目的:探討健脾清腸方治療潰瘍性結(jié)腸炎的潛在藥效機(jī)制,豐富中醫(yī)藥在潰瘍性結(jié)腸炎治療中的科學(xué)內(nèi)涵,為其臨床推廣應(yīng)用提供新的理論依據(jù)。方法:1.構(gòu)建DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎小鼠模型,給予健脾清腸方干預(yù)治療,采用疾病活動指數(shù)評分表每日評估小鼠的結(jié)腸炎嚴(yán)重程度,觀察健脾清腸方對小鼠體重變化、結(jié)腸長度變化的影響,蘇木素-伊紅染色、免疫組織化學(xué)法評估健脾清腸方對小鼠結(jié)腸組織的病理學(xué)改變,ELISA法檢測健脾清腸方對小鼠血清中TNF-α、IL-1β含量的影響,RT-PCR法檢測健脾清腸方對小鼠結(jié)腸組織中TNF-α、IL-1β、IL-10基因表達(dá)水平的影響;2.運(yùn)用系統(tǒng)藥理學(xué)的方法,通過相關(guān)數(shù)據(jù)庫對中草藥所含活性化合物成分進(jìn)行篩選、相應(yīng)靶點(diǎn)匹配、與疾病效應(yīng)靶點(diǎn)之間的網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建分析、對潛在藥效靶點(diǎn)的富集分析,對健脾清腸方在潰瘍性結(jié)腸炎治療中的潛在藥效機(jī)制進(jìn)行系統(tǒng)性的探索;3.提取與分離小鼠骨髓來源巨噬細(xì)胞,同時為更好模擬機(jī)體生理環(huán)境,構(gòu)建Caco2細(xì)胞與小鼠骨髓來源巨噬細(xì)胞的共培養(yǎng)試驗(yàn),給予TNF-α刺激構(gòu)建細(xì)胞炎癥模型,并分別給予健脾清腸方含藥血清及陽性對照藥吡咯烷二硫基甲酸酯、雷帕霉素干預(yù)治療,采用RT-PC...

【文章頁數(shù)】：104 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
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中文摘要
ABSTRACT
引言
實(shí)驗(yàn)研究
    實(shí)驗(yàn)一 健脾清腸方顯著改善DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎模型小鼠的炎癥反應(yīng)
        1 實(shí)驗(yàn)材料
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 實(shí)驗(yàn)藥品制備
            2.2 實(shí)驗(yàn)分組、造模及給藥
            2.3 實(shí)驗(yàn)樣本采集
            2.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)
            2.5 蘇木素-伊紅染色
            2.6 免疫組化
            2.7 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)
            2.8 統(tǒng)計分析
        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 小鼠的一般情況
            3.2 小鼠給藥期間體重變化
            3.3 小鼠給藥期間結(jié)腸形態(tài)變化
            3.4 小鼠給藥期間結(jié)腸組織病理學(xué)變化
            3.5 小鼠給藥期間結(jié)腸免疫組織化學(xué)變化
            3.6 小鼠給藥期間血清TNF-α、IL-1β表達(dá)情況
            3.7 小鼠給藥期間結(jié)腸組織TNF-α、IL-1β、IL-10 基因表達(dá)情況
        4 實(shí)驗(yàn)小結(jié)
    實(shí)驗(yàn)二 基于系統(tǒng)藥理學(xué)探索健脾清腸方治療UC的潛在藥效機(jī)制
        1 實(shí)驗(yàn)材料
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 藥物活性成分篩選及化合物-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建
            2.2 疾病相關(guān)靶點(diǎn)收集及蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建
            2.3 藥效靶點(diǎn)篩查及富集分析
        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 健脾清腸方的藥物活性成分檢索及篩選
            3.2 健脾清腸方的藥物活性成分相關(guān)靶點(diǎn)篩選及化合物-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建
            3.3 健脾清腸方的藥物-化合物-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建
            3.4 UC疾病相關(guān)靶點(diǎn)收集
            3.5 健脾清腸方治療UC蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及潛在藥效靶點(diǎn)篩選
            3.6 基于Omics Bean平臺對健脾清腸方治療UC潛在藥效靶點(diǎn)的富集分析
            3.7 基于Cytoscape軟件對健脾清腸方治療UC潛在藥效靶點(diǎn)的富集分析
        4 實(shí)驗(yàn)小結(jié)
    實(shí)驗(yàn)三 健脾清腸方調(diào)控TNF-α誘導(dǎo)炎癥模型細(xì)胞中NF-κB/HIF-1α信號通路的機(jī)制研究
        1 實(shí)驗(yàn)材料
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 實(shí)驗(yàn)藥品制備
            2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.3 Caco2細(xì)胞與骨髓來源巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)試驗(yàn)
            2.4 CCK8法測定健脾清腸方含藥血清對細(xì)胞活性的影響
            2.5 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)
            2.6 蛋白免疫印跡分析
            2.7 細(xì)胞免疫熒光染色
            2.8 統(tǒng)計分析
        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 小鼠骨髓來源巨噬細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
            3.2 健脾清腸方含藥血清濃度測定
            3.3 健脾清腸方對TNF-α刺激下BMDMs中 IL-1β、TNF-α、IL-10基因表達(dá)量的影響
            3.4 健脾清腸方對TNF-α刺激下BMDMs中 HIF-1α表達(dá)情況的影響
            3.5 健脾清腸方對TNF-α刺激下BMDMs中 NF-κB及 m TOR表達(dá)情況的影響
            3.6 健脾清腸方對TNF-α刺激下BMDMs中 TRAF2、IκB、PI3K及 Akt蛋白表達(dá)量的影響
            3.7 Caco2細(xì)胞株形態(tài)學(xué)觀察
            3.8 健脾清腸方對TNF-α刺激下Caco2 細(xì)胞中IL-1β、TNF-α、IL-10基因表達(dá)量的影響
            3.9 健脾清腸方對TNF-α刺激下Caco2 細(xì)胞中HIF-1α及 NF- κB表達(dá)情況的影響
            3.10 健脾清腸方對TNF-α刺激下Caco2 細(xì)胞中Claudin-1及ZO-1表達(dá)的影響
        4 實(shí)驗(yàn)小結(jié)
    實(shí)驗(yàn)四 健脾清腸方調(diào)控DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎模型小鼠中NF-κB/HIF-1α信號通路的機(jī)制研究
        1 實(shí)驗(yàn)材料
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 實(shí)驗(yàn)藥品制備
            2.2 實(shí)驗(yàn)分組、造模及給藥
            2.3 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)
            2.4 蛋白免疫印跡分析
            2.5 組織免疫熒光染色
            2.6 統(tǒng)計分析
        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 健脾清腸方對DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎模型小鼠結(jié)腸組織中HIF-1α表達(dá)情況的影響
            3.2 健脾清腸方對DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎模型小鼠結(jié)腸組織中NF-κB及mTOR蛋白表達(dá)量的影響
            3.3 健脾清腸方對DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎模型小鼠結(jié)腸組織中TRAF2、IκB、PI3K及 Akt蛋白表達(dá)量的影響
            3.4 健脾清腸方對DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎模型小鼠結(jié)腸組織中Claudin-1及ZO-1 表達(dá)的影響
        4 實(shí)驗(yàn)小結(jié)
討論
    1 立論依據(jù)
    2 健脾清腸方的組方分析
    3 實(shí)驗(yàn)研究的機(jī)制探討
    4 問題與展望
創(chuàng)新點(diǎn)
結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄
    附錄一 :文獻(xiàn)綜述 基于細(xì)胞自噬的中醫(yī)藥防治潰瘍性結(jié)腸炎的作用研究
        參考文獻(xiàn)
    附錄二 :博士期間發(fā)表論著



本文編號：3881207