本文關(guān)鍵詞：組蛋白乙�；閷�(dǎo)孕期酒精暴露導(dǎo)致胎鼠心臟發(fā)育相關(guān)基因過(guò)表達(dá)的機(jī)制，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分：孕期酒精暴露導(dǎo)致胎鼠組蛋白高乙�；鹦呐K發(fā)育相關(guān)基因過(guò)表達(dá)目的通過(guò)對(duì)孕鼠經(jīng)胃管服用酒精構(gòu)建孕期酒精暴露的模型,檢測(cè)酒精對(duì)乙酰化組蛋白H3表達(dá)與胎鼠心臟發(fā)育相關(guān)基因GATA4、NKX2.5、 DHAND和EHAND表達(dá)及其啟動(dòng)子區(qū)域乙酰化組蛋白H3水平的影響。以此證實(shí)孕期酒精暴露可以引起胎鼠心臟組織組蛋白H3高乙�；�,進(jìn)而引起心臟發(fā)育相關(guān)基因的過(guò)表達(dá)。方法1)建模：孕鼠在E7.5利用篩選劑量開(kāi)始灌服56%酒精,在E14.5天收集胎鼠心臟標(biāo)本,分別提取核蛋白及RNA,編號(hào)保存進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。2)分組：分為空白對(duì)照組(Blank組),酒精組(Alc組)及陰性對(duì)照組(DMSO組)。3)檢測(cè)指標(biāo)及方法：比色法測(cè)定孕期酒精暴露后胎鼠心臟組織組蛋白4)乙�；�(HATs)的活性；Western免疫印跡(Western Blotting)法測(cè)定其組蛋白H3乙�；谋磉_(dá)水平;實(shí)時(shí)熒光定量PCR (RT-Q-PCR)法測(cè)定胎鼠心臟的發(fā)育相關(guān)基因GATA4, NKX2.5, DHAND和EHAND表達(dá)量,以及染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)及RT-Q-PCR法測(cè)定上述的心臟發(fā)育相關(guān)特異基因啟動(dòng)子區(qū)乙�；M蛋白H3(AcH3)的水平。結(jié)果1)孕期酒精暴露在E14.5時(shí)引起HATs酶活性明顯增高(P0.05)。2)A1c組乙�；M蛋白H3水平與Blank組及DMSO組相比,E14.5時(shí)表達(dá)量分別較兩組顯著升高(P0.05)。3)Alc組心臟發(fā)育相關(guān)基因GATA4, NKX2.5, DHAND和EHAND的mRNA水平與Blank組及DMSO組相比,E14.5時(shí)各基因的mRNA表達(dá)量分別較兩組顯著升高(P0.05)。4)A1c組心臟發(fā)育相關(guān)基因GATA4, NKX2.5, DHAND和EHAND啟動(dòng)子區(qū)的AcH3水平與Blank組及DMSO組相比,E14.5時(shí)各基因的AcH3水平分別較兩組顯著升高(P0.05)。結(jié)論11孕期酒精暴露引起胎鼠心臟組織HATs酶活性升高。2)孕期酒精暴露致胎鼠心臟組織的組蛋白H3乙�；缴�,使AcH3表達(dá)增加。3)孕期酒精暴露致胎鼠心臟發(fā)育相關(guān)基因GATA4, NKX2.5, DHAND和EHAND的過(guò)表達(dá)。4)孕期酒精暴露致胎鼠心臟發(fā)育相關(guān)基因GATA4, NKX2.5, DHAND和EHAND啟動(dòng)子區(qū)的AcH3的水平顯著增加。第二部分：Curcumin下調(diào)組蛋白乙�；侥孓D(zhuǎn)孕期酒精暴露導(dǎo)致心臟發(fā)育相關(guān)基因過(guò)表達(dá)目的在孕期酒精暴露的基礎(chǔ)上,給孕鼠同時(shí)腹腔注射HATs酶抑制劑Curcumin降低心臟組織的組蛋白H3乙酰化水平,觀察胎鼠心臟發(fā)育相關(guān)基因的表達(dá)水平,探討其能否逆轉(zhuǎn)孕期酒精暴露所引起的組蛋白H3高乙�；瘜�(dǎo)致的心臟相關(guān)基因的過(guò)表達(dá)。方法1)建模：孕鼠在E7.5利用篩選劑量開(kāi)始腹腔注射Curcumin,同日灌服56%酒精,在E14.5天收集胎鼠心臟標(biāo)本,分別提取核蛋白及RNA,編號(hào)保存以進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。2)分組：分為空白對(duì)照組(Blank組),酒精組(Alc組),陰性對(duì)照組(DMSO組),Curcumin組(Cur組)及Curcumin和酒精組(Alc和Cur組)。3)檢測(cè)指標(biāo)及方法：比色法測(cè)定以上各組胎鼠心臟組織HATs酶的活性；Western Blotting法測(cè)定其組蛋白H3乙�；谋磉_(dá)水平；RT-Q-PCR法測(cè)定胎鼠心臟的發(fā)育相關(guān)基因GATA4, NKX2.5, DHAND和EHAND表達(dá)量,以及ChIP-RT-Q-PCR法測(cè)定上述的心臟發(fā)育相關(guān)基因啟動(dòng)子區(qū)AcH3的水平。結(jié)果1)Cur組HATs酶活性在E14.5明顯低于各實(shí)驗(yàn)組(P0.05),A1c和Cur組HATs酶活性和Blank組及DMSO組無(wú)顯著差異(P0.05)。2)Cur組乙酰化組蛋白H3水平E14.5明顯低于各實(shí)驗(yàn)組(P0.05),Alc和Cur組乙�；M蛋白H3水平和Blank組及DMSO組無(wú)顯著差異(P0.05)。3)Cur組心臟發(fā)育相關(guān)基因GATA4, NKX2.5, DHAND和EHAND的mRNA水平明顯低于各實(shí)驗(yàn)組(P0.05),A1c和Cur組心臟發(fā)育相關(guān)基因GATA4, Nkx2.5, DHAND和EHAND的mRNA水平和Blank組及DMSO組無(wú)顯著差異(P0.05)。4)Cur組心臟發(fā)育相關(guān)基因GATA4, NKX2.5, DHAND和EHAND啟動(dòng)子區(qū)的AcH3水平明顯低于各實(shí)驗(yàn)組(P0.05),Alc和Cur組心臟發(fā)育相關(guān)基因GATA4, NKX2.5, DHAND和EHAND啟動(dòng)子區(qū)的AcH3水平和Blank組及DMSO組無(wú)顯著差異(P0.05)。結(jié)論1) Curcumin能夠逆轉(zhuǎn)孕期酒精暴露引起的HATs酶活性升高。2) Curcumin可以逆轉(zhuǎn)孕期酒精暴露引起的組蛋白H3乙酰化水平升高,致使AcH3表達(dá)基本正常。3) Curcumin能夠逆轉(zhuǎn)孕期酒精暴露所導(dǎo)致的基因GATA4, NKX2.5, DHAND和EHAND的過(guò)表達(dá),使表達(dá)量恢復(fù)到接近正常水平。4) Curcumin可以逆轉(zhuǎn)孕期酒精暴露所致GATA4, NKX2.5, DHAND和EHAND啟動(dòng)子區(qū)AcH3的高表達(dá)。第三部分SAHA上調(diào)組蛋白乙�；郊又卦衅诰凭┞秾�(dǎo)致心臟特異發(fā)育相關(guān)基因過(guò)表達(dá)目的在孕期酒精暴露的基礎(chǔ)上,給孕鼠同時(shí)腹腔注射HDACs酶抑制劑SAHA提高心臟組織的組蛋白H3乙�；�,觀察胎鼠心臟相關(guān)發(fā)育相關(guān)基因的表達(dá)水平,探討其能否加重孕期酒精暴露所引起的組蛋白H3高乙酰化導(dǎo)致的心臟相關(guān)基因的過(guò)表達(dá)。方法1)建模：孕鼠在E7.5利用篩選劑量開(kāi)始腹腔注射SAHA,同日灌服56%酒精,在E14.5天收集胎鼠心臟標(biāo)本,分別提取核蛋白及RNA,編號(hào)保存以進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。2)分組：分為空白對(duì)照組(Blank組),酒精組(Alc組),陰性對(duì)照組(DMSO組),SAHA組及SAHA和酒精組(Alc和SAHA組)。3)檢測(cè)指標(biāo)及方法：比色法測(cè)定以上各組胎鼠心臟組織的HATs酶活性；Western Blotting法測(cè)定組蛋白H3乙�；谋磉_(dá)水平；RT-Q-PCR法測(cè)定胎鼠心臟的發(fā)育相關(guān)基因GATA4, NKX2.5, DHAND和EHAND表達(dá)量,以及ChIP-RT-Q-PCR法測(cè)定上述的心臟發(fā)育相關(guān)基因啟動(dòng)‘子區(qū)AcH3的水平。結(jié)果1)Alc和SAHA組HATs酶活性在E14.5明顯高于各實(shí)驗(yàn)組(P0.05),SAHA組HATs酶活性和Alc組相比無(wú)顯著差異(P0.05)。2)A1 c和SAHA組乙酰化組蛋白H3水平E14.5明顯高于各實(shí)驗(yàn)組(P0.05),SAHA組乙�；M蛋白H3水平和A1c組相比無(wú)顯著差異(P0.05)。3)Alc和SAHA組心臟發(fā)育相關(guān)基因GATA4, NKX2.5, DHAND和EHAND的mRNA水平明顯高于各實(shí)驗(yàn)組(P0.05),SAHA組心臟發(fā)育相關(guān)基因GATA4, NKX2.5, DHAND和EHAND的mRNA水平和Alc組相比無(wú)顯著差異(P0.05)。4)A1c和SAHA組心臟發(fā)育相關(guān)基因GATA4, NKX2.5, DHAND和EHAND啟動(dòng)子區(qū)的AcH3水平明顯高于各實(shí)驗(yàn)組(P0.05),SAHA組心臟發(fā)育相關(guān)基因GATA4, NKX2.5, DHAND和EHAND啟動(dòng)子區(qū)的AcH3水平和Alc組相比無(wú)顯著差異(P0.05)。結(jié)論1) SAHA能夠促進(jìn)孕期酒精暴露引起的HATs酶活性升高。2) SAHA能夠促進(jìn)孕期酒精暴露引起的組蛋白H3乙�；竭M(jìn)一步升高,加重AcH3表達(dá)基本異常。3) SAHA能夠加重孕期酒精暴露所導(dǎo)致的基因GATA4, NKX2.5, DHAND和EHAND的過(guò)表達(dá),其表達(dá)量較單純?cè)衅诰凭┞哆M(jìn)一步增加。4) SAHA能夠進(jìn)一步加重孕期酒精暴露所致的基因GATA4, NKX2.5, DHAND和EHAND啟動(dòng)子區(qū)的AcH3的表達(dá)水平,使其啟動(dòng)子區(qū)的AeH3結(jié)合量明顯增多。第四部分JNK信號(hào)通路介導(dǎo)酒精致H9C2心肌細(xì)胞組蛋白H3乙酰化上調(diào)引起心臟發(fā)育相關(guān)基因過(guò)表達(dá)目的H9C2心肌細(xì)胞在酒精干預(yù)的基礎(chǔ)上,予以JNK信號(hào)通路的特異性抑制劑SP600125阻斷其信號(hào)傳導(dǎo),觀察其對(duì)下游心臟發(fā)育相關(guān)基因及乙�；降挠绊�,探討JNK信號(hào)通路是否參與孕期酒精暴露所引起的組蛋白H3高乙�；瘜�(dǎo)致的心臟發(fā)育相關(guān)基因的表達(dá)異常,以此驗(yàn)證JNK信號(hào)通路介導(dǎo)酒精暴露引起H9C2細(xì)胞組蛋白H3高乙酰化導(dǎo)致心臟發(fā)育相關(guān)基因的過(guò)表達(dá)通路的上游信號(hào)。方法1)劑量篩選：根據(jù)實(shí)驗(yàn)室前期研究篩選出的酒精劑量處理H9C2細(xì)胞36小時(shí)后,加入不同濃度的SP600125阻斷JNK通路,采用MTT法測(cè)定各組的細(xì)胞生存率,篩選出SP600125的最適劑量。2)分組：分為空白對(duì)照組(Blank組),酒精組(Alc組),陰性對(duì)照組(DMSO組),SP組及酒精和SP組(A1c和SP組)。3)檢測(cè)指標(biāo)及方法：比色法測(cè)定以上各組H9C2細(xì)胞的HATs酶活性；Western Blotting法測(cè)定其組蛋白H3乙�；谋磉_(dá)水平；RT-Q-PCR法測(cè)定H9C2細(xì)胞的心臟發(fā)育相關(guān)基因GATA4, TBX5, DHAND和EHAND表達(dá)量,以及ChIP-RT-Q-PCR法測(cè)定上述的心臟發(fā)育相關(guān)基因啟動(dòng)子區(qū)AcH3的水平。結(jié)果1)選用0μM、5μM、7.5μM及10μM SP600125處理H9C2細(xì)胞36小時(shí)后細(xì)胞生存率與對(duì)照組沒(méi)有差異(P0.05),15μm、20μM及25μM SP600125使細(xì)胞生存率降低21.2%、36.8%、50.2%(P0.05)。2)A1c組H9C2細(xì)胞的HATs酶活性和乙�；M蛋白H3水平明顯高于各實(shí)驗(yàn)組(K0.05),Alc和SP組的HATs酶活性和乙�；M蛋白H3水平與Blank組、SP組及DMSO組相比無(wú)顯著差異(P0.05),SP組的HATs酶活性與Blank組及DMSO組相比無(wú)顯著差異(P0.05)。3)Alc組H9C2細(xì)胞心臟發(fā)育相關(guān)基因GATA4, DHAND和EHAND的mRNA水平明顯高于各實(shí)驗(yàn)組(P0.05),Alc和SP組心臟發(fā)育相關(guān)基因GATA4, DHAND和EHAND的mRNA水平和Blank組、SP組及DMSO組相比無(wú)顯著差異(P0.05)。各組間TBX5的mRNA水平相比無(wú)顯著差異(P0.05)。4)Alc組H9C2細(xì)胞心臟發(fā)育相關(guān)基因GATA4, DHAND和EHAND啟動(dòng)子區(qū)的AcH3水平明顯高于各實(shí)驗(yàn)組(P0.05),Alc和SP組心臟發(fā)育相關(guān)基因GATA4, DHAND和EHAND啟動(dòng)子區(qū)的AcH3水平和Blank組、SP組及DMSO組相比無(wú)顯著差異(P0.05)。各組間TBX5啟動(dòng)子區(qū)的AcH3水平相比無(wú)顯著差異(P0.05)。結(jié)論1)SP600125干預(yù)H9C2心肌細(xì)胞最適劑量是15μM。2)JNK信號(hào)通路參與酒精對(duì)H9C2細(xì)胞的HATs酶活性和組蛋白H3乙酰化水平的調(diào)節(jié)作用。3).INK信號(hào)通路參與酒精對(duì)H9C2細(xì)胞心臟發(fā)育相關(guān)基因GATA4,DHAND和EHAND的mRNA水平調(diào)節(jié)作用。4)JNK信號(hào)通路參與酒精對(duì)H9C2細(xì)胞心臟發(fā)育相關(guān)特異基因GATA4, DHAND和EHAND啟動(dòng)子區(qū)AcH3表達(dá)水平的調(diào)節(jié)作用。
【關(guān)鍵詞】：孕期酒精暴露 HATS酶 組蛋白H3乙酰化 心臟發(fā)育相 關(guān)基因 Curcumin 組蛋白乙�；敢种苿� 孕期酒精暴露 心 臟發(fā)育相關(guān)基因 乙酰化組蛋白H3 SAHA 組蛋白去乙�；敢种苿� 孕期酒精暴露 心臟 發(fā)育相關(guān)基因 乙�；M蛋白H3 H9C2細(xì)胞 酒精 SP600125 心臟發(fā)育相關(guān)基因 乙酰化組蛋白H3
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R714
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照6-9
• 摘要9-18
• 英文摘要18-29
• 前言29-35
• 參考文獻(xiàn)32-35
• 第一部分：孕期酒精暴露致胎鼠組蛋白高�；鹦呐K發(fā)育相關(guān)基因過(guò)表達(dá)35-73
• 1 材料與方法35-54
• 2 結(jié)果54-67
• 3 討論67-70
• 4 結(jié)論70
• 參考文獻(xiàn)70-73
• 第二部分 Curcumin上調(diào)組蛋白乙�；侥孓D(zhuǎn)孕期酒精暴露導(dǎo)致的心臟發(fā)育相關(guān)基因過(guò)表達(dá)73-88
• 1 材料與方法73-76
• 2 結(jié)果76-83
• 3 討論83-85
• 4 結(jié)論85
• 參考文獻(xiàn)85-88
• 第三部分 SAHA下調(diào)組蛋白乙酰化水平加重孕期酒精暴露導(dǎo)致心臟發(fā)育相關(guān)基因過(guò)表達(dá)88-102
• 1 材料與方法88-91
• 2 結(jié)果91-98
• 3 討論98-100
• 4 結(jié)論100
• 參考文獻(xiàn)100-102
• 第四部分 JNK信號(hào)通路介導(dǎo)酒精致H9C2心肌細(xì)胞組蛋白H3乙�；险{(diào)引起心臟發(fā)育相關(guān)基因過(guò)表達(dá)102-124
• 1 材料與方法102-110
• 2 結(jié)果110-118
• 3 討論118-120
• 4 結(jié)論120
• 參考文獻(xiàn)120-124
• 全文總結(jié)124-127
• 1 全文小結(jié)124-125
• 2 倒新性與意義125
• 3 局限性125-126
• 4 展望126-127
• 文獻(xiàn)綜述127-145
• 參考文獻(xiàn)142-145
• 致謝145-147
• 攻讀學(xué)位期間論文發(fā)表情況147-148

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  本文關(guān)鍵詞：組蛋白乙�；閷�(dǎo)孕期酒精暴露導(dǎo)致胎鼠心臟發(fā)育相關(guān)基因過(guò)表達(dá)的機(jī)制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：484643