本文關(guān)鍵詞：FoxO蛋白在應(yīng)激致脂代謝紊亂中的作用及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：隨著社會逐漸進(jìn)步,人們的生活節(jié)奏不斷加快,機(jī)體所承受的生理和心理性應(yīng)激復(fù)雜和強(qiáng)烈程度不斷增加。長期慢性應(yīng)激可以打亂機(jī)體內(nèi)環(huán)境,在許多疾病的發(fā)生過程中起重要作用。目前,慢性應(yīng)激被認(rèn)為是人類許多重大疾病的重要病因和誘因之一,約75%-90%的疾病發(fā)生與應(yīng)激機(jī)制的激活有關(guān)。長期以來,代謝紊亂和代謝性疾病的發(fā)生歸結(jié)于器官功能的失代償和神經(jīng)內(nèi)分泌的共同結(jié)果,但近年來的研究表明,它們的發(fā)生發(fā)展與應(yīng)激機(jī)制有著密切關(guān)系。但應(yīng)激在脂代謝性疾病如非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD)的作用及具體機(jī)制尚不是非常明確。叉頭蛋白O(Fork head box 0, FoxO)家族在介導(dǎo)胰島素和胰島素樣生長因子通路參與細(xì)胞分化,凋亡和機(jī)體能量代謝中有至關(guān)重要的作用。通常認(rèn)為,FoxO蛋白作為胰島素代謝通路上的重要分子,對調(diào)控機(jī)體血糖的平衡有重要作用。近年來,許多研究發(fā)現(xiàn),FoxO蛋白不僅在糖代謝中起作用,同時也參與了脂質(zhì)代謝的調(diào)控,可能是聯(lián)系2型糖尿病和脂代謝紊亂的關(guān)鍵分子,但關(guān)于在應(yīng)激致脂代謝紊亂過程中FoxO蛋白的變化及作用仍未見研究報導(dǎo)。研究目的研究應(yīng)激在脂代謝紊亂如NAFLD發(fā)生發(fā)展中的作用并進(jìn)一步探究肝臟中FoxO蛋白在應(yīng)激致肝臟脂質(zhì)代謝紊亂中的調(diào)控作用。研究方法用足底電刺激和束縛應(yīng)激構(gòu)建小鼠慢性應(yīng)激模型,通過檢測小鼠肝臟內(nèi)的甘油三酯含量和病理切片(HE染色和油紅O染色)來評定小鼠是否發(fā)生NAFLD;利用高通量檢測技術(shù)對小鼠腹內(nèi)脂肪組織、血清及肝臟炎性因子進(jìn)行檢測；用實時熒光定量PCR(real-time PCR, RT-PCR)和蛋白質(zhì)免疫印跡(Western blot)方法檢測肝臟脂質(zhì)代謝相關(guān)基因,肝臟內(nèi)FoxO蛋白含量及上游通路變化；用FoxO6肝臟內(nèi)特異性高表達(dá)C57/b16小鼠及尾靜脈注射FoxO6腺病毒使之在體內(nèi)高表達(dá)Foxo6的C57/b16小鼠觀察血清膽固醇含量變化；利用RT-PCR技術(shù)篩選膽固醇代謝相關(guān)基因表達(dá)量情況；用FoxO6腺病毒轉(zhuǎn)染小鼠肝原代細(xì)胞,觀察FoxO6對LDLR基因的調(diào)控作用,并用熒光素酶報告系統(tǒng)及染色質(zhì)免疫沉淀(Chromatin Immunoprecipitation, Chip)來進(jìn)一步探究其調(diào)控方式。研究結(jié)果1.慢性應(yīng)激可導(dǎo)致小鼠攝食量及體重增加量減少。應(yīng)激后12周內(nèi),小鼠攝食量和體重?zé)o明顯增加,而對照組則穩(wěn)定增加。應(yīng)激12周后,應(yīng)激組小鼠體重及攝食量較對照組顯著減少。2.慢性應(yīng)激組小鼠腹部脂肪含量較對照組顯著降低,HE染色結(jié)果顯示,應(yīng)激組脂肪細(xì)胞較對照組顯著減小,血清中游離脂肪酸顯著高于對照組。慢性應(yīng)激小鼠脂肪IL-6和IL-1β較對照組顯著增高,而TNF-α和IL-18無明顯變化,使炎癥細(xì)胞聚集的趨化因子MIP-2、MCP-1和PAI-1血清含量也同樣顯著升高。3.慢性應(yīng)激小鼠的肝指數(shù)(HI,肝臟重量/體重×100)升高。血清中的TC和TG均有升高趨勢但無統(tǒng)計學(xué)意義,而肝臟中TG, TC含量顯著升高。肝臟HE染色顯示,慢性應(yīng)激組有明顯的脂滴沉積,肝細(xì)胞胞質(zhì)疏松,呈氣球樣變,炎性灶增加。慢性應(yīng)激組肝臟油紅O染色切片有大量微泡性脂滴沉積。4.慢性應(yīng)激小鼠的血清ALT和AST水平顯著升高,并且NAFLD活動性炎性評分也高于對照組。ELISA結(jié)果顯示,IL-6和TNF-α在血清中和肝臟中含量均升高；IL-1β和MCP-1血清含量升高,肝臟含量不變；IL-18均無明顯變化。5. 慢性應(yīng)激小鼠肝臟內(nèi)與TG合成相關(guān)基因Fasn、SCD1表達(dá)量顯著升高,而其他基因如ACC1、ELOVL6、MTTP、ApoB等均無明顯變化。6.12周慢性應(yīng)激小鼠的FoxO1 mRNA和蛋白在肝臟中的表達(dá)量均較對照組小鼠顯著增加；FoxO1在小鼠肝臟細(xì)胞核內(nèi)蛋白量較對照組增加；肝臟內(nèi)胰島素受體2(IRS2)mRNA表達(dá)量顯著降低,同時其下游的p-Akt/Akt相對減少。7.肝臟內(nèi)特異性高表達(dá)FoxO6轉(zhuǎn)基因小鼠(FoxO6-tg)同對照組野生型小鼠對比,肝臟內(nèi)FoxO6基因表達(dá)水平升高了三倍,FoxO6蛋白表達(dá)量升高了兩倍。FoxO6-tg小鼠體重與野生型小鼠相比,無明顯變化,但血清中膽固醇水平顯著升高,呈現(xiàn)出高膽固醇血癥狀態(tài)。8. Fox06轉(zhuǎn)基因小鼠肝臟內(nèi)LDL受體(LDLR)勺表達(dá)量較野生型小鼠了約50%-60%,蛋白表達(dá)水平同mRNA表達(dá)趨勢一致,較野生型小鼠顯著降低。野生型小鼠尾靜脈注射FoxO6病毒后檢測其肝臟LDLR基因及蛋白表達(dá)量變化,結(jié)果與FoxO6轉(zhuǎn)基因小鼠一致。Fox06病毒轉(zhuǎn)染入肝原代細(xì)胞,觀察LDLR表達(dá)量的變化。結(jié)果顯示,FoxO6病毒轉(zhuǎn)染組較空白病毒轉(zhuǎn)染組LDLR的基因及蛋白表達(dá)量均明顯降低。LDLR的已知轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子SREBP2和其轉(zhuǎn)錄后調(diào)控因子PCSK9的基因表達(dá)量均沒有明顯變化。9.我們設(shè)計了含有SRE序列的LDLR啟動子熒光素酶報告質(zhì)粒,利用HepG2細(xì)胞系,通過轉(zhuǎn)染SREBP2質(zhì)粒及FoxO6病毒來觀察FoxO6對LDLR的調(diào)控作用。結(jié)果顯示,SREBP2可顯著上調(diào)HepG2細(xì)胞內(nèi)LDLR的表達(dá),而這種上調(diào)作用在加入FoxO6病毒后減弱,并與FoxO6病毒濃度呈劑量依賴效應(yīng)。染色質(zhì)免疫沉淀實驗(ChIP assay)顯示,在加入FoxO6病毒后,SREBP2與LDLR啟動子區(qū)的結(jié)合DNA擴(kuò)增條帶較空白病毒組顯著減弱。研究結(jié)論1.慢性應(yīng)激可導(dǎo)致小鼠NAFLD的發(fā)生；這種作用可能是通過增加肝臟內(nèi)甘油三酯合成,促進(jìn)脂肪組織分解,增加機(jī)體炎癥反應(yīng)來介導(dǎo)的,IRS2-Akt-FoxO1通路可能在其中起重要作用；2. FoxO6可通過減少SREBP2與LDLR啟動子區(qū)的結(jié)合來降低LDLR的表達(dá),導(dǎo)致血液中膽固醇不能被內(nèi)吞入肝臟代謝,形成高甘油三酯血癥。全文小結(jié)本文通過研究FoxO蛋白在應(yīng)激致非酒精性脂肪肝(NAFLD)及高膽固醇血癥中的作用,發(fā)現(xiàn)了FoxO蛋白作為轉(zhuǎn)錄因子,可能通過調(diào)控甘油三酯合成相關(guān)基因及肝臟攝取膽固醇的受體表達(dá)量來導(dǎo)致NAFLD及高膽固醇血癥的發(fā)生,在脂質(zhì)代謝紊亂中起重要調(diào)控作用。FoxO蛋白作為胰島素的下游通路蛋白,可能是聯(lián)系胰島素抵抗和脂代謝紊亂的關(guān)鍵分子。FoxO蛋白可能成為臨床防治脂質(zhì)代謝紊亂的新靶點。
【關(guān)鍵詞】：叉頭蛋白O 脂代謝紊亂 肝細(xì)胞 非酒精性脂肪肝 高脂血癥
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R589.2;R575.5
【目錄】：

• 摘要6-9
• Abstract9-13
• 英文縮寫表13-15
• 第一部分 慢性應(yīng)激對非酒精性脂肪肝發(fā)生發(fā)展的影響15-36
• 前言15-16
• 材料和方法16-27
• 實驗結(jié)果27-32
• 討論32-35
• 結(jié)論35-36
• 第二部分 FoxO1在應(yīng)激致非酒精性脂肪肝中的作用及機(jī)制研究36-51
• 前言36-37
• 材料和方法37-44
• 實驗結(jié)果44-48
• 討論48-50
• 結(jié)論50-51
• 第三部分 FoxO6在高膽固醇血癥中的作用及機(jī)制研究51-71
• 前言51-52
• 材料和方法52-60
• 實驗結(jié)果60-68
• 討論68-70
• 結(jié)論70-71
• 全文總結(jié)71-72
• 綜述一 叉頭蛋白O在調(diào)控代謝中的作用72-79
• 綜述二 細(xì)胞因子和脂肪細(xì)胞因子在非酒精性脂肪肝中研究新進(jìn)展79-86
• 參考文獻(xiàn)86-100
• 攻讀博士學(xué)位期間取得的研究成果100-102
• 致謝102-103

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 鄒濤,姚樹橋;慢性應(yīng)激的心理生理中介機(jī)制[J];國外醫(yī)學(xué).精神病學(xué)分冊;2001年02期

2 蔣蔚茹;徐三榮;時俊;蔡亦蘊(yùn);施慎遜;;慢性應(yīng)激與軀體化癥狀關(guān)系的實驗研究[J];復(fù)旦學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2008年05期

3 張莉,張大勇;慢性應(yīng)激與心血管病危險因子的關(guān)系探討[J];山東醫(yī)藥;2005年28期

4 何芙蓉,王慧聰,雷曉峰,趙曉林;慢性應(yīng)激的神經(jīng)內(nèi)分泌研究進(jìn)展[J];中國誤診學(xué)雜志;2002年04期

5 馬良;;黃酒對慢性應(yīng)激大鼠腸道微生物的影響[J];中國微生態(tài)學(xué)雜志;2013年05期

6 李萌萌;崔曉;朱凌峰;劉航;彭彥;辛琳;代卉;朱建津;;色氨酸對慢性應(yīng)激小鼠行為的影響[J];食品與生物技術(shù)學(xué)報;2013年08期

7 張黎明;陳紅霞;張有志;袁莉;宮澤輝;李云峰;;氟西汀對慢性應(yīng)激大鼠海馬磷酸化微管相關(guān)蛋白-2表達(dá)的影響[J];解放軍藥學(xué)學(xué)報;2008年06期

8 趙桂景;李文娜;陳利平;王發(fā)渭;孫志高;許成勇;;舒郁散對慢性應(yīng)激抑郁血清腎上腺皮質(zhì)激素水平的影響[J];中國中醫(yī)急癥;2013年04期

9 于慧;崔維珍;本刊;;慢性應(yīng)激對海馬的影響及其機(jī)制[J];四川精神衛(wèi)生;2013年02期

10 李衛(wèi);邊艷青;;外周炎癥及慢性應(yīng)激對認(rèn)知功能的影響及影響機(jī)制[J];免疫學(xué)雜志;2014年07期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉曉華;錢令嘉;弓景波;沈靜;;蛋白質(zhì)組方法分析慢性應(yīng)激大鼠心臟線粒體蛋白質(zhì)的變化[A];中國蛋白質(zhì)組學(xué)首屆學(xué)術(shù)大會論文摘要集[C];2003年

2 金麗英;郭宗君;楊學(xué)偉;;慢性應(yīng)激對大鼠學(xué)習(xí)能力和決策行為的影響[A];第十一屆全國心理學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2007年

3 姚海燕;施桂蘭;王任燁;陳亮;徐英;庫寶善;;慢性應(yīng)激大鼠模型的應(yīng)用與改進(jìn)[A];第十二屆全國神經(jīng)精神藥理學(xué)學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2006年

4 郝文宇;楊楠;朱海波;劉雁勇;劉赫;左萍萍;;梔子粗提物治療慢性應(yīng)激致抑郁模型小鼠的機(jī)制研究[A];中國藥理學(xué)會第十次全國學(xué)術(shù)會議�？痆C];2009年

5 畢麗麗;鄒偉;唐小卿;;硫化氫在慢性應(yīng)激所致海馬神經(jīng)損傷中的意義[A];中南地區(qū)第八屆生理學(xué)學(xué)術(shù)大會論文摘要匯編[C];2012年

6 熊微;侯公林;;慢性應(yīng)激大鼠生殖行為和睪丸細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變[A];增強(qiáng)心理學(xué)服務(wù)社會的意識和功能——中國心理學(xué)會成立90周年紀(jì)念大會暨第十四屆全國心理學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2011年

7 張黎明;陳紅霞;張有志;宮澤輝;李云峰;;慢性應(yīng)激對大鼠海馬磷酸化微管相關(guān)蛋白(p-MAP-2)的影響[A];中國藥理學(xué)會第九次全國會員代表大會暨全國藥理學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

8 畢波;王哲;金魁和;;慢性應(yīng)激對大鼠海馬bcl-xl表達(dá)的影響及應(yīng)激后的變化[A];中國神經(jīng)科學(xué)學(xué)會精神神經(jīng)專業(yè)委員會成立大會暨第一屆學(xué)術(shù)會議論文集[C];2004年

9 盧峻;梁佳;韓止榮;圖婭;;電針百會、印堂穴對慢性應(yīng)激抑郁大鼠模型腦內(nèi)氨基酸含量的影響[A];2011中國針灸學(xué)會年會論文集（摘要）[C];2011年

10 朱悅;葉兆波;蔡智仁;董婷霞;詹華強(qiáng);;中藥復(fù)方開心散對慢性應(yīng)激抑郁大鼠腦中神經(jīng)遞質(zhì)與神經(jīng)營養(yǎng)因子的調(diào)控研究[A];中藥與天然藥高峰論壇暨第十二屆全國中藥和天然藥物學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2012年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 上海中醫(yī)藥大學(xué)教授 何裕民;長期糾結(jié) 引癌上身 促癌復(fù)發(fā)[N];保健時報;2012年

2 實習(xí)生 程鳳;慢性應(yīng)激引起DNA損傷機(jī)理揭開[N];科技日報;2011年

3 王雪飛;戰(zhàn)斗或逃跑 我們?nèi)绾螒?yīng)對壓力[N];健康報;2007年

4 楊孝文;青草味能減壓[N];中國中醫(yī)藥報;2009年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 劉韻資;FoxO蛋白在應(yīng)激致脂代謝紊亂中的作用及機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

2 彭云麗;慢性應(yīng)激誘發(fā)抑郁行為的炎性機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2013年

3 武杰;組蛋白去乙�；�-2（HDAC2）在慢性應(yīng)激所致認(rèn)知損傷中的作用機(jī)制探討[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

4 孟宏;電針對慢性應(yīng)激疲勞證候模型大鼠神經(jīng)免疫網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)機(jī)制研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2003年

5 紀(jì)倩;不同電針對慢性應(yīng)激抑郁大鼠海馬神經(jīng)營養(yǎng)因子及谷氨酸代謝相關(guān)蛋白的影響[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2013年

6 王榮平;TLR4信號通路在大鼠慢性應(yīng)激心肌損傷中作用的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2011年

7 胡海燕;調(diào)肝治法影響慢性應(yīng)激大鼠海馬神經(jīng)干細(xì)胞分化機(jī)制的研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2015年

8 于琦;慢性應(yīng)激大鼠模型中醫(yī)證候性質(zhì)及其形成機(jī)理的研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2008年

9 李軍杰;慢性應(yīng)激與血壓、血糖、血脂、血清皮質(zhì)醇、腎上腺素、去甲腎上腺素和5-HTTLPR的關(guān)系[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2010年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 胡葳葳;慢性應(yīng)激抑制大鼠基底外側(cè)杏仁核5-HT_2受體介導(dǎo)的長時程增強(qiáng)[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 崔栓龍;輔酶Q_(10)對慢性應(yīng)激大鼠實驗性牙周炎牙齦組織MMP-9和血清CTX-1表達(dá)的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 賈祥磊;慢性應(yīng)激對嗅覺缺失小鼠記憶及情緒的影響及嗅覺缺失對海馬CA1區(qū)LTD誘導(dǎo)的影響[D];昆明理工大學(xué);2015年

4 孫美玉;丹參多酚酸對慢性應(yīng)激后小鼠認(rèn)知功能的改善作用及其機(jī)制[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

5 唐偉;產(chǎn)前應(yīng)激加劇慢性子代應(yīng)激誘導(dǎo)的成年子鼠學(xué)習(xí)記憶損傷及機(jī)制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

6 沈妮;慢性應(yīng)激對卵泡發(fā)育的影響及自分泌、旁分泌調(diào)控機(jī)制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2010年

7 楊祥思;慢性應(yīng)激對海馬功能和結(jié)構(gòu)的不對稱影響[D];浙江理工大學(xué);2013年

8 呂保來;慢性應(yīng)激致大腦皮層神經(jīng)元蛋白質(zhì)酪氨酸硝基化與凋亡關(guān)系的研究[D];鄭州大學(xué);2006年

9 程娟;慢性應(yīng)激致老年小鼠學(xué)習(xí)記憶損傷及機(jī)制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2014年

10 宋倩;急慢性應(yīng)激對小鼠自發(fā)行為和空間學(xué)習(xí)記憶功能的影響及其機(jī)制[D];曲阜師范大學(xué);2010年

  本文關(guān)鍵詞：FoxO蛋白在應(yīng)激致脂代謝紊亂中的作用及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號：410237