研究背景胃癌(Gastric Cancer,GC)是最常見的消化道惡性腫瘤之一,嚴重危害全球人類的健康。近年來,盡管臨床上胃癌的診斷和治療已經(jīng)取得了巨大的進展,但其發(fā)病率及死亡率在全世界范圍內(nèi)依舊位列所有腫瘤中的第四及第二位。流行病學研究表明,我國胃癌患者具有分期晚、復(fù)發(fā)率高和預(yù)后差等特點,總體治療效果不佳,患者的5年生存率較低。因此,找尋新型有效的胃癌治療策略刻不容緩。眾所周知,胃癌的發(fā)生發(fā)展是一個多階段、多因素漸進性積累的復(fù)雜過程,遺傳、環(huán)境等多因素均參與其中。其中,遺傳學以及表觀遺傳學的改變發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。癌基因的異常活化以及抑癌基因的異常失活導(dǎo)致許多與細胞增殖、分化、周期和命運相關(guān)的重要信號通路的活性發(fā)生了改變,最終造成胃癌的發(fā)生。CXXC指蛋白4(CXXC finger protein 4,CXXC4)最早在腎細胞癌中作為經(jīng)典Wnt信號通路的負向調(diào)控因子而引起研究者的廣泛重視。CXXC4含有一個特殊的CXXC鋅指結(jié)構(gòu)域,大量研究證實該結(jié)構(gòu)域可以與DNA結(jié)合并調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄表達。本課題組的前期研究發(fā)現(xiàn)CXXC4是一個新型的胃癌相關(guān)腫瘤抑制因子,其在胃癌組織中低表達,且其表...

【文章頁數(shù)】：110 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１：?ＣＸＸＣ４通過激活細胞凋亡從而抑制胃癌細胞生長

的胃癌ＳＧＣ７９０１細胞株（ＳＧＣ７９０１－ＷＴ），未用Ｄｏｘ處理的ＳＧＣ７９０１細胞作為正常??對照組。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著Ｄ〇Ｘ作用時間的增加，處理組細胞內(nèi)ＣＸＸＣ４的表達水平??逐步上升（圖１Ａ），ＭＴＳ細胞存活實驗發(fā)現(xiàn)ＣＸＸＣ４過表迗后胃癌細胞的增殖能力??受到了顯著的抑制，與....

圖２：?ＣＸＸＣ４定位于細胞核并通過其ＤＮＡ的結(jié)合區(qū)域激活細胞凋亡

?實驗結(jié)果??發(fā)現(xiàn)ＣＸＸＣ４主要定位于細胞核中（圖２Ａ）。免疫熒光實驗同樣證實ＣＸＸＣ４主??要定位于細胞核內(nèi)（圖２Ｂ）。為了檢測ＣＸＸＣ４的ＤＮＡ結(jié)合能力，我們采用酵母??雙雜交實驗。用含有ＤＮＡ轉(zhuǎn)錄活性區(qū)域（ＡＤ）的載體ｐＧＡＤＴ７和含有ＤＮＡ綁??定區(qū)域（ＢＤ）的載體ｐＧＢ....

圖３：鑒定出ＧＤＦ１５是ＣＸＸＣ４下游的潛在靶基因

?實驗結(jié)果??ｓｉ－ＣＸＸＣ４－２＃）發(fā)現(xiàn)可以一定程度上逆轉(zhuǎn)ＧＤＦ１５ｍＲＮＡ水平的上調(diào)（圖３Ｆ），在蛋??白水平上ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ實驗也得到了相同的結(jié)果（圖３Ｇ）。綜上所述，ＧＤＦ１５確實??是ＣＸＸＣ４下游的潛在靶基因。??Ａ?Ｂ?．?＇Ｊ??ＧＣＮＴ１??ＴＭＣＭ１....

圖４：?ＣＸＸＣ４通過上調(diào)ＧＤＦ１５表達激活細胞調(diào)亡

實驗結(jié)果??先，在ＳＧＣ７９０１－ＭＯＣＫ細胞中通過轉(zhuǎn)染３ｘ?ＦＬ?ＡＧ－ＧＤＦ１５質(zhì)粒實現(xiàn)ＧＤＨ?５過表達，??發(fā)現(xiàn)細胞凋亡相關(guān)信號分子Ｃｌｅａｖｅｄ－ＰＡＲＰｌ的表達水平升高（圖４Ａ）。將攜帶ＦＬＡＧ??標簽的ＧＤＦ１５慢病毒感染ＳＧＣ７９０１－ＭＯＣＫ細胞，用嘌呤霉素（ｐｕ....

本文編號：3991682