發(fā)布時間：2017-07-26 19:11

  本文關(guān)鍵詞：高強度運動訓(xùn)練對專業(yè)運動員免疫功能的影響及葫蘆素E潛在免疫調(diào)節(jié)作用研究

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【摘要】：目的:首先通過對我省專業(yè)運動員大規(guī)模普查,建立我省專業(yè)運動員常規(guī)免疫指標(biāo)參考范圍,為合理評估運動員訓(xùn)練效果和恢復(fù)狀態(tài)提供依據(jù);然后調(diào)查四周高強度訓(xùn)練對專業(yè)運動員免疫功能的影響,探討高強度訓(xùn)練對運動員免疫的抑制作用;繼而研究葫蘆素E(Cuc E)的免疫調(diào)節(jié)作用及其機制,探討Cuc E作為運動員免疫調(diào)節(jié)藥物的潛在可能性。方法:(1)采集廣東省棒球隊、壘球隊、籃球隊、曲棍球隊、手球隊和足球隊專業(yè)運動隊員共603例樣品,檢測白細(xì)胞分類和血清免疫球蛋白水平,用SPSS軟件計算95%參考區(qū)間建立運動員常規(guī)免疫指標(biāo)參考范圍(2)以廣東省11名優(yōu)秀專業(yè)皮劃艇運動員為模型進行調(diào)查,在四周高強度訓(xùn)練開始前和訓(xùn)練結(jié)束24 h后各進行一次肘靜脈采血,使用全自動血球分析儀檢測白細(xì)胞分類,使用全自動生化分析儀檢測血清免疫球蛋白,使用ELISA試劑盒檢測血清IL-6、IL-8、TNF-α和IL-10,使用流式細(xì)胞術(shù)檢測淋巴細(xì)胞亞群及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞,使用SPSS軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計,探討四周高強度訓(xùn)練對專業(yè)運動員免疫功能的影響。(3)用佛波醇酯(PDB)+離子霉素(Ion)激活人PBMC和Jurkat T細(xì)胞,利用免疫熒光染色結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)分析人PBMC中CD3+T細(xì)胞活化抗原CD69和CD25的表達,用流式微球陣列檢測Cuc E對活化的PBMC和Jurkat T細(xì)胞白介素2(IL-2)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)和干擾素γ(IFN-γ)表達的影響情況,用定量PCR(q PCR)法檢測Cuc E對IL-2、TNF-α和IFN-γm RNA表達的影響情況,用免疫印跡法檢測NF-κB信號通路和MAPKs信號通路的相關(guān)蛋白的表達,用免疫熒光分析法觀察NF-κB/p65的核轉(zhuǎn)位情況,探討葫蘆素E對適應(yīng)性免疫功能的調(diào)節(jié)作用,評價其作為調(diào)節(jié)運動員調(diào)節(jié)藥物的潛在可能性。結(jié)果:(1)廣東省專業(yè)運動員白細(xì)胞計數(shù)參考范圍為(3.7~8.8)×109個/升,嗜中性粒細(xì)胞計數(shù)參考范圍為(1.6~5.2)×109個/升,淋巴細(xì)胞計數(shù)參考范圍為(1.4~3.4)×109個/升,單核細(xì)胞計數(shù)參考范圍為(0.16~0.58)×109個/升,嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)參考范圍為(0~0.5)×109個/升,嗜堿性粒細(xì)胞計數(shù)參考范圍為(0~0.1)×109個/升,嗜中性粒細(xì)胞百分比參考范圍為(37~66)%,淋巴細(xì)胞百分比參考范圍為(25~52)%,單核細(xì)胞百分比參考范圍為(2.5~8.4)%,嗜酸性粒細(xì)胞百分比參考范圍為(1~7)%,嗜堿性粒細(xì)胞計數(shù)百分比參考范圍為(0~1.5)%,免疫球蛋白G參考范圍為(7.58~16.91)g/L,免疫球蛋白A參考范圍為(0.80~3.49)g/L,免疫球蛋白M參考范圍為(0.53~3.41)g/L。(2)四周高強度訓(xùn)練后,白細(xì)胞計數(shù)極顯著降低(P0.01),嗜中性粒細(xì)胞計數(shù)、淋巴細(xì)胞計數(shù)、單核細(xì)胞計數(shù)、嗜中性粒細(xì)胞百分比、淋巴細(xì)胞百分比和單核細(xì)胞百分比無顯著差異(P0.05);血清免疫球蛋白G極顯著降低(P0.01),免疫球蛋白A和免疫球蛋白M無顯著差異(P0.05);血清IL-6水平顯著升高(P0.05),IL-8和TNF-α極顯著升高(P0.01),IL-10水平極顯著降低(P0.01);B細(xì)胞百分比、B細(xì)胞計數(shù)、CD3+CD4+細(xì)胞百分比、CD3+CD4+細(xì)胞計數(shù)顯著下降(P0.05),CD3+CD4+/CD3+CD8+比值極顯著下降(P0.01),NK細(xì)胞百分比、NK細(xì)胞計數(shù)、T細(xì)胞百分比、T細(xì)胞計數(shù)、CD3+CD8+細(xì)胞百分比、CD3+CD8+細(xì)胞計數(shù)無顯著變化(P0.05);CD4+CD25+Fox P3+Treg/CD4+比值和CD4+CD25+Fox P3+Treg細(xì)胞計數(shù)也無顯著變化(P0.05)。(3)Cuc E能明顯抑制PDB+Ion激活的PBMC中CD3+T細(xì)胞早期活化標(biāo)志分子CD69和中期活化分子CD25的表達,可以劑量依賴方式抑制活化的PBMC和Jurkat T細(xì)胞的IL-2、TNF-α和IFN-γ的表達,并且在m RNA水平上均可抑制活化Jurkat T細(xì)胞IL-2、TNF-α和IFN-γ轉(zhuǎn)錄,對信號通路研究發(fā)現(xiàn)Cuc E顯著抑制活化Jurkat T細(xì)胞胞漿IκB和NF-κB/p65磷酸化水平,并抑制NF-κB/p65核轉(zhuǎn)位,而對p38MAPK、JNK和Erk1/2的磷酸化水平無顯著下調(diào)作用。結(jié)論:專業(yè)運動員多項免疫指標(biāo)處于普通人群參考范圍較低水平,高強度訓(xùn)練可導(dǎo)致專業(yè)運動員發(fā)生免疫抑制,同時伴隨多種炎性細(xì)胞因子上升,而葫蘆素E可通過下調(diào)NF-κB信號通路從m RNA水平和蛋白質(zhì)水平上顯著抑制細(xì)胞因子的表達,對適應(yīng)性免疫具有較明顯調(diào)節(jié)作用,有望成為緩解運動員運動性細(xì)胞因子上升的潛在藥物。
【關(guān)鍵詞】：專業(yè)運動員 血清免疫球蛋白 細(xì)胞因子 淋巴細(xì)胞亞群 葫蘆素E NF-κB信號通路
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R87
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-12
• 第一章 緒論12-34
• 1.1 白細(xì)胞及白細(xì)胞分類14-16
• 1.2 免疫球蛋白16-17
• 1.3 運動對白細(xì)胞亞群的影響17-18
• 1.4 運動對免疫球蛋白的影響18-19
• 1.5 運動與細(xì)胞因子19-21
• 1.6 運動與淋巴細(xì)胞亞群21-23
• 1.7 運動與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞23-24
• 1.8 天然免疫調(diào)節(jié)藥物葫蘆素24-32
• 1.9 本研究的目的和意義32-34
• 第二章 專業(yè)運動員白細(xì)胞分類及血清免疫球蛋白水平參考范圍的建立34-48
• 2.1 前言34-35
• 2.2 實驗材料與設(shè)備35
• 2.2.1 實驗對象35
• 2.2.2 主要試劑35
• 2.2.3 主要儀器35
• 2.3 實驗方法35-38
• 2.3.1 樣品采集方法36
• 2.3.2 血常規(guī)檢測方法36-37
• 2.3.3 血清免疫球蛋白檢測方法37-38
• 2.3.4 統(tǒng)計分析38
• 2.4 實驗結(jié)果38-44
• 2.4.1 廣東省專業(yè)運動員白細(xì)胞及其分類調(diào)查情況38-42
• 2.4.2 廣東省專業(yè)運動員免疫球蛋白三聯(lián) (Ig G/A/M) 水平調(diào)查42-44
• 2.5 討論44-47
• 2.5.1 對廣東省專業(yè)運動員白細(xì)胞分類水平的調(diào)查44-46
• 2.5.2 對廣東省專業(yè)運動員血清免疫球蛋白水平調(diào)查46-47
• 2.6 結(jié)論47-48
• 第三章 四周高強度訓(xùn)練對專業(yè)運動員免疫功能的影響48-66
• 3.1 前言48
• 3.2 實驗材料與設(shè)備48-50
• 3.2.1 實驗對象49
• 3.2.2 主要試劑49
• 3.2.3 主要儀器49-50
• 3.3 實驗方法50-54
• 3.3.1 訓(xùn)練安排50
• 3.3.2 樣品采集方法50
• 3.3.3 血常規(guī)檢測方法50-51
• 3.3.4 血清免疫球蛋白檢測方法51-52
• 3.3.5 血清細(xì)胞因子檢測方法52
• 3.3.6 淋巴細(xì)胞亞群檢測方法52-53
• 3.3.7 分離外周血PBMC53
• 3.3.8 人外周血Fox P3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞檢測方法53
• 3.3.9 流式細(xì)胞儀設(shè)置53-54
• 3.3.10 統(tǒng)計分析54
• 3.4 實驗結(jié)果54-59
• 3.4.1 四周高強度訓(xùn)練對專業(yè)運動員白細(xì)胞分類的影響54-55
• 3.4.2 四周高強度訓(xùn)練對專業(yè)運動員免疫球蛋白的影響55
• 3.4.3 四周高強度訓(xùn)練對專業(yè)運動員細(xì)胞因子的影響55-56
• 3.4.4 四周高強度訓(xùn)練對專業(yè)運動員外周血淋巴細(xì)胞亞群的影響56-58
• 3.4.5 四周高強度訓(xùn)練對專業(yè)運動員調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的影響58-59
• 3.5 討論59-65
• 3.5.1 四周高強度訓(xùn)練對專業(yè)運動員白細(xì)胞亞群的影響59-60
• 3.5.2 四周高強度訓(xùn)練對專業(yè)運動員免疫球蛋白的影響60-61
• 3.5.3 四周高強度訓(xùn)練對專業(yè)運動員細(xì)胞因子的影響61
• 3.5.4 四周高強度訓(xùn)練對專業(yè)運動員外周血淋巴細(xì)胞亞群的影響61-64
• 3.5.5 四周大強度訓(xùn)練對運動員外周血Fox P3+ Treg的影響64-65
• 3.6 結(jié)論65-66
• 第四章 葫蘆素E的免疫調(diào)節(jié)作用及其機制研究66-91
• 4.1 前言66
• 4.2 實驗材料與設(shè)備66-70
• 4.2.1 實驗材料67-68
• 4.2.2 主要儀器68
• 4.2.3 主要溶液配方68-70
• 4.3 實驗方法70-78
• 4.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)70
• 4.3.2 分離人外周血單個核細(xì)胞70-71
• 4.3.3 藥物濃度MTT實驗71-72
• 4.3.4 PBMC活化表面分子檢測72
• 4.3.5 細(xì)胞培養(yǎng)液上清細(xì)胞因子檢測72-74
• 4.3.6 RNA抽提及逆轉(zhuǎn)錄74
• 4.3.7 實時定量RT-PCR74-75
• 4.3.8 細(xì)胞漿蛋白抽提75-76
• 4.3.9 細(xì)胞核蛋白抽提76
• 4.3.10 免疫印跡分析76-77
• 4.3.11 免疫熒光分析77-78
• 4.3.12 統(tǒng)計分析78
• 4.4 實驗結(jié)果78-86
• 4.4.1 藥物毒性實驗結(jié)果78-79
• 4.4.2 Cuc E抑制PBMC活化表面分子的表達79-80
• 4.4.3 Cuc E抑制PBMC細(xì)胞因子的表達80-81
• 4.4.4 Cuc E抑制Jurkat T細(xì)胞因子的表達81-82
• 4.4.5 Cuc E抑制Jurkat T IL-2、TNF-α 和IFN-γ m RNA的表達水平82-83
• 4.4.6 Cuc E對NF-κB信號通路和MAPKs信號通路的影響83-86
• 4.5 討論86-90
• 4.5.1 Cuc E抑制PBMC活化表面分子的表達86-88
• 4.5.2 Cuc E從蛋白水平和轉(zhuǎn)錄水平上抑制細(xì)胞因子的表達88-89
• 4.5.3 Cuc E對NF-κB和MAPKs信號通路的影響89-90
• 4.6 結(jié)論90-91
• 第五章 全文總結(jié)91-93
• 5.1 本研究的主要結(jié)果和結(jié)論91
• 5.2 本研究的主要創(chuàng)新點91-93
• 參考文獻93-112
• 附錄 基金項目112-113
• 在校期間發(fā)表文章113-114
• 縮略詞表114-116
• 致謝116

【參考文獻】

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本文編號：577895