本文關鍵詞：LXR和MIF在實驗性自身免疫性葡萄膜炎中的作用及機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景葡萄膜炎(uveitis)是指一組廣泛累及葡萄膜,視網(wǎng)膜,視網(wǎng)膜血管及玻璃體的炎癥。也稱眼內(nèi)炎癥(endophthalmitis)。葡萄膜炎多發(fā)于青壯年,病程長,易反復發(fā)作,病因復雜,發(fā)病機制也尚不完全清楚,故其預防較困難,治療效果也不理想。因此,尋找合理且有效的治療藥物,是眼科領域中一個亟待解決的問題。非特異性和特異性免疫反應都可引起葡萄膜炎,多種抗原誘導的實驗性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)是代表人類由特異性免疫反應引起的葡萄膜炎的經(jīng)典動物模型。研究表明EAU是由T細胞介導的,CD4+T細胞在EAU的發(fā)生和發(fā)展中起著重要的調(diào)控作用。光感受器間維生素A類結(jié)合蛋白(IBBP)特異性的Thl/IFN-γ和(或)Th17/IL-17在EAU中均具有致病作用。最近研究報道肝臟X受體(LXR)可以調(diào)節(jié)炎癥和自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展,LXR通過抑制Thl和Th17細胞的分化從而減輕炎癥和自身免疫性疾病。研究表明LXR激動劑可以減輕實驗性自身免疫性腦炎(EAE)和膠原誘導的關節(jié)炎(CIA)等動物模型的全身性免疫反應,也可以減輕糖尿病視網(wǎng)膜病變(DR)小鼠的眼局部炎癥反應。但其在自身免疫性葡萄膜炎中的作用尚不清楚。巨噬細胞遷移抑制因子(MIF)是一種多效性的細胞因子,是固有免疫反應和適應性免疫反應的上游激活因子,具有促炎作用,能夠拮抗糖皮質(zhì)激素激素(GC)的抗炎作用。最近本團隊研究己表明MIF基因的2個單核苷酸多態(tài)性(SNP)位點與白塞氏病(BD)和Vogt-小柳原田(VKH)患者具有相關性。但MIF在葡萄膜炎中的作用及機制尚需進一步研究�；谝陨涎芯勘尘�,本課題的研究包括以下兩部分實驗：1.探討LXR和MIF在EAU小鼠視網(wǎng)膜組織中的表達水平,確定其是否參EAU眼部炎癥反應的發(fā)生和發(fā)展。2.進一步探討LXR和MIF在EAU眼部炎癥反應中的作用及機制。通過上述研究,以期闡明LXR和MIF在EAU中的作用及機制,為葡萄膜炎的發(fā)病機制提供新思路,并為其防治提供新策略和新靶點。第一部分 LXR在EAU眼部炎癥反應中的作用及機制研究目的：LXR是一種配體激活轉(zhuǎn)錄因子,主要作用是調(diào)節(jié)膽固醇和脂質(zhì)代謝。近年研究發(fā)現(xiàn)LXR在炎癥和免疫調(diào)節(jié)中也起著重要作用。本實驗通過對IRBP誘導的EAU小鼠進行LXR激動劑]TO901317(TO90)干預,觀察LXR葡萄膜炎中的作用及其潛在機制。方法：B10.RⅢ小鼠皮下注射IRBP誘導EAU模型,分別給予T090和溶媒進行干預。分別對小鼠眼前段和眼后段進行臨床評分和病理評分,用熒光定量PCR(real time-PCR)的方法檢測小鼠視網(wǎng)膜中LXRs、炎癥因子和轉(zhuǎn)錄因子p65的mRNA水平,用Western blotting的方法檢測LXRs、LXRs靶基因ABCA1及p65的蛋白水平。結(jié)果：(1) LXRa和LXRβ在正常小鼠視網(wǎng)膜組織中均有表達。與正常小鼠相比,EAU小鼠視網(wǎng)膜組織中LXRa的表達上調(diào),而LXRβ的表達無明顯差異。(2) 正常小鼠進行T090干預后,靶基因ABCA1的蛋白水平上調(diào)。而EAU小鼠進行T090干預后,與EAU小鼠溶媒處理組相比,ABCA1的蛋白水平也上調(diào)。表明LXR受體是配體依賴型的,在EAU小鼠中給予T090后LXRa被激活。(3) 給予T090的EAU小鼠,炎癥高峰期眼內(nèi)炎癥的臨床評分和組織學評分均顯著低于溶媒治療組,表明T090減輕了EAU的眼部炎癥反應程度。同時,促炎細胞因子TNF-、IL-6、IL-1β、MCP-1、IL-17和IFN-γ的表達顯著降低。(4) 與給予溶媒的EAU小鼠相比,T090抑制了EAU小鼠IRBP特異性的系統(tǒng)免疫反應,同時抑制了Thl和Th17細胞極化,核轉(zhuǎn)錄因子亞單位p65的水平明顯下調(diào)。結(jié)論：在EAU中,T090激活了LXRa,顯著改善了EAU的炎癥反應程度。在EAU預防和治療階段給予T090均能抑制EAU小鼠Th1/IFN-y和Th17/IL-17的極化。T090在EAU中的抑炎作用與NF-κB信號通路抑制有關。LXR可能成為干預葡萄膜炎的新靶點。第二部分 MIF在EAu眼部炎癥反應中的作用及機制研究目的：MIF是先天性和適應性免疫反應的上游激活因子,具有促炎作用。在風濕性關節(jié)炎和動脈粥樣硬化等疾病中起著重要的免疫調(diào)節(jié)作用。然而,MIF在自身免疫性疾病葡萄膜炎中的作用及其機制尚不清楚。本實驗通過干預EAU小鼠中MIF的表達,研究MIF在EAU中的作用及可能的機制。方法：以腺相關病毒(AAV)為載體,構(gòu)建AAV8.CBA.MIF進行小鼠視網(wǎng)膜下注射過表達MIF基因。3周后IRBP皮下注射建立EAU小鼠模型。低表達MIF基因即在EAU小鼠中給予MIF拮抗劑ISO-1。用real time-PCR檢測視網(wǎng)膜組織細胞因子mRNA的表達,視網(wǎng)膜電圖(ERG)檢測小鼠視功能,Western blotting檢測視網(wǎng)膜組織蛋白的表達,利用流式(FCM)檢測IL-17和IFN-y陽性T細胞的比例。結(jié)果：(1) 與正常小鼠相比,EAU小鼠炎癥高峰期視網(wǎng)膜組織中MIF及其受體CD44和CD74的表達升高。(2) 與視網(wǎng)膜下注射AAV8.CBA.eGFP的EAU小鼠相比,視網(wǎng)膜下注射AAV8.CBA.MIF的EAU小鼠視網(wǎng)膜組織中促炎細胞因子水平明顯上調(diào),ERG檢測結(jié)果表明a波和b波振幅均降低。同時,Notch信號通路中Notch1、Notch4和DLL4的表達升高,活化的Notch分子NICD及經(jīng)典靶基因Hes-1的表達上調(diào)。視網(wǎng)膜下注射AAV8.CBA.MIF的EAU小鼠給予了Notch信號通路抑制劑DAPT后,與應用溶媒組相比,EAU小鼠視網(wǎng)膜組織中促炎細胞因子水平明顯下調(diào),減輕了眼內(nèi)炎癥反應。(3) 在EAU小鼠中給予MIF拮抗劑ISO-1使其低表達后,EAU小鼠眼內(nèi)炎癥的嚴重程度降低,視網(wǎng)膜組織促炎因子水平降低,小鼠視網(wǎng)膜組織和玻璃體腔內(nèi)巨噬細胞特異性的F4/80抗體染色陽性的細胞數(shù)量減少,脾臟和淋巴結(jié)來源的淋巴細胞中IL-17和IFN-y陽性T細胞的比例均下降。結(jié)論：EAU小鼠中過表達MIF促進眼內(nèi)炎癥反應的程度。Notch信號通路參與EAU中MIF促炎的病理過程。MIF與Notch信號通路之間的相互作用在調(diào)節(jié)EAU的眼內(nèi)炎癥中起著重要作用,MIF與Notch信號通路可能是EAU有效的干預靶點。
【關鍵詞】：EAU LXR MIF 炎癥 視網(wǎng)膜
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R773.9
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照6-8
• 中文摘要8-13
• 英文摘要13-19
• 前言19-25
• 第一部分 LXR在EAU眼內(nèi)炎癥反應中的作用及機制研究25-49
• 第一章 LXR在EAU小鼠視網(wǎng)膜組織中的表達水平25-34
• 1 材料和方法25-30
• 2 結(jié)果30-33
• 3 討論33-34
• 第二章 LXR在EAU眼內(nèi)炎癥反應中的作用研究34-41
• 1 材料和方法34-36
• 2 結(jié)果36-39
• 3 討論39-41
• 第三章 LXR在EAU眼內(nèi)炎癥反應中的機制研究41-46
• 1 材料和方法41-43
• 2 結(jié)果43-45
• 3 討論45-46
• 本部分總結(jié)46-48
• 研究展望48-49
• 第二部分 MIF在EAU眼內(nèi)炎癥反應中的作用及機制研究49-80
• 第一章 MIF在EAU小鼠視網(wǎng)膜組織中的表達水平49-54
• 1 材料和方法49-52
• 2 結(jié)果52-53
• 3 討論53-54
• 第二章 MIF在EAU眼內(nèi)炎癥反應中的作用研究54-63
• 1 材料和方法54-58
• 2 結(jié)果58-62
• 3 討論62-63
• 第三章 MIF在EAU眼內(nèi)炎癥反應中的促炎作用與Notch信號通路有關63-70
• 1 材料和方法63-65
• 2 結(jié)果65-68
• 3 討論68-70
• 第四章 MIF低表達對EAU眼內(nèi)炎癥反應的作用研究70-77
• 1 材料和方法70-71
• 2 結(jié)果71-75
• 3 討論75-77
• 本部分總結(jié)77-79
• 研究展望79-80
• 參考文獻80-85
• 文章綜述：重組腺相關病毒介導遺傳性色盲基因治療的研究進展85-94
• 參考文獻90-94
• 致謝94-95
• 攻讀博士期間的論文95

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