本文關(guān)鍵詞：葉酸受體α介導(dǎo)ERK信號通路對宮頸癌變的作用及其機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：宮頸癌是女性常見婦科惡性腫瘤之一,已經(jīng)成為嚴(yán)重危害女性身心健康和生命安全的公共衛(wèi)生問題。高危型HPV持續(xù)感染是宮頸癌發(fā)生的主要原因,但不是唯一病因。葉酸受體α(FRα)在宮頸癌細(xì)胞中高表達(dá),與宮頸癌的發(fā)生演變密切相關(guān),然而,FRα在宮頸癌變過程中的作用及機(jī)制不明。本研究從人群研究和體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究兩個(gè)層面展開,評價(jià)FRα在宮頸病變中的作用及可能的分子生物學(xué)機(jī)制,為宮頸癌病因研究和防治提供科學(xué)依據(jù)。目的:目的:將人群研究和體外實(shí)驗(yàn)研究相結(jié)合,評價(jià)FRα在宮頸癌變過程中的作用,探討FRα介導(dǎo)ERK信號通路在宮頸癌變中的可能機(jī)制,為宮頸癌的病因和發(fā)病機(jī)制研究提供理論依據(jù),為宮頸癌的預(yù)防和治療開拓新思路。方法:方法:人群研究:在獲得山西醫(yī)科大學(xué)倫理審查委員會(huì)批準(zhǔn)的基礎(chǔ)上,遵循知情同意的原則,選取山西省腫瘤醫(yī)院、山西省婦幼保健院、山西省晉煤集團(tuán)總醫(yī)院就診的正常宮頸者(NC)34例、低度宮頸上皮內(nèi)瘤樣變者(CINⅠ)26例、中高度宮頸上皮內(nèi)瘤樣變者(CINⅡ/CINⅢ)57例、宮頸鱗狀細(xì)胞癌(SCC)患者59例為研究對象。采用自行設(shè)計(jì)的結(jié)構(gòu)式問卷調(diào)查研究對象的人口學(xué)特征、個(gè)人衛(wèi)生生活習(xí)慣和生殖情況等。同時(shí)采集宮頸手術(shù)或活檢組織標(biāo)本,應(yīng)用免疫組化法檢測宮頸組織中FRα、p-Src、p-ERK1/2、p-c-Fos和p-c-Jun蛋白表達(dá)水平,并應(yīng)用PCR技術(shù)檢測宮頸組織中HPVs感染情況。體外實(shí)驗(yàn)研究:采用流式細(xì)胞術(shù)對宮頸癌Hela、Caski、Siha和C33A細(xì)胞進(jìn)行FRα蛋白陽性細(xì)胞篩選,確定FRα蛋白強(qiáng)陽性的Hela細(xì)胞和弱陽性C33A細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)研究。采用FRαsi RNA干擾技術(shù)下調(diào)Hela細(xì)胞的FRα蛋白表達(dá)水平,并對Hela和C33A細(xì)胞進(jìn)行Src和ERK抑制。對FRα干擾組和未干擾組、Src抑制組和未抑制組、ERK抑制組和未抑制組分別采用CCK-8法測定細(xì)胞活性;流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期和凋亡;Real-time PCR技術(shù)檢測FRα、Src、ERK1、ERK2、c-Fos和c-Jun的m RNA表達(dá)水平;Western-blot技術(shù)檢測上述指標(biāo)的蛋白及磷酸化蛋白表達(dá)水平。采用Epidata3.0建立數(shù)據(jù)庫,并應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。單因素分析采用χ2檢驗(yàn)、趨勢χ2檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)、方差分析、重復(fù)測量方差分析,均數(shù)的兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn);多因素分析采用多元logistic回歸分析法。結(jié)果:結(jié)果:1.宮頸癌相關(guān)因素分析顯示,45歲以上(χ2=25.308,P=0.003)、初中以下文化程度(χ2=11.854,P=0.008)、居住地為農(nóng)村(χ2=19.141,P0.001)、洗澡頻率低(χ2=17.067,P=0.009)、洗陰頻率低(χ2=17.238,P=0.008)、月經(jīng)初潮年齡≥14歲(χ2=8.930,P=0.030)、首次性交年齡18歲(χ2=9.284,P=0.026)、有婦科病史(χ2=13.988,P=0.003)、產(chǎn)次大于4次(χ2=15.187,P=0.019)、HPVs感染(χ2=19.44,P=0.001)是宮頸癌變的危險(xiǎn)因素。2.隨著宮頸病變程度加重,FRα蛋白強(qiáng)陽性表達(dá)率(χ2=8.848,P=0.031;χ2趨勢=4.965,P=0.026)和p-c-Jun蛋白強(qiáng)陽性表達(dá)率(χ2=15.719,P=0.001;χ2趨勢=13.253,P0.001)、p-Src(χ2=12.62,P=0.006;χ2趨勢=9.49,P=0.002)和p-ERK1/2(χ2=11.00,P=0.012;χ2趨勢=10.58,P=0.001)及p-c-Fos(χ2=13.62,P=0.003;χ2趨勢=10.39,P=0.001)蛋白陽性表達(dá)率均呈線性增加趨勢。3.下調(diào)FRα后,Hela細(xì)胞增殖能力下降,G0/G1期細(xì)胞比例增高,S期、G2/M期細(xì)胞比例和增殖指數(shù)下降,細(xì)胞早期凋亡率增加(F=261.972,P0.001);抑制Src和ERK后,Hela和C33A細(xì)胞均顯示增殖能力下降,G0/G1期細(xì)胞比例增高,S期、G2/M期細(xì)胞比例和增殖指數(shù)下降,細(xì)胞早期凋亡率增加(Hela:t=11.498,P=0.007;C33A:t=53.501,P=0.001);抑制Src和ERK后,Hela與C33A細(xì)胞相比,細(xì)胞增殖能力和細(xì)胞周期變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);抑制Src后,對C33A細(xì)胞凋亡的促進(jìn)作用強(qiáng)于Hela細(xì)胞,差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=31.631,P0.001);抑制ERK后,對C33A細(xì)胞凋亡的促進(jìn)作用強(qiáng)于Hela細(xì)胞,但差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.724,P=0.496)。4.下調(diào)FRα后,Src、ERK1、ERK2和c-Jun的m RNA表達(dá)水平均增高(P0.05),p-ERK1/2、c-Fos、p-c-Fos、c-Jun、p-c-Jun蛋白表達(dá)水平降低(P0.05),p-Src蛋白表達(dá)水平增加(P0.05);抑制Src后,ERK1、ERK2、c-Fos和c-Jun m RNA表達(dá)水平增加(P0.05),ERK、p-ERK、p-c-Fos蛋白表達(dá)水平降低(P0.05)、c-Jun和p-c-Jun蛋白表達(dá)水平增加(P0.05);抑制ERK后,Hela細(xì)胞c-Fos和c-Jun m RNA表達(dá)水平增加(P0.05),Hela和C33A細(xì)胞的p-c-Fos蛋白表達(dá)水平降低(P0.05)、p-c-Jun蛋白表達(dá)水平增高(P0.05)。5.多元logistic回歸分析結(jié)果顯示,以正常宮頸組為對照,洗澡頻率1次/周(OR=0.026)是CINⅠ的保護(hù)因素,婦科病史(OR=8.904)、FRα高表達(dá)(OR=6.599)是CINⅠ的危險(xiǎn)因素;洗澡頻率1次/周(OR=0.088)是CINⅡ/Ⅲ的保護(hù)因素,HPVs感染(OR=5.588)是CINⅡ/Ⅲ的危險(xiǎn)因素;HPVs感染(OR=12.894)、FRα高表達(dá)(OR=8.210)、居住地為農(nóng)村(OR=6.387)、Src活化(OR=5.236)、c-Jun活化(OR=4.281)是宮頸癌的主要危險(xiǎn)因素。結(jié)論:結(jié)論:1.FRα高表達(dá)、Src、ERK1/2、c-Fos和c-Jun蛋白活化可促進(jìn)宮頸癌變的發(fā)生和進(jìn)展。FRα、Src和ERK1/2高表達(dá)可促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞增殖、抑制凋亡、促進(jìn)細(xì)胞周期向G2/M期轉(zhuǎn)變。2.FRα可通過上調(diào)ERK信號通路的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子ERK1/2、c-Fos、c-Jun蛋白表達(dá)促進(jìn)宮頸癌變進(jìn)展。Src活化可通過上調(diào)ERK1/2、c-Fos蛋白表達(dá)促進(jìn)宮頸癌變過程。ERK磷酸化可通過上調(diào)c-Fos蛋白表達(dá)起促進(jìn)宮頸癌變的作用。FRα可激活ERK信號通路關(guān)鍵因子的表達(dá),促進(jìn)宮頸癌變進(jìn)展,提示FRα可作為宮頸癌預(yù)防和治療的新靶點(diǎn)。3.下調(diào)FRα后,Src蛋白表達(dá)增加;抑制Src和ERK后,c-Jun蛋白表達(dá)增加,可能與FRα激活的ERK信號通路中有其他信號因子存在有關(guān),也可能與存在負(fù)反饋機(jī)制有關(guān),詳細(xì)機(jī)制有待進(jìn)一步探討。4.多因素分析提示,HPVs感染、FRα高表達(dá)、居住地為農(nóng)村、Src和c-Jun的活化、婦科病史為宮頸癌和癌前病變的主要危險(xiǎn)因素,勤洗澡是宮頸癌前病變的保護(hù)因素。
【關(guān)鍵詞】：葉酸受體α Src ERK1/2 c-Fos c-Jun 信號通路 宮頸癌變 機(jī)制
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-14
• 常用縮寫詞中英文對照表14-15
• 前言15-19
• 1 材料與方法19-38
• 第一部分 人群研究19-24
• 1.1 研究對象19
• 1.2 資料和標(biāo)本收集19-20
• 1.3 主要儀器及試劑20-22
• 1.4 實(shí)驗(yàn)方法22-24
• 第二部分 體外實(shí)驗(yàn)研究24-38
• 1.5 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞24-25
• 1.6 實(shí)驗(yàn)材料25-30
• 1.7 實(shí)驗(yàn)方法30-35
• 1.8 質(zhì)量控制35-36
• 1.9 數(shù)據(jù)錄入與統(tǒng)計(jì)分析36-38
• 2 結(jié)果38-86
• 第一部分 人群研究38-51
• 2.1 人群研究對象一般情況及宮頸癌相關(guān)因素38-40
• 2.2 不同程度宮頸病變組FRα 蛋白表達(dá)比較40-43
• 2.3 不同程度宮頸病變組ERK信號通路關(guān)鍵因子蛋白表達(dá)情況比較43-50
• 2.4 宮頸癌變相關(guān)因素多元logistic回歸分析50-51
• 第二部分 體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)51-86
• 2.5 FRα 對宮頸癌細(xì)胞的作用及機(jī)制51-64
• 2.6 Src對宮頸癌細(xì)胞的作用及機(jī)制64-75
• 2.7 ERK對宮頸癌細(xì)胞的作用及機(jī)制75-86
• 3 討論86-96
• 3.1 宮頸癌變相關(guān)因素86
• 3.2 FRα 在宮頸癌變過程中的作用及機(jī)制86-90
• 3.3 Src在宮頸癌變過程中的作用及機(jī)制90-92
• 3.4 ERK信號通路在宮頸癌變過程中的作用及機(jī)制92-96
• 結(jié)論96-97
• 創(chuàng)新點(diǎn)與不足之處97-98
• 參考文獻(xiàn)98-109
• 綜述109-125
• 參考文獻(xiàn)118-125
• 致謝125-126
• 在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果126-128
• 個(gè)人簡介128

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 丁玲;馬景麗;周芩;王金桃;;葉酸對人宮頸癌細(xì)胞增殖抑制的作用及其與HPV16相互關(guān)系的研究[J];衛(wèi)生研究;2013年05期

  本文關(guān)鍵詞：葉酸受體α介導(dǎo)ERK信號通路對宮頸癌變的作用及其機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：444760