目的本研究通過(guò)RNA干擾技術(shù)靶向干預(yù)OPN基因,觀察OPN基因下調(diào)后非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株A549、SK-MES-1和OPN基因過(guò)表達(dá)后非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株H1703的生物學(xué)行為變化,并探討其相關(guān)機(jī)制,為非小細(xì)胞肺癌的臨床治療提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法通過(guò)免疫組化、實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法對(duì)28例Ⅰ/Ⅱ期NSCLC及73例Ⅲ/Ⅳ期NSCLC組織中的OPN的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè),分析OPN表達(dá)與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性。Western blotting檢測(cè)OPN在肺癌細(xì)胞株A549、SK-MES-1、H1703和永生化人支氣管上皮細(xì)胞16HBE中的表達(dá),通過(guò)RNA干擾技術(shù)下調(diào)A549及SK-MES-1細(xì)胞株的OPN表達(dá),對(duì)H1703細(xì)胞株的OPN進(jìn)行過(guò)表達(dá),采用MTT 比色法、Transwell侵襲試驗(yàn)檢測(cè)各細(xì)胞系對(duì)順鉑的敏感性及侵襲能力,通過(guò)Western blotting方法檢測(cè)RNA干擾后A549、SK-MES-1細(xì)胞系LDHA的表達(dá)水平,并觀察乳酸水平對(duì)A549、SK-MES-1細(xì)胞系順鉑敏感性的影響。結(jié)果1、OPN在肺癌組織中的表達(dá)明顯高于正常組織,并與NSCLC的轉(zhuǎn)移狀態(tài)、分化程度及對(duì)順鉑的敏感性相關(guān)。...

【文章頁(yè)數(shù)】：94 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
緒論
    參考文獻(xiàn)
第一部分 OPN在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)及臨床意義
    材料與方法
        1、病例資料及標(biāo)本來(lái)源
        2、實(shí)驗(yàn)設(shè)備
        3、實(shí)驗(yàn)試劑
        4、肺癌組織石蠟切片的制作
        5、蘇木精-伊紅染色
        6、免疫組織化學(xué)染色
        7、肺癌組織RNA提取步驟
        8、RNA反轉(zhuǎn)錄cDNA第一鏈的合成
        9、qPCR操作步驟
        10、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    結(jié)果
    討論
    小結(jié)
第二部分 RNA干擾OPN基因?qū)θ朔切〖?xì)胞肺癌A549、SK-MES-1及H1703細(xì)胞生物學(xué)行為的影響
    材料與方法
        1、實(shí)驗(yàn)材料
        2、實(shí)驗(yàn)試劑
        3、相關(guān)實(shí)驗(yàn)試劑的配置方法
        4、實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        5、細(xì)胞復(fù)蘇
        6、細(xì)胞傳代
        7、細(xì)胞凍存
        8、siRNA的設(shè)計(jì)及慢病毒載體的構(gòu)建
        9、siRNA轉(zhuǎn)染步驟
        10、Western Blot方法檢測(cè)細(xì)胞中OPN表達(dá)
        11、MTT分析
        12、Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)
    結(jié)果
        1、RNA干擾前后A549、SK-MES-1、H1703細(xì)胞OPN表達(dá)水平的變化
        2、RNAi干擾后對(duì)A549、SK-MES-1、H1703細(xì)胞增殖能力的影響
        3、下調(diào)OPN對(duì)A549、SK-MES-1細(xì)胞侵襲能力的影響
        4、RNAi后A549、SK-MES-1、H1703細(xì)胞對(duì)順鉑敏感性的變化
    討論
    小結(jié)
第三部分 OPN參與非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞順鉑耐藥的機(jī)制研究
    材料和方法
        1、實(shí)驗(yàn)材料
        2、實(shí)驗(yàn)試劑
        3、相關(guān)實(shí)驗(yàn)試劑的配置方法
        4、實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        5、細(xì)胞復(fù)蘇
        6、細(xì)胞傳代
        7、細(xì)胞凍存
        8、siRNA細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        9、乳酸測(cè)試盒測(cè)定細(xì)胞乳酸產(chǎn)生
        10、MTT分析
        11、Western Blot方法檢測(cè)細(xì)胞中OPN表達(dá)
    結(jié)果
        1、數(shù)據(jù)庫(kù)篩選
        2、OPN下調(diào)后A549、SK-MES-1細(xì)胞中OPN與LDHA蛋白表達(dá)
        3、OPN下調(diào)后A549、SK-MES-1細(xì)胞中乳酸生成
        4、OPN下調(diào)后乳酸對(duì)A549、SK-MES-1細(xì)胞順鉑敏感性的影響
    討論
    小結(jié)
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀博士期間發(fā)表文章
英文縮略詞表
致謝



本文編號(hào)：3967062