本文關(guān)鍵詞：非小細(xì)胞肺癌VTI1A基因SNP多態(tài)性及其相關(guān)性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景肺癌是全球最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。在中國(guó),肺癌在男女人群中的死亡率一直居高不下,而且近幾十年,肺癌的5年生存率只有15%,依然沒(méi)有很好的改善。根據(jù)我國(guó)腫瘤防治辦公室發(fā)布的材料結(jié)果顯示：從上世紀(jì)70年代至今,我國(guó)肺癌死亡率上升了近5倍。肺癌已經(jīng)成為嚴(yán)重危害我國(guó)居民生命和健康的主要疾病之一,流行病學(xué)研究結(jié)果表明：肺癌的發(fā)生與遺傳因素和環(huán)境因素都同時(shí)相關(guān)。大量的研究調(diào)查表明：約80%以上的肺癌可歸咎于煙草暴露,且吸煙者比不吸煙者患肺癌的發(fā)生率高近10倍。然而并不是所有吸煙的患者都患有肺癌。肺癌的發(fā)生可能還與其他的因素有關(guān),其中和變異相關(guān)的基因多態(tài)性可能成為肺癌的發(fā)病的危險(xiǎn)因素。隨著肺癌流行病學(xué)的發(fā)展以及肺癌分子生物學(xué)研究水平的不斷進(jìn)步,在非小細(xì)胞肺癌遺傳基因方面的研究也越來(lái)越多。近年來(lái),國(guó)際基因組單體型圖譜計(jì)劃以及人類(lèi)基因組計(jì)劃的實(shí)施和推進(jìn),同時(shí)基因分型檢測(cè)系統(tǒng)的不斷發(fā)展和完善,都為全基因組關(guān)聯(lián)研究(Genome-wide association studies, GWAS)奠定了基礎(chǔ)。開(kāi)展GWAS研究的基本原理如下：首先在目標(biāo)人群中設(shè)立研究對(duì)象,分為病例組和對(duì)照組,將單核甘酸多態(tài)性(Single nucleotide polymorphism,SNP)作為遺傳標(biāo)記物,分別在兩組間進(jìn)行全基因組范圍的SNP檢測(cè)分析。如果在病例與對(duì)照組相比的結(jié)果中,發(fā)現(xiàn)病例組中某個(gè)SNP位點(diǎn)的等位基因或基因型出現(xiàn)的頻率具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,則該位點(diǎn)可能與該疾病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)密切相關(guān)。然后研究者通過(guò)基因定位以及連鎖不平衡(linkage disequilibrium, LD)分析來(lái)判斷可能的疾病易感基因�，F(xiàn)在,GWAS在研究肺癌等復(fù)雜性疾病的遺傳易感性方面應(yīng)用很廣,漸成為一個(gè)有效的檢測(cè)手段。目前GWAS已經(jīng)在世界范圍內(nèi)進(jìn)行篩選出一批與肺癌遺傳易感性相關(guān)的常見(jiàn)基因變異,例如在染色體5p15、6p21和10q25.2區(qū)域發(fā)現(xiàn)基因變異位點(diǎn),這些位點(diǎn)的遺傳多態(tài)性可增加或降低個(gè)體罹患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)。以上研究結(jié)果提示通過(guò)檢測(cè)與罹患肺癌風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)的遺傳學(xué)分子標(biāo)志物,有助于進(jìn)行肺癌發(fā)病機(jī)制研究及篩選肺癌高危人群�；蚨鄳B(tài)性是指在一個(gè)生物群體中,同時(shí)存在的兩種或兩種以上不連續(xù)的等位基因、變異型或者基因型。根據(jù)對(duì)基因多態(tài)性研究的順序,通�？梢詫⑵浞譃槿�(lèi),分別是單核苷酸多態(tài)性(SNP)、DNA重復(fù)序列的多態(tài)性(RSP)和限制性片段長(zhǎng)度的多態(tài)性(RFLP)。這三類(lèi)基因多態(tài)性均可以反映個(gè)體遺傳病的易感性差異,為遺傳相關(guān)疾病的研究和臨床診斷提供幫助。目前,單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism, SNP),是人類(lèi)可遺傳的變異中最常見(jiàn)的一種變異,即其在基因組內(nèi)因?yàn)閱蝹�(gè)核苷酸C、G、A或T的改變而形成的基因多態(tài)性,該變異占所有已知多態(tài)性的90%以上。SNP在人類(lèi)基因組中廣泛存在,平均每500-1000個(gè)堿基對(duì)中就有1個(gè)多態(tài)性的變異,估計(jì)其總數(shù)可達(dá)300萬(wàn)個(gè)甚至更多。由于SNP具有分布密度高、穩(wěn)定性好、分型檢測(cè)易于操作等優(yōu)勢(shì),在遺傳疾病的基因鑒定方面發(fā)揮重要作用。2012年Nature Genetic雜志上發(fā)表一份研究結(jié)果,在該結(jié)果中我們可以知道全基因組關(guān)聯(lián)研究(Genome-wide association studies,GWAS)發(fā)現(xiàn)了一個(gè)新的SNP位點(diǎn),即VTI1A (rs7086803),它能增加亞洲不吸煙女性患者罹患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)性。目前國(guó)內(nèi)外尚未有對(duì)該基因位點(diǎn)的進(jìn)一步的研究。肺癌與SNP的易感性關(guān)系的研究目前已成為肺癌研究領(lǐng)域的熱點(diǎn),并且全球多個(gè)地區(qū)進(jìn)行的GWAS研究已經(jīng)尋找到一些影響肺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的染色體區(qū)域和易感基因位點(diǎn)。從2008年開(kāi)始,法國(guó)、冰島和英國(guó)等多個(gè)研究團(tuán)隊(duì)通過(guò)GWAS發(fā)現(xiàn)該基因簇上的SNPs變化能顯著影響肺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn),該結(jié)果表明遺傳因素在肺癌發(fā)病中的作用不容忽視。Amos等以美國(guó)1154名吸煙的非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)患者和1137名吸煙狀態(tài)匹配的健康人群為研究對(duì)象,檢測(cè)315450個(gè)SNPs,結(jié)果顯示與肺癌發(fā)病關(guān)系最密切的SNPs位點(diǎn)有10個(gè),分別為rs2808630、rs1481847、rs2202507、rs7626795、rs11099666、rs1051730、 rs6069045、rs803419、rs12956651以及rs855974。然后,進(jìn)一步的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)在不同種族人群中他們的SNP的分布亦會(huì)有所不同。例如,歐洲的GWAS顯示位于染色體15q25.1區(qū)域的SNP位點(diǎn)rsl6969968、rs1051730和rs8034191與罹患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)性顯著相關(guān)。然而,在韓國(guó)、日本及中國(guó)人群中的研究卻不能再次重復(fù)該實(shí)驗(yàn)結(jié)果,追蹤其原因可能是因?yàn)樵趤喼奕巳褐羞@些多態(tài)位點(diǎn)的最小等位基因頻率的分布較低所致。以上研究結(jié)果提示肺癌的易感基因位點(diǎn)分布可能存在種族和地域的差異。在我國(guó),不吸煙女性患者發(fā)生肺癌的幾率并不少見(jiàn),已有研究表明部分不吸煙女性肺癌患者具有特殊的基因表型如EGFR突變、ALK重排、cMET擴(kuò)增等。這些研究結(jié)果均提示不吸煙女性患者罹患肺癌的發(fā)生機(jī)制可能除了與吸煙者肺癌重疊的同時(shí),還有其獨(dú)特的分子通路。因此,亞洲女性不吸煙人群10q25.2區(qū)域的rs7086803具有罹患肺癌的高風(fēng)險(xiǎn)性,那該多態(tài)位點(diǎn)在我國(guó)整體人群的分布及其發(fā)生機(jī)制又是如何,則需要我們進(jìn)一步的探討與研究。脂聯(lián)素(adiponectin, ADIPOQ)是由白色脂肪組織細(xì)胞特異性分泌的一種膠原樣細(xì)胞因子,其分泌后進(jìn)入血液循環(huán),在胰島素增敏、抗動(dòng)脈粥樣硬化和抗糖尿病等方面發(fā)揮著強(qiáng)大的生理調(diào)節(jié)作用。為探討脂聯(lián)素水平與肺癌的關(guān)系,Petridou等進(jìn)行了一項(xiàng)包含85個(gè)病例的臨床病例對(duì)照研究,該研究結(jié)果顯示,肺癌患者的血清脂聯(lián)素水平在肺癌病例組與對(duì)照組無(wú)顯著差異。Petridou等進(jìn)行的另一項(xiàng)旨在探討胰島素抵抗(Insulinresistance)與肺癌相互關(guān)系的研究中也得到了相似的結(jié)果。但Petridou等的研究結(jié)果顯示晚期肺癌患者血清脂聯(lián)素水平較局限期患者顯著為低(odds ratio:0.25,95%CI:0.10-0.78),進(jìn)一步對(duì)肺癌組織行免疫組化分析顯示,脂聯(lián)素受體(AdipoR)在癌組織有表達(dá),但正常肺組織內(nèi)無(wú)脂聯(lián)素受體的表達(dá)。AdipoR1表達(dá)于所有類(lèi)型的肺癌組織,而且不同分期之間的癌組織AdipoR1的表達(dá)數(shù)量無(wú)差異,但AdipoR2主要表達(dá)在小細(xì)胞肺癌及晚期非小細(xì)胞肺癌組織。流行病學(xué)調(diào)查研究結(jié)果顯示乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、結(jié)腸癌、前列腺癌等癌癥,在它們的發(fā)病率和死亡率中,脂肪因子在肥胖和癌癥的關(guān)系中起到了一個(gè)很重要的作用。體外很多項(xiàng)研究均提示在不同的癌癥細(xì)胞株里,某些特定的脂肪因子可能與它們的生長(zhǎng)繁殖有關(guān),而且,已經(jīng)有開(kāi)展的臨床研究研究脂肪因子在不同的癌癥類(lèi)型中所起的作用,報(bào)告了脂肪因子與癌癥的易感性、病理類(lèi)型和預(yù)后是相關(guān)的。在過(guò)去,研究提示脂肪因子可能是肺癌的高危險(xiǎn)因素之一。臨床數(shù)據(jù)分析顯示肥胖能降低肺癌的死亡率(不考慮吸煙狀態(tài)),并能延長(zhǎng)患者的生存時(shí)間。脂肪細(xì)胞分泌補(bǔ)體蛋白所需要的濾泡上含有VTI1A,在脂肪細(xì)胞中如果VTI1A減少,脂連蛋白的分泌也隨之減少,低產(chǎn)量的脂連蛋白與肺癌的進(jìn)展有關(guān)。VTI1A是否能通過(guò)細(xì)胞膜上與脂聯(lián)素受體作用,影響脂聯(lián)素的分泌,從而來(lái)影響肺癌的易感性,它們之間的確切關(guān)系及作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究明確,相信深入研究VTI1A與脂聯(lián)素受體在肺癌發(fā)生發(fā)展及治療中的作用及意義是十分必要的。本課題旨在通過(guò)病例-對(duì)照分析,探討染色體1Oq25.2區(qū)域基因多態(tài)性與中國(guó)人群肺癌發(fā)病的相關(guān)性,及其與脂聯(lián)素受體的相關(guān)性,從而為肺癌高危人群的篩查、早期診斷和個(gè)體化治療提供理論依據(jù)和數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)將研究對(duì)象限定在中國(guó)漢族人群肺癌患者,并且按照肺癌國(guó)際多學(xué)科分類(lèi)將病例重新進(jìn)行病理分型。利用Roche Light Cycler 480 System Ⅱ檢測(cè)平臺(tái)在中國(guó)肺癌患者和健康對(duì)照者中進(jìn)行基因單核苷酸多態(tài)性分型檢測(cè),一方面統(tǒng)計(jì)分析該基因多態(tài)性分布及與肺癌易感性的關(guān)系,驗(yàn)證適合中國(guó)人群的肺癌VTI1A (rs7086803) SNP位點(diǎn)易感性；另一方面對(duì)該位點(diǎn)多態(tài)性與肺癌患者的性別、吸煙狀態(tài)、病理類(lèi)型及TNM臨床分期等的相關(guān)性進(jìn)行分層分析,并分析該多態(tài)性基因與吸煙狀態(tài)的預(yù)后,探討基因型多態(tài)性分布與臨床病理特征之間的關(guān)系；同時(shí)利用免疫組化方法檢測(cè)AdipoRl蛋白在肺癌組織及癌旁組織中表達(dá)水平,進(jìn)一步驗(yàn)證該基因與AdipoRl在肺癌發(fā)生中的關(guān)系及其作用。綜上數(shù)據(jù),為中國(guó)肺癌高危人群的確定及個(gè)體化預(yù)防和治療奠定初步的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)和理論依據(jù),也為下一步建立適合中國(guó)人群的肺癌易感基因風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估模型做準(zhǔn)備。第一部分檢測(cè)VTI1A(rs7086803)SNP在中國(guó)非小細(xì)胞肺癌及正常人群中的表達(dá)目的檢測(cè)VTI1A在中國(guó)非小細(xì)胞肺癌及正常人群中的表達(dá)頻率(包括男性,女性,吸煙與不吸煙),驗(yàn)證VTI1A基因的多態(tài)性頻率及其是否是女性非吸煙非小細(xì)胞肺癌患者的特異性易感基因。方法收集1998年3月至2012年3月在廣東省肺癌研究所就診并病理組織確診為非小細(xì)胞肺癌的患者共746例,正常人群141例,共887例,所有患者的病理和基因檢測(cè)均取得患者的知情同意。以正常人群為對(duì)照組,非小細(xì)胞肺癌患者為觀察組。收取血液標(biāo)本,提取DNA。然后采用Taqman探針?lè)ㄟM(jìn)行基因多態(tài)性的檢測(cè),檢測(cè)位點(diǎn)為VTI1A(rs7086803), DNA擴(kuò)增后,PCR儀收集熒光信號(hào),根據(jù)熒光信號(hào)繪制出基因型的型別分布散點(diǎn)圖,進(jìn)而分析VTI1A (rs7086803)的基因型分布。統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS 13.0軟件,不同SNP的表達(dá)與與性別、年齡、腫瘤病理類(lèi)型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、TNM分期,吸煙狀態(tài),治療方式的關(guān)聯(lián)采用卡方檢驗(yàn),理論頻數(shù)有小于5者采用Fisher確切概率法分析,通過(guò)Hardy-Weinberg平衡校驗(yàn)計(jì)算出本文所研究樣本的基因多態(tài)性是否有代表性,以α=0.05(雙側(cè))為檢驗(yàn)水準(zhǔn),P0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1) Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)采用擬合優(yōu)度卡方檢驗(yàn),發(fā)現(xiàn)正常人群的VTI1A(rs7086803)SNP多態(tài)性位點(diǎn)的基因型分布差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),符合Hardy-Weinberg平衡定律,提示本文研究所選擇的樣本具有很好的代表性。2)從1998年3月至2012年3月,我們一共入組746例確診為非小細(xì)胞肺癌并有詳細(xì)臨床信息的患者,141例正常人群。正常人群為對(duì)照組,肺癌患者為觀察組。在非小細(xì)胞肺癌組中,男性患者228例(30.6%),女性患者518例(69.4%)；患者的年齡為27-86歲,中位年齡60歲；吸煙狀態(tài)：吸煙的患者為159例(21.3%),不吸煙的587例(78.7%)。在正常人群組中,男性患者25例(17.7%),女性患者116例(82.3%)；患者的年齡為15-78歲,中位年齡42歲；吸煙狀態(tài)：吸煙的患者為14例(9.9%),不吸煙的127例(90.1%)。3)我們納入非小細(xì)胞肺癌人群746例,分析VTI1A(rs7086803)基因型頻率與臨床病理特征的關(guān)系。將VTI1A(rs7086803)的SNP分為三組,分別為AA,AGGG組,每個(gè)臨床病理特征又各分為兩組,我們發(fā)現(xiàn)該基因位點(diǎn)與性別、年齡、腫瘤病理類(lèi)型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、TNM分期,吸煙狀態(tài),治療方式均沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,這有可能與我們的樣本量小有關(guān)。4)我們納入兩組人群,一組觀察組,為非小細(xì)胞肺癌人群746例,一組對(duì)照組,為正常人群141例,分析VTl1A(rs7086803)基因型頻率在這兩組人群中的表達(dá)率的情況。將基因狀態(tài)分為3大組,一組為GG,AG,AA;一組為AG+GG,AA,一組為AG + AA,GG.在第一大組中,在觀察組人群的GG占45.4%,AG占42.5%,AA占12.1%；在對(duì)照組中,GG占57.4%,AG占32.6%,AA占10%；其三組構(gòu)成比的,為6.893,P=0.032；以GG基因型作為參照,AG vs.GG: OR=1.647,95% CI:1.112-2.439；P=0.007；AA vs.GG: OR=1.536,95%CI=0.832-2.836；P=0.168。在第二大組中,在觀察組人群的AG+GG占87.9%,AA占12.1%；在對(duì)照組中,AG+GG占90.0%,AA占10.0%；其兩組構(gòu)成比的χ2為0.522,P=0.470；以AG+GG基因型作為參照,AA vs.AG+GG:OR=1.245.95% CI=0.687-2.255；P=0.470；在第三大組中,在觀察組人群的AG+AA占54.6%,GG占45.4%；在對(duì)照組中,AG+AA占42.6%,GG占57.4%；其兩組構(gòu)成比的χ2為6.866,P=0.009；以AG+AA基因型作為參照,AG+AA vs. GG:OR=1.621, 95%CI=1.127-2.335:P=0.009。這些數(shù)據(jù)均顯示了GG基因型發(fā)生變異與肺癌的易感性相關(guān)性很大。5)以性別為分層因素,觀察VTI1A(rs7086803)的基因頻率在女性肺癌患者和正常人中的不同表達(dá)。我們納入兩組人群,一組觀察組,為女性肺癌患者518例；一組對(duì)照組,為女性正常人116例。將基因狀態(tài)分為3大組,一組為GG,AG,AA:一組為AG+ GG,AA,一組為AG+AA,GG.在第一大組中,在觀察組人群的GG占43.8%,AG占43.2%,AA占13.0%；在對(duì)照組中,GG占60.3%,AG占32.8%,AA占6.9%；其三組構(gòu)成比的χ2為10.965,P=0.004。以GG基因型作為參照,AG vs. GG:OR=1.818,95% CI=1.175-2.811;P.0.007；AA vs.GG:OR=2.583,95% CI=1.183-5.637；P=0.014；在第二大組中,在觀察組人群的AG+GG占87.1％,AA占12.9%；在對(duì)照組中,AG+GG占93.1%,AA占6.9%；其兩組構(gòu)成比的χ2為4.271,P=0.039。以AG+GG基因型作為參照,AAvs. AG+GG:OR=2.191,95% CI:1.024-4.689；P:0.039；在第三大組中,在觀察組人群的AG+AA占56.2%,GG占43.8%；在對(duì)照組中,AG+AA占39.7%,GG占60.3%；其兩組構(gòu)成比的χ2為10.391,P=0.001；以AG+AA基因型作為參照,AG+AA vs.GG:OR=1.951,95% CI=1.294-2.941；P=0.001.因此,VTI1A(rs7086803)的A等位基因可能是導(dǎo)致女性人群患有肺癌的易感基因。6)以性別為分層因素,觀察VTI1A(rs7086803)的基因頻率在男性肺癌患者和正常人的不同表達(dá)。我們納入兩組人群,一組觀察組,為男性肺癌患者228例；一組對(duì)照組,為男性正常人25例。將基因狀態(tài)分為3大組,一組為GG,AG,AA:一組為AG+ GG,AA,一組為AG+ AA,GG.在第一大組中,在觀察組人群的GG占49.1%,AG占40.8%,AA占10.1%；在對(duì)照組中,GG占44.0%,AG占32.0%,AA占24.0%；其三組構(gòu)成比的,為4.362,P=0.113；以GG基因型作為參照,AG vs. GG:OR=1.142,95% CI=0.441-2.956;P=0.785; AA vs.GG:OR=0.376,95% Cl=0.126-1.121;P=0.071;在第二大組中,在觀察組人群的AG+GG占89.9%,AA占10.1%；在對(duì)照組中,AG+GG占76.0%,AA占24.0%；其兩組構(gòu)成比的χ2為4.297,P=0.038。以AG+GG基因型作為參照,AA vs.AG+GG:OR=0.355,95％CI:0.129-0.979;P=0.038；在第三大組中,在觀察組人群的AG+AA占50.9%,GG占49.1%；在對(duì)照組中,AG+AA占56.0%,GG占44.0%；其兩組構(gòu)成比的χ2為0.237,P=0.627；以AG+AA基因型作為參照,AG+AA vs.GG:OR=0.814,95％CI=0.654-1.869；P=0.627。因此,VTI1A(rs7086803)的A等位基因可能是保護(hù)男性人群不患有肺癌的基因,其與女性相反。結(jié)論1.VTI1A(rs7086803)基因型頻率與性別、年齡、腫瘤病理類(lèi)型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、TNM分期和吸煙狀態(tài)等臨床病理特征均沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2、中國(guó)女性肺癌人群的VTI1A(rs7086803)的A等位基因表達(dá)率較女性正常人群高。第二部分VTI1A(rs7086803)SNP表達(dá)不同與非小細(xì)胞肺癌的吸煙狀態(tài)及其預(yù)后關(guān)系目的分析非小細(xì)胞肺癌患者不同的吸煙狀態(tài)下其VTI1A(rs7086803)SNP表達(dá)不同的預(yù)后情況。方法收集1998年3月至2012年3月在廣東省肺癌研究所就診并病理確診為非小細(xì)胞肺癌,并獲得完整隨訪資料的734例的患者�；颊叩呐R床信息和治療信息均從廣東省人民醫(yī)院電子病歷系統(tǒng)查詢(xún)獲得,門(mén)診隨訪和電話隨訪。隨訪計(jì)劃為每12周一次。對(duì)未能在病歷系統(tǒng)查詢(xún)到相關(guān)信息的患者,則進(jìn)行電話隨訪患者的總生存期(OS)�？偵嫫诙x為從診斷時(shí)間至死亡的時(shí)間。刪失數(shù)據(jù)定義為截止最后隨訪時(shí)間存活或者失訪的患者。吸煙狀態(tài)包括吸煙和非吸煙,不吸煙定義為患者一生中吸煙少于100支。吸煙者的定義為患者一生中吸煙超過(guò)100支,包括過(guò)去吸煙現(xiàn)已戒煙和正在吸煙。應(yīng)用SPSS13.0軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,用Kaplan-Meier法進(jìn)行單變量生存分析,各因素水平間的比較采用Log-rank方法進(jìn)行分析。采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型進(jìn)行多因素分析。所有的P值都為雙側(cè)檢驗(yàn),以α[=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn),P0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1、AA、AG、GG三組的比較1)GG組1、2、3年生存率分別為78.0%、60.0%、45.4%,中位生存期為31.3個(gè)月；AG組1、2、3年生存率分別為73.9%、59.2%、46.5%,中位生存期為32.2個(gè)月；AA組1、2、3年生存率分別為79.7%、48.3%、38.1%,中位生存期為22.2個(gè)月。Log-rank法結(jié)果顯示,三組生存率的比較差異無(wú)顯著意義(χ2=1.152,P=0.562)2)根據(jù)是否吸煙,將患者進(jìn)行分層。在吸煙的患者中,GG組患者的1、2、3年生存率分別為58.4%、44.7%、34.6%,中位生存期為16.7個(gè)月；AG組患者的1、2、3年生存率分別為64.1%、50.2%、41.6%,中位生存期為26.4個(gè)月；AA組患者的1、2年生存率分別為16.7%、8.3%,中位生存期為9.5個(gè)月。Log-rank法結(jié)果顯示,患者三組生存率的比較差異有顯著意義(χ2=8.102,P=0.017),AA組患者的生存曲線有顯著下降的趨勢(shì)。3)在非吸煙的患者中,GG組1、2、3年生存率分別為83.3%、64.4%、47.7%,中位生存期為34.3個(gè)月；AG組1、2、3年生存率分別為76.7%、61.2%、48.0%,中位生存期為33.6個(gè)月；AA組1、2、3年生存率分別為86.1%、56.4%、44.5%,中位生存期為32.6個(gè)月。Log-rank法結(jié)果顯示,三組生存率的比較差異無(wú)顯著意義(χ2=0.337,P=0.835)2, AA+AG, GG兩組比較1) AA+AG組1、2、3年生存率分別為75.2%、57.1%、44.8%,中位生存期為31.7個(gè)月；GG組1、2、3年生存率分別為78.0%、59.9%、45.4%,中位生存期為31.3個(gè)月。Log-rank法結(jié)果顯示,兩組生存率的比較差異無(wú)顯著意義(χ2=0.226,P=0.635)。2)根據(jù)是否吸煙,將患者進(jìn)行分層。在吸煙的患者中,至隨訪結(jié)束時(shí),AA+AG組患者1、2、3年生存率分別為60.1%、43.2%、35.9%,中位生存期為18.3個(gè)月；GG組1、2、3年生存率分別為58.4%、44.7%、34.6%,中位生存期為16.7個(gè)月。Log-rank法結(jié)果顯示,患者兩組生存率的比較差異無(wú)顯著意義(χ2=0.007,P=0.932)。3)在非吸煙的患者中,AA+AG組1、2、3年生存率分別為79.2%、60.4%、47.4%,中位生存期為32.9個(gè)月；GG組1、2、3年生存率分別為83.3%、64.4%、47.7%,中位生存期為34.3個(gè)月。Log-rank法結(jié)果顯示,兩組生存率的比較差異無(wú)顯著意義(χ2=0.329,P=0.566)。3. AA、AG+GG兩組比較1)AA組1、2、3年生存率分別為79.7%、48.3%、38.1%,中位生存期為22.2個(gè)月；AG+GG組1、2、3年生存率分別為76.0%、59.8%、46.1%,中位生存期為31.7個(gè)月。Log-rank法結(jié)果顯示,兩組生存率的比較差異無(wú)顯著意義(χ2=1.137,P=0.286)。2)根據(jù)是否吸煙,將患者進(jìn)行分層。在吸煙的患者中,AA組患者1、2年生存率分別為41.7%、8.3%,中位生存期為9.5個(gè)月；AG+GG組1、2、3年生存率分別為61.2%、47.4%、37.6%,中位生存期為21.4個(gè)月。Log-rank法結(jié)果顯示,患者兩組生存率的比較差異有顯著意義(χ2=7.705,P=0.006),AA組的生存曲線有顯著下降的趨勢(shì)。3)在非吸煙的患者中,AA組1、2、3年生存率分別為86.1%、56.4%、44.5%,中位生存期為32.6個(gè)月；AG+GG組1、2、3年生存率分別為80.1%、63.1%、48.0%,中位生存期為34.3個(gè)月。Log-rank法結(jié)果顯示,兩組生存率的比較差異無(wú)顯著意義(χ2=0.079,P=0.748)。4、多因素分析將上述單因素分析中具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的AA表型引入Cox風(fēng)險(xiǎn)比例回歸模型分析,探討肺癌患者的預(yù)后因素,同時(shí)引入還包括性別、年齡、病理類(lèi)型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、吸煙狀態(tài)等因素,結(jié)果顯示：高齡患者較低齡患者的生存期短長(zhǎng)(HR=1.013,95%CI:1.001-1.023),處于中晚期的患者的生存期較處于早中期的患者短(HR=5.433,95%CI:4.233-6.972),有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者的生存期較無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者短(HR= 1.225,95%CI:1.094-1.371),吸煙患者的預(yù)后較非吸煙患者的預(yù)后差(HR=1.701,95%CI:1.330-2.176).結(jié)合以上結(jié)果,年齡、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和吸煙狀態(tài)與肺癌患者的預(yù)后顯著相關(guān),是影響肺癌患者的獨(dú)立預(yù)后因素。將AA表型、性別、年齡、病理類(lèi)型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期等因素引入Cox風(fēng)險(xiǎn)比例回歸模型分析,分別探討吸煙和非吸煙肺癌患者的預(yù)后因素,結(jié)果顯示：吸煙肺癌患者中,高齡患者較低齡患者的生存期短(HR=1.025,95%CI:1.002-1.050)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者的生存期較無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者短(HR=1.547,95%CI:1.173-2.041);處于中晚期的患者的生存期較處于早中期的患者短(HR=5.410,95%CI:3.056-9.578),AA表型的患者的生存期比非AA表型的患者短(HR=1.954,95%CI:1.037-3.684);非吸煙的肺癌患者中,高齡患者較低齡患者的生存期短(HR=1.011,95%CI:1.001-1.021);有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者的生存期較無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者短(HR=1.175,95%CI:1.035-1.334);處于中晚期的患者的生存期較處于早中期的患者短(HR=5.189,95%CI:3.922-6.864)。結(jié)合以上結(jié)果,可以看出,年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期和是否AA表型與吸煙的肺癌患者的預(yù)后顯著相關(guān),是影響吸煙的肺癌患者的獨(dú)立預(yù)后因素；同時(shí),年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期與非吸煙的肺癌患者的預(yù)后顯著相關(guān),是影響非吸煙的肺癌患者的獨(dú)立預(yù)后因素。結(jié)論1、AA、AG、GG三組在肺癌人群中生存率的比較差異無(wú)顯著意義,但在吸煙人群中,患者三組生存率的比較差異有顯著意義,AA組的生存曲線有顯著下降的趨勢(shì)。2、AA+AG和GG兩組在肺癌人群、吸煙與否的分層因素中其生存率的比較差異均無(wú)顯著意義。3、AA和AG+GG兩組在肺癌人群中生存率的比較差異無(wú)顯著意義,但在吸煙人群中,患者三組生存率的比較差異有顯著意義,AA組的生存曲線有顯著下降的趨勢(shì)。4、性別、年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期與肺癌患者的預(yù)后顯著相關(guān),是影響肺癌患者的獨(dú)立預(yù)后因素。5、年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期和是否AA表型與吸煙的肺癌患者的預(yù)后顯著相關(guān),是影響吸煙的肺癌患者的獨(dú)立預(yù)后因素；同時(shí),年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期與非吸煙的肺癌患者的預(yù)后顯著相關(guān),是影響非吸煙的肺癌患者的獨(dú)立預(yù)后因素。第三部分VTI1A (rs7086803) SNP在非小細(xì)胞肺癌易感性與該細(xì)胞脂聯(lián)素受體的相關(guān)性研究目的由以上研究結(jié)果得出非小細(xì)胞肺癌患者VTI1A (rs7086803) SNP的AA基因型罹患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)性高,本部分研究其是否通過(guò)脂聯(lián)素受體,引起脂聯(lián)素的變化,從而導(dǎo)致患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)高,為此研究該兩者的相關(guān)性。方法基于第一、二部分的研究結(jié)果,VTI1A (rs7086803) SNP的AA基因型罹患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)性較AG及GG基因型高,因此,我們按照入組患者的VTI1A (rs7086803) SNP基因狀態(tài)的不同,將所有患者分為三組：1)AA組；2)GG組；3)AG組,在887例上述患者中隨機(jī)抽取72例非小細(xì)胞肺癌患者癌組織及癌旁組織的石蠟標(biāo)本,采用免疫組織化學(xué)方法進(jìn)行染色,然后根據(jù)染色情況進(jìn)行分析。應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析；AdipoRl在肺癌組織及癌旁正常肺組織之間的免疫組化表達(dá)差異采用Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)；SNP基因型與蛋白表達(dá)之間的相關(guān)性采用Spearman's等級(jí)相關(guān)分析檢測(cè)；以α=0.05(雙側(cè))為檢驗(yàn)水準(zhǔn),P0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.結(jié)果在非小細(xì)胞肺癌人群746例中,隨機(jī)抽取71例患者入組進(jìn)行分析。在肺癌組織中,攜帶AA位點(diǎn)的組織其AdipoRl的表達(dá)量顯著比其它位點(diǎn)的低(mean rank:AA 18.55, AG 25.0, GG 45.76, P 0.001)=在癌旁組織,AdipoR1的表達(dá)量與VTI1A(rs7086803)的不同基因位點(diǎn)表達(dá)并沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(mean rank:AA 37.45, AG 32.80, GG 37.98, P= 0.544)。在肺癌組織中,SNP基因型與蛋白表達(dá)之間的等級(jí)相關(guān)系數(shù)為-0.546,P0.001,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,兩變量之間存在負(fù)相關(guān)關(guān)系,即攜帶AA位點(diǎn)的組織其AdipoRl的表達(dá)量顯著比其它位點(diǎn)的低；在癌旁組織中,SNP基因型與蛋白表達(dá)之間的相關(guān)性分析P=0.857,差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說(shuō)明兩者之間不存在相關(guān)關(guān)系。結(jié)論1、攜帶AA基因型的組織其AdipoRl蛋白在癌組織中的表達(dá)量較其它基因型的低。2、攜帶AA基因型的組織與AdipoRl的表達(dá)可能相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：非小細(xì)胞肺癌 單核苷酸多態(tài)性 VTI1A 吸煙狀態(tài) 預(yù)后
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R734.2
【目錄】：

• 摘要3-16
• ABSTRACT16-36
• 前言36-54
• 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器設(shè)備54-56
• 1 實(shí)驗(yàn)所用儀器設(shè)備54-55
• 2 本實(shí)驗(yàn)所用試劑55-56
• 第一部分 檢測(cè)VTI1A(rs7086803)SNP在中國(guó)非小細(xì)胞肺癌及正常人群中的表達(dá)56-79
• 1 材料56-59
• 2 實(shí)驗(yàn)方法59-70
• 3 結(jié)果70-79
• 第二部分 VTI1A(rs7086803)SNP表達(dá)不同與非小細(xì)胞肺癌的吸煙狀態(tài)及其預(yù)后的關(guān)系79-94
• 1 材料和方法79-80
• 2 結(jié)果80-92
• 3 結(jié)論92-94
• 第三部分 VTI1A SNP在非小細(xì)胞肺癌易感性與該細(xì)胞脂聯(lián)素受體的相關(guān)性研究94-101
• 1 材料和方法94-99
• 2 結(jié)果99-100
• 3 結(jié)論100-101
• 討論101-106
• 1 研究結(jié)果分析101-104
• 2 研究特色及創(chuàng)新點(diǎn)104-105
• 3 研究不足與展望105-106
• 全文總結(jié)106-108
• 參考文獻(xiàn)108-117
• 英文縮略詞117-119
• 攻讀學(xué)位期間成果119-121
• 致謝121-123

  本文關(guān)鍵詞：非小細(xì)胞肺癌VTI1A基因SNP多態(tài)性及其相關(guān)性研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：407727