本文關(guān)鍵詞：胸腺免疫抑制五肽TIPP的抗哮喘氣道炎癥作用及其機(jī)制研究

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【摘要】：研究目的哮喘是由多種細(xì)胞(包括氣道的炎癥和結(jié)構(gòu)細(xì)胞)和炎癥介質(zhì)參與的氣道慢性炎癥性疾病,氣道炎癥是其發(fā)病機(jī)制的基礎(chǔ)和核心。哮喘患病率高,在各個(gè)年齡階段的人群均可發(fā)病,已成為全球關(guān)注的公眾衛(wèi)生問(wèn)題。哮喘不能根治,只能通過(guò)藥物進(jìn)行控制�，F(xiàn)在治療哮喘最常用的藥物是糖皮質(zhì)激素,對(duì)于嚴(yán)重哮喘患者長(zhǎng)期吸入激素會(huì)產(chǎn)生局部或全身毒副反應(yīng),因此研究開(kāi)發(fā)治療效果好、毒副作用小的抗哮喘藥具有重要意義。本項(xiàng)目組長(zhǎng)期從事胸腺來(lái)源的免疫抑制組分——胸腺免疫抑制提取物(TISE)的研究。TISE是內(nèi)源性的淋巴細(xì)胞生長(zhǎng)抑制物,在體內(nèi)外均可以有效地抑制免疫反應(yīng)和變態(tài)反應(yīng)。研究表明TISE能顯著抑制小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)和大鼠被動(dòng)皮膚過(guò)敏反應(yīng),顯著延長(zhǎng)大鼠移植皮膚的存活期,并對(duì)OVA刺激致敏豚鼠哮喘的發(fā)生有顯著的抑制作用。將低分子量的TISE通過(guò)微球菌核酸酶降解、酸水解及反相高效液相色譜分離相結(jié)合的方法進(jìn)行進(jìn)一步的分離純化,最終得到一個(gè)分子量為604.68 Da的五肽,其序列為Ala-Glu-Trp-Cys-Pro,并將其命名為胸腺免疫抑制五肽(thymic immunosuppressive pentapeptide, TIPP)。鑒于TISE體內(nèi)外均有顯著的抗炎抗變態(tài)反應(yīng)的作用,TIPP是由TISE中分離純化得到的,我們推測(cè)TIPP可能也具有抗過(guò)敏和抗變態(tài)反應(yīng)炎癥的作用,并能用于哮喘的治療。為證實(shí)這個(gè)推測(cè),我們首先對(duì)TIPP體內(nèi)抗哮喘氣道炎癥活性進(jìn)行研究,從組織水平、細(xì)胞水平、分子水平等各個(gè)方面評(píng)價(jià)TIPP對(duì)哮喘動(dòng)物模型的治療作用及毒副作用；利用體外肥大細(xì)胞激活實(shí)驗(yàn)檢測(cè)TIPP的體外抗過(guò)敏活性及作用機(jī)制,結(jié)合蛋白芯片實(shí)驗(yàn)尋找相關(guān)的TIPP作用蛋白；因TIPP是一新發(fā)現(xiàn)的具有全新序列的五肽,對(duì)TIPP活性及其結(jié)構(gòu)之間的關(guān)系進(jìn)行初步考察。本研究有可能發(fā)現(xiàn)一個(gè)治療過(guò)敏性疾病的新機(jī)制,并為T(mén)IPP這一新的五肽的深入開(kāi)發(fā)奠定基礎(chǔ),因此本項(xiàng)目研究具有重要的理論意義和潛在的應(yīng)用價(jià)值。研究方法1TIPP體外免疫抑制活性及TIPP結(jié)構(gòu)與活性關(guān)系的研究首先用脾淋巴細(xì)胞檢測(cè)TIPP的細(xì)胞毒性、TIPP對(duì)不同絲裂原刺激的脾淋巴細(xì)胞增殖的抑制作用及TIPP對(duì)LPS刺激的小鼠RAW264.7巨噬細(xì)胞吞噬活性的影響,并對(duì)TIPP與3種衍生物(D-Glu2)-TIPP、[Ala(Ac)1]0TIPP及(Ser4)-TIPP的免疫抑制活性進(jìn)行比較。2 TIPP體內(nèi)抗哮喘氣道炎癥作用研究采用五周齡雌性BALB/c小鼠于第0、7、14天進(jìn)行卵清蛋白(OVA)致敏并于第28-33天用OVA經(jīng)鼻刺激,建立小鼠過(guò)敏性哮喘模型。于最后一次激發(fā)24 h后,取血測(cè)定外周血白細(xì)胞(WBC)分型；取血清及肺泡灌洗液(BALF),測(cè)定血清中OVA特異性IgE及BALF中IL-4、IL-5、IL-13及IFN-γ的水平；流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)BALF中不同免疫細(xì)胞亞型比例的改變；HE及PAS染色檢測(cè)小鼠肺部炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及支氣管周杯狀細(xì)胞增生情況；實(shí)時(shí)定量熒光PCR技術(shù)檢測(cè)小鼠肺組織中細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)錄水平；Western blot方法檢測(cè)小鼠肺組織炎癥相關(guān)蛋白MCP-1、VCAM-1和COX-2的表達(dá)水平,并檢測(cè)炎癥相關(guān)信號(hào)通路蛋白絲裂原激活蛋白激酶MAPKs及核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的激活情況。同時(shí)采用豚鼠氣管環(huán)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)TIPP對(duì)組胺、乙酰甲膽堿刺激的氣管平滑肌收縮的影響。3 TIPP體外抗過(guò)敏活性及機(jī)制研究采用抗原DNP-HSA對(duì)anti-DNP-IgE致敏的RBL-2H3細(xì)胞進(jìn)行刺激,檢測(cè)TIPP對(duì)IgE-抗原復(fù)合物刺激的RBL-2H3細(xì)胞激活的影響。主要包括：檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中p-氨基己糖苷酶活性及組胺含量,分析TIPP對(duì)脫顆粒的影響；用Ca2+熒光探針Fluo 3-AM檢測(cè)TIPP對(duì)激活的RBL-2H3細(xì)胞內(nèi)Ca2+水平的影響；實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)TIPP對(duì)IgE介導(dǎo)RBL-2H3細(xì)胞激活時(shí)相關(guān)炎癥因子mRNA水平的影響；用羅丹明標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽標(biāo)記細(xì)胞骨架蛋白F-actin,激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)TIPP對(duì)IgE-抗原復(fù)合物刺激RBL-2H3細(xì)胞激活時(shí)膜波動(dòng)的影響；Western blot方法檢測(cè)TIPP對(duì)IgE-抗原復(fù)合物刺激RBL-2H3細(xì)胞激活時(shí)COX-2的表達(dá)水平、信號(hào)通路相關(guān)蛋白及核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB激活的影響。4尋找TIPP靶點(diǎn)采用激光共聚焦顯微鏡觀察TIPP與RBL-2H3細(xì)胞的結(jié)合情況,并用流式細(xì)胞技術(shù)分析TIPP濃度、作用時(shí)間、孵育溫度對(duì)TIPP與RBL-2H3細(xì)胞的結(jié)合的影響。用生物素標(biāo)記TIPP,采用HuProtTM人類蛋白質(zhì)組芯片檢測(cè)與TIPP有相互作用的蛋白質(zhì),結(jié)合之前實(shí)驗(yàn)結(jié)果,推測(cè)TIPP可能作用靶點(diǎn)。并檢測(cè)TIPP對(duì)K562細(xì)胞(Bcr-Abl陽(yáng)性表達(dá))和HL60細(xì)胞(Bcr-Abl陰性表達(dá))增殖的抑制作用。研究結(jié)果1TIPP具有免疫抑制活性且活性與結(jié)構(gòu)相關(guān)TIPP對(duì)Con A及LPS刺激的小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖均有抑制作用,但對(duì)Con A刺激的小鼠脾淋巴T細(xì)胞增殖的抑制作用更為顯著,并能抑制因LPS刺激引起的小鼠RAW264.7細(xì)胞的吞噬能力的增強(qiáng)。TIPP對(duì)未加絲裂原刺激的小鼠脾淋巴細(xì)胞及RAW264.7細(xì)胞的細(xì)胞生存率沒(méi)有影響,即TIPP沒(méi)有細(xì)胞毒性,其對(duì)Con A/LPS刺激的小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖及LPS刺激引起的小鼠RAW264.7細(xì)胞吞噬能力增強(qiáng)的抑制作用并不是因其毒性作用產(chǎn)生的。TIPP免疫抑制活性的發(fā)揮與其自身的結(jié)構(gòu)相關(guān),但其Cys4的-SH基團(tuán)對(duì)TIPP抑制活性的發(fā)揮起一定的增強(qiáng)作用。當(dāng)TIPP的-SH變?yōu)?OH時(shí),其活性降低顯著。2 TIPP能顯著抑制哮喘小鼠肺部炎癥的發(fā)生TIPP可以顯著抑制哮喘小鼠肺部炎癥的發(fā)生,體內(nèi)給藥毒副作用小。TIPP顯著降低哮喘小鼠BALF中細(xì)胞總數(shù)并能有效抑制BALF中不同亞型細(xì)胞比例的改變；組織切片分析表明TIPP對(duì)哮喘小鼠肺部炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及支氣管周杯狀細(xì)胞增生有抑制作用；TIPP可有效抑制哮喘小鼠血清中OVA特異性IgE的水平和BALF中IL-4、IL-5、IL-13及IFN-γ的水平,并能顯著抑制肺組織中炎癥因子IL-4、TNF-α及eotaxin-1 mRNA的轉(zhuǎn)錄水平；Western blot結(jié)果顯示TIPP可有效地抑制哮喘小鼠肺組織炎癥相關(guān)蛋白MCP-1、VCAM-1和COX-2的表達(dá)水平,并能有效抑制炎癥相關(guān)信號(hào)通路蛋白MAPKs及核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB激活。豚鼠氣管環(huán)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,TIPP對(duì)乙酰甲膽堿及組胺引起的氣管平滑肌的收縮并沒(méi)有直接的抑制作用,即TIPP抗哮喘作用的發(fā)揮并不是直接的支氣管舒張作用,而是依賴于其抗炎活性。3 TIPP抑制Raf/MEK/ERK信號(hào)通路及NF-κB的核移位TIPP主要作用于抗原刺激階段,可顯著抑制因抗原DNP-HSA刺激的致敏RBL-2H3細(xì)胞激活引起的脫顆粒,抑制因抗原刺激導(dǎo)致的RBL-2H3細(xì)胞內(nèi)Ca2+水平的增高和膜波動(dòng)的發(fā)生,對(duì)抗原刺激引起的細(xì)胞內(nèi)相關(guān)炎癥因子IL-3、IL-4、IL-6、IL-13、TNF-α及MCP-1 mRNA轉(zhuǎn)錄有抑制作用,并能抑制COX-2蛋白的表達(dá)。Western blot分析TIPP的作用機(jī)制,結(jié)果表明TIPP可顯著抑制Raf/MEK/ERK信號(hào)通路及NF-κB的核移位,而對(duì)JNK、p38、AKT的激活沒(méi)有影響。4生長(zhǎng)因子受體結(jié)合蛋白Grb2是TIPP的可能作用靶點(diǎn)激光共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)TIPP可以與RBL-2H3細(xì)胞的細(xì)胞膜結(jié)合,并能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)；流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)TIPP與RBL-2H3細(xì)胞的結(jié)合具有濃度、時(shí)間、溫度依賴性；HuProtTM人類蛋白質(zhì)組芯片檢測(cè)發(fā)現(xiàn)TIPP與生長(zhǎng)因子受體結(jié)合蛋白Grb2有特異性相互作用,其熒光信號(hào)值(扣除背景值后)達(dá)1187.500±27.577,信噪比SNR為26.159±0.998。Raf/MEK/ERK是Ras下游信號(hào)通路,而Grb2又是Ras激活所需的重要銜接蛋白,因此我們推測(cè)TIPP可能是Ras信號(hào)通路上游重要銜接蛋白Grb2的阻斷劑,TIPP通過(guò)與Grb2蛋白的SH2或SH3結(jié)構(gòu)域結(jié)合,阻斷其與上游酪氨酸激酶LAT酪氨酸磷酸化位點(diǎn)或與下游SOS蛋白的結(jié)合,阻斷了Ras信號(hào)通路的激活,從而發(fā)揮其抗炎抗過(guò)敏作用的。此外,與HL60細(xì)胞(Bcr-Abl陰性表達(dá))相比,TIPP對(duì)Bcr-Abl陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞K562增殖的抑制作用更為顯著,能將其阻滯在G2期。TIPP對(duì)K562細(xì)胞的增殖表現(xiàn)出更明顯的抑制活性,這與TIPP是Grb2阻斷劑這一假設(shè)符合。結(jié)論和意義(1)首次對(duì)胸腺免疫抑制五肽TIPP的免疫抑制活性進(jìn)行了研究。TIPP對(duì)Con A/LPS刺激的小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖及LPS刺激的小鼠RAW264.7吞噬能力的增強(qiáng)均有抑制作用,且無(wú)細(xì)胞毒性。(2)對(duì)TIPP活性與結(jié)構(gòu)關(guān)系進(jìn)行了初探。TIPP活性的發(fā)揮與其自身的結(jié)構(gòu)相關(guān),但其Cys4的-SH基團(tuán)對(duì)TIPP抑制活性的發(fā)揮起一定的增強(qiáng)作用。(3)首次對(duì)TIPP體內(nèi)抗哮喘氣道炎癥作用進(jìn)行了研究。TIPP可有效的抑制哮喘小鼠肺部炎癥的發(fā)生,且體內(nèi)給藥毒副作用小。(4)首次對(duì)TIPP體外抗過(guò)敏活性進(jìn)行了研究。TIPP可以有效地抑制IgE-抗原復(fù)合物刺激的RBL-2H3細(xì)胞的激活。(5)首次對(duì)TIPP作用機(jī)制進(jìn)行了研究。TIPP可以抑制Raf/MEK/ERK信號(hào)通路的激活及NF-κB的核移位,抑制IgE-抗原復(fù)合物刺激的RBL-2H3細(xì)胞的激活。TIPP可能是Grb2的阻斷劑,通過(guò)與Grb2蛋白結(jié)合,阻斷了Ras信號(hào)通路的激活,從而發(fā)揮其抗炎抗過(guò)敏作用的。(6)對(duì)TIPP是Grb2阻斷劑這一機(jī)制進(jìn)行初步驗(yàn)證。與Bcr-Abl陰性表達(dá)細(xì)胞HL60相比,TIPP對(duì)Bcr-Abl陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞K562增殖的抑制作用更為顯著,能將其阻滯在G2期。TIPP對(duì)K562細(xì)胞的增殖表現(xiàn)出更明顯的抑制活性,這與TIPP是Grb2阻斷劑這一假設(shè)符合。
【關(guān)鍵詞】：胸腺免疫抑制五肽 免疫抑制 炎癥 過(guò)敏 哮喘 Grb2
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R562.25
【目錄】：

• 中文摘要14-19
• ABSTRACT19-25
• 符號(hào)說(shuō)明25-28
• 第一章 前言28-39
• 1 哮喘的發(fā)病機(jī)制、相關(guān)細(xì)胞與氣道重塑28-33
• 1.1 哮喘的發(fā)病機(jī)制28-30
• 1.2 哮喘相關(guān)細(xì)胞30-33
• 1.3 氣道重塑33
• 2 哮喘治療藥物33-35
• 2.1 糖皮質(zhì)激素33-34
• 2.2 p2腎上腺素受體激動(dòng)劑34
• 2.3 抗IgE抗體34
• 2.4 其它哮喘治療藥物34-35
• 3 胸腺免疫抑制五肽(TIPP)35-38
• 3.1 抑素的發(fā)現(xiàn)與起源35
• 3.2 胸腺抑素35-36
• 3.3 胸腺免疫抑制提取物(TISE)36
• 3.4 胸腺免疫抑制五肽(TIPP)36-38
• 4 本課題設(shè)計(jì)思路及擬解決問(wèn)題研究38-39
• 第二章 TIPP體外免疫抑制活性研究39-55
• 1 實(shí)驗(yàn)材料39-41
• 1.1 試劑與材料39
• 1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物39
• 1.3 細(xì)胞株39
• 1.4 儀器設(shè)備39-40
• 1.5 溶液配制40-41
• 2 實(shí)驗(yàn)方法41-46
• 2.1 TIPP對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞的影響41-42
• 2.2 TIPP對(duì)RAW264.7細(xì)胞的影響42-43
• 2.3 TIPP及其衍生物活性研究43-46
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果46-52
• 3.1 TIPP對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞的影響46-47
• 3.2 TIPP對(duì)RAW264.7細(xì)胞的影響47-49
• 3.3 TIPP及其衍生物活性研究49-52
• 4 討論52-54
• 5 結(jié)論54-55
• 第三章 TIPP體內(nèi)抗哮喘氣道炎癥作用研究55-88
• 1 實(shí)驗(yàn)材料55-58
• 1.1 試劑55-56
• 1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物56
• 1.3 儀器設(shè)備56-57
• 1.4 溶液配制57-58
• 2 實(shí)驗(yàn)方法58-66
• 2.1 小鼠哮喘模型的建立58-59
• 2.2 流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)TIPP對(duì)OVA刺激的致敏小鼠脾淋巴細(xì)胞激活的影響59-60
• 2.3 樣品收集60-61
• 2.4 流式細(xì)胞技術(shù)分析BALF細(xì)胞分型61
• 2.5 HE、PAS染色61
• 2.6 ELISA檢測(cè)61
• 2.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)小鼠肺組織中細(xì)胞因子mRNA水平61-64
• 2.8 Western blot檢測(cè)TIPP對(duì)小鼠肺組織中炎癥相關(guān)蛋白表達(dá)及信號(hào)通路蛋白激活的影響64-66
• 2.9 TIPP對(duì)組胺、mAch刺激的豚鼠氣管平滑肌收縮的影響66
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果66-82
• 3.1 流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)TIPP對(duì)OVA刺激的致敏小鼠脾淋巴細(xì)胞激活的影響66-68
• 3.2 TIPP對(duì)小鼠體重、胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)及肺指數(shù)的影響68-70
• 3.3 TIPP對(duì)哮喘小鼠WBC分型的影響70-71
• 3.4 TIPP對(duì)哮喘小鼠BALF細(xì)胞的影響71-74
• 3.5 HE及PAS染色分析74-75
• 3.6 TIPP對(duì)哮喘小鼠血清中OVA特異性IgE水平的影響75
• 3.7 TIPP對(duì)哮喘小鼠BALF中細(xì)胞因子水平的影響75-76
• 3.8 TIPP對(duì)哮喘小鼠肺組織中細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄水平的影響76-78
• 3.9 Western blot分析78-80
• 3.10 TIPP對(duì)組胺、mAch刺激的豚鼠氣管平滑肌收縮的影響80-82
• 4 討論82-87
• 5 結(jié)論87-88
• 第四章 TIPP對(duì)IgE介導(dǎo)的RBL-2H3細(xì)胞激活的抑制作用88-119
• 1 實(shí)驗(yàn)材料88-91
• 1.1 試劑與材料88-89
• 1.2 細(xì)胞株89
• 1.3 設(shè)備儀器89-90
• 1.4 溶液配制90-91
• 2 實(shí)驗(yàn)方法91-98
• 2.1 RBL-2H3細(xì)胞培養(yǎng)91-92
• 2.2 TIPP對(duì)RBL-2H3細(xì)胞存活率的影響92
• 2.3 IgE介導(dǎo)的RBL-2H3細(xì)胞激活最適條件摸索92-93
• 2.4 TIPP作用階段檢測(cè)93-94
• 2.5 TIPP對(duì)IgE介導(dǎo)的RBL-2H3細(xì)胞組胺釋放的影響94
• 2.6 細(xì)胞內(nèi)Ca~(2+)水平測(cè)定94-95
• 2.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄水平95-96
• 2.8 激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)96
• 2.9 Western blot檢測(cè)96-97
• 2.10 -SH基團(tuán)對(duì)TIPP抑制RBL-2H3細(xì)胞脫顆粒的影響97-98
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果98-114
• 3.1 TIPP對(duì)RBL-2H3細(xì)胞存活率的影響98
• 3.2 IgE介導(dǎo)的RBL-2H3細(xì)胞激活最適條件確定98-100
• 3.3 TIPP作用階段100-103
• 3.4 TIPP對(duì)IgE介導(dǎo)的RBL-2H3細(xì)胞激活時(shí)組胺釋放量的影響103-104
• 3.5 TIPP對(duì)IgE介導(dǎo)的RBL-2H3細(xì)胞激活時(shí)細(xì)胞內(nèi)Ca~(2+)水平的影響104
• 3.6 TIPP對(duì)IgE介導(dǎo)的RBL-2H3細(xì)胞激活時(shí)細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄的影響104-106
• 3.7 TIPP對(duì)IgE介導(dǎo)的RBL-2H3細(xì)胞激活時(shí)膜波動(dòng)的影響106-107
• 3.8 Western blot分析107-113
• 3.9 -SH基團(tuán)對(duì)TIPP抑制RBL-2H3細(xì)胞脫顆粒的影響113-114
• 4 討論114-118
• 5 結(jié)論118-119
• 第五章 TIPP作用靶點(diǎn)尋找119-134
• 1 實(shí)驗(yàn)材料119-120
• 1.1 試劑與材料119
• 1.2 細(xì)胞株119
• 1.3 設(shè)備儀器119-120
• 1.4 溶液配制120
• 2 實(shí)驗(yàn)方法120-124
• 2.1 TIPP與RBL-2H3細(xì)胞相互作用檢測(cè)120-121
• 2.2 HuProt~(TM)人類蛋白質(zhì)組芯片檢測(cè)TIPP相互作用蛋白121-123
• 2.3 基于Grb2阻斷劑機(jī)制初步活性驗(yàn)證123-124
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果124-128
• 3.1 TIPP與RBL-2H3細(xì)胞相互作用模式124-125
• 3.2 HuProt~(TM)人類蛋白質(zhì)組芯片檢測(cè)TIPP相互作用蛋白125-127
• 3.3 基于Grb2阻斷劑機(jī)制初步活性驗(yàn)證127-128
• 4 討論128-132
• 5 結(jié)論132-134
• 總結(jié)與展望134-136
• 1 全文總結(jié)134
• 2 創(chuàng)新點(diǎn)134-135
• 3 展望135-136
• 參考文獻(xiàn)136-150
• Article 1150-161
• Article 2161-178
• Article 3178-195
• 致謝195-196
• 博士期間發(fā)表的論文196-197
• 附件197

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

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2 辛現(xiàn)良,張世玲,王鳳山;胸腺免疫抑制提取物對(duì)小鼠免疫功能的影響[J];中國(guó)生化藥物雜志;1996年05期

3 程艷娜,尚雪原,王鳳山,王慶利,紀(jì)建波;胸腺免疫抑制提取物對(duì)豚鼠支氣管平滑肌的影響及平喘作用[J];中國(guó)藥學(xué)雜志;1998年03期

4 王鳳山,張?zhí)烀?張子剛,李在連;不同免疫活性人胚胸腺提取物的研究——提取物的制備、理化性質(zhì)和免疫活性[J];中國(guó)免疫學(xué)雜志;1987年03期

5 Kypros Zenonos;Katy Kyprianou;;RAS signaling pathways,mutations and their role in colorectal cancer[J];World Journal of Gastrointestinal Oncology;2013年05期

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