研究目的:胃癌作為一種惡性腫瘤,其患者經(jīng)常發(fā)生轉(zhuǎn)移,腹膜轉(zhuǎn)移最為常見(jiàn),但是其轉(zhuǎn)移的確切機(jī)制仍不清楚,胃癌腹膜轉(zhuǎn)移被認(rèn)為是胃癌治療的難題。此外,目前尚無(wú)治療胃癌腹膜轉(zhuǎn)移的標(biāo)準(zhǔn)方式,所以明確胃癌患者發(fā)生腹膜轉(zhuǎn)移的機(jī)理非常必要,本文旨在探究胃癌發(fā)生腹膜轉(zhuǎn)移過(guò)程中的重要分子STEAP1在胃癌中表達(dá)的調(diào)控機(jī)制及對(duì)胃癌進(jìn)展的影響。研究方法:收集20名胃癌腹膜轉(zhuǎn)移患者的癌及癌旁組織,并分離兩種組織樣本中的多聚核糖體,并進(jìn)行qRT-PCR實(shí)驗(yàn)鑒定胃癌腹膜轉(zhuǎn)移患者兩種樣本多聚核糖體中基因(上皮至間質(zhì)轉(zhuǎn)化過(guò)程(EMT)相關(guān))的差異表達(dá)譜。蛋白酶體抑制劑MG-132處理HMrSv5細(xì)胞和MKN45細(xì)胞以抑制蛋白酶體降解。熒光素酶實(shí)驗(yàn)用于檢測(cè)STEAP1的翻譯調(diào)控機(jī)制。MNK抑制劑CGP57380處理MKN45細(xì)胞以抑制eIF4E磷酸化。細(xì)胞遷移通過(guò)Transwell遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè),細(xì)胞侵襲使用Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。建立異種種植瘤檢測(cè)腫瘤生長(zhǎng)能力變化。研究結(jié)果:通過(guò)比較胃癌腹膜轉(zhuǎn)移患者的腫瘤組織和正常組織多聚核糖體的差異性變化,我們發(fā)現(xiàn)共49種差異表達(dá)的EMT相關(guān)基因,其中腫瘤組織多聚核糖體中30種基因...

【文章頁(yè)數(shù)】：120 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖1 胃癌腹膜擴(kuò)散過(guò)程圖[17]

目前關(guān)于胃癌患者出現(xiàn)腹膜轉(zhuǎn)移的機(jī)制并不太清楚,Paget提出的“種子-土壤”學(xué)說(shuō)闡釋了胃癌出現(xiàn)腹膜轉(zhuǎn)移機(jī)制的基本步驟,此學(xué)說(shuō)認(rèn)為脫落的癌細(xì)胞像是“種子”,轉(zhuǎn)移部位的微環(huán)境像是“土壤”[35]。該理論主要認(rèn)為來(lái)自原發(fā)部位的癌細(xì)胞像種子一樣,在侵襲至腹膜組織時(shí),由于腹膜獨(dú)特的特點(diǎn),為....

圖2.STEAP1蛋白質(zhì)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)、細(xì)胞定位及生理功能示意圖。[48]

STEAP1基因是最早發(fā)現(xiàn)的家族成員,由5個(gè)外顯子及4個(gè)內(nèi)含子組成的,位于染色體7q21.13,STEAP1基因編碼前列腺跨膜上皮1抗原蛋白,該蛋白共由339個(gè)氨基酸組成,其分子量是39.72kDa,該蛋白是一種細(xì)胞表面生物分子,在線粒體跨膜電子過(guò)程轉(zhuǎn)移承擔(dān)重要角色。STEAP1....

圖1 胃癌腹膜轉(zhuǎn)移患者中STEAP1表達(dá)水平受轉(zhuǎn)錄后調(diào)控

為證實(shí)STEAP1mRNA和蛋白質(zhì)水平表達(dá)存在差異的原因,我們使用蛋白酶體抑制劑MG-132進(jìn)行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證STEAP1蛋白是否通過(guò)翻譯后調(diào)控機(jī)制被制備但被積極降解導(dǎo)致該結(jié)果。首先使用蛋白酶體抑制劑MG-132處理正常間皮細(xì)胞系HMrSV5和模擬腹膜轉(zhuǎn)移的胃癌細(xì)胞系MKN45,然....

圖2 STEAP1的表達(dá)在翻譯起始階段受到調(diào)控

為進(jìn)一步證實(shí)STEAP1在胃癌腹膜轉(zhuǎn)移患者腫瘤組織中mRNA和蛋白質(zhì)水平表達(dá)存在差異的原因,接下來(lái)我們研究了翻譯起始和翻譯延伸對(duì)STEAP1表達(dá)特點(diǎn)的潛在貢獻(xiàn)。我們將STEAP1mRNA的3’UTRs序列構(gòu)建至RL-CMV-CXCR4-6x報(bào)告質(zhì)粒中腎素?zé)晒馑孛感蛄邢掠螀^(qū)域....

本文編號(hào)：4036363