意義(p0.05);而組間比較鈣磷乘積糖尿病組第16周較第0周降低有統(tǒng)計學意義(p0.05),其余各組間在各個時間段比較均無統(tǒng)計學意義(p0.05)。血akp(堿性磷酸酶)含量變化:第8周空白對照組(a組)與糖尿病組(b組)、胰島素組(c組)和何首烏組(d組)比較,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。而第16周糖尿病組(b組)與胰島素組(c組)、空白對照組(a組)和何首烏組(d組)比較,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。糖尿病組(b組)第16周和12周與0周比較,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)血清bgp(骨鈣素)含量變化:第8周空白對照組(a組)與糖尿病組(b組)、胰島素組(c組)和何首烏組(d組)比較,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。而第16周糖尿病組(b組)與胰島素組(c組)、空白對照組(a組)和何首烏組(d組)比較,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。糖尿病組(b組)、胰島素組(c組)和何首烏組(d組)第8周與0周比較,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05),糖尿病組(b組)第16周與0周比較,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。4、雙能x線:腰椎、髖部骨密度測定,第8周空白對照組(a組)與糖尿病組(b組)、胰島素組(c組)和何首烏組(d組)比較,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。糖尿病組(b組)第16周與0周比較,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。第16周糖尿病組(b組)與胰島素組(c組)、空白對照組(a組)和何首烏組(d組)比較,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。糖尿病組(b組)、胰島素組(c組)和何首烏組(d組)第8周與0周比較,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。5、骨組織光鏡觀察:空白對照組:第12、16周:骨小梁均勻,骨細胞清晰,骨陷窩正常,骨細胞核規(guī)則,核排列靠陷窩中間(中央型)。糖尿病組第12周:骨細胞減少,可見骨細胞核固縮,骨小梁變細,排列稍紊亂,骨細胞核不規(guī)則,可見三角形、桿狀、彎月行,核排列靠陷窩邊緣(周圍型)。第16周:骨細胞進一步減少,部分骨細胞核固縮,骨小梁變細,排列紊亂,骨細胞核不規(guī)則,有三角形、桿狀、彎月行,核排列靠陷窩邊緣(周圍型)。胰島素組第12周:骨細胞減少,骨細胞部分核固縮,較多空骨陷窩,周圍的鞘增厚,骨小管減少且短,骨小梁稍變細,排列紊亂,骨細胞核不規(guī)則,有三角形、桿狀、彎月行,核排列靠陷窩邊緣(周圍型);第16周與空白對照組16周相似。何首烏組第12周:骨小梁均勻粗細相等,排列規(guī)則,骨細胞較清晰,骨陷窩數(shù)量正常,骨細胞核規(guī)則,核排列靠陷窩中間(中央型);何首烏組:第16周同空白對照組16周。6、電鏡觀察:空白對照組:第12周16周股骨頸的骨小梁均勻粗細相等,排列非常規(guī)則,骨小梁之間的間隙很小,表面光滑。糖尿病組:第12周大鼠股骨頸的骨密質較薄,骨小梁排列不規(guī)則且變細,骨小梁互相連接成疏松的立體網狀結構有增多,較大的骨小梁之間的間隙,表面稍粗糙。第16周骨小梁表面的膠原纖維排列雜亂、松散,空骨陷窩數(shù)量逐漸增加,空骨陷窩周圍的鞘增厚,骨小管變短且數(shù)量減少,表面粗糙。胰島素治療組與何首烏治療組:第12周大鼠股骨頸的骨密質較薄,骨小梁排列不規(guī)則骨小梁互相連接成疏松的立體網狀結構有增多,稍大的骨小梁之間的間隙,表面稍粗糙。胰島素治療組第16周大鼠股骨頸的骨密質變厚,骨小梁基本均勻粗細大致相等,排列基本規(guī)則,骨小梁的立體網狀結構有增加,較大的骨小梁之間的間隙,表面較光滑。何首烏治療組第16周與空白對照組相似。實驗三：免疫組化和免疫印跡法實驗結果顯示糖尿病組16周BMP-2、TGF-β1、IGF-Ⅰ含量明顯低于其余各組有統(tǒng)計學意義(P0.05);第12周空白對照組與其余3組相比有統(tǒng)計學意義(P0.05);何首烏組BMP-2、TGF-β1、IGF-Ⅰ含量16周與12周相比升高,差異明顯有統(tǒng)計學意義(P0.O5)。結論1、何首烏治療糖尿病性骨質疏松患者,可以改善患者的臨床癥狀。2、何首烏對于糖尿病性骨質疏松癥患者,可以使糖化血紅蛋白穩(wěn)定,BGP和AKP血中含量下降,并且沒有明顯副作用。3、何首烏對DOP大鼠模型可以改善血糖、糖化血紅蛋白4、何首烏對DOP大鼠模型可以血鈣恢復正常,穩(wěn)定AKP、BGP,使骨密度增加。5、何首烏可以改善DOP大鼠模型紊亂的血脂。6、糖尿病大鼠隨著時間延長BMP-2、IGF-Ⅰ、TGF-β1的在骨中含量會下降。7、何首烏和胰島素均可以改善糖尿病大鼠的骨質中BMP-2、IGF-Ⅰ、TGF-β1的含量,促進骨形成,但何首烏結合胰島素治療的效果優(yōu)于單純胰島素治療。
【關鍵詞】：何首烏 糖尿病大鼠 動物模型 糖尿病性骨質疏松 骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2 轉化生長因子-β1 胰島素樣生長因子-1
【學位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R285
【目錄】：

• 中文摘要4-10
• Abstract10-20
• 中英文縮略詞表20-22
• 前言22-25
• 實驗研究25-102
• 實驗一：何首烏治療糖尿病性骨質疏松癥患者的臨床研究25-41
• 一、研究目的及方法26-30
• 二、結 果30-36
• 三、討 論36-40
• 四、結論40-41
• 實驗二：何首烏對糖尿病性骨質疏松大鼠模型骨形態(tài)及成分變化的實驗研究41-80
• 一、材料和方法42-50
• 二、結果50-68
• 三、討論68-79
• 四、結論79-80
• 實驗三: 何首烏對糖尿病性骨質疏松大鼠模型骨的BMP-2、TGF-Β1、IGF-Ⅰ的表達研究80-102
• 一、材料和方法81-84
• 二、結 果84-96
• 三、討 論96-102
• 四、結 論102
• 參考文獻102-113
• 綜述一113-123
• 參考文獻119-123
• 綜述二123-133
• 參考文獻129-133
• 攻讀學位期間發(fā)表論文133-135
• 致謝135

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本文編號：597616