目的:探討健脾清腸方治療潰瘍性結腸炎的潛在藥效機制,豐富中醫(yī)藥在潰瘍性結腸炎治療中的科學內(nèi)涵,為其臨床推廣應用提供新的理論依據(jù)。方法:1.構建DSS誘導的結腸炎小鼠模型,給予健脾清腸方干預治療,采用疾病活動指數(shù)評分表每日評估小鼠的結腸炎嚴重程度,觀察健脾清腸方對小鼠體重變化、結腸長度變化的影響,蘇木素-伊紅染色、免疫組織化學法評估健脾清腸方對小鼠結腸組織的病理學改變,ELISA法檢測健脾清腸方對小鼠血清中TNF-α、IL-1β含量的影響,RT-PCR法檢測健脾清腸方對小鼠結腸組織中TNF-α、IL-1β、IL-10基因表達水平的影響;2.運用系統(tǒng)藥理學的方法,通過相關數(shù)據(jù)庫對中草藥所含活性化合物成分進行篩選、相應靶點匹配、與疾病效應靶點之間的網(wǎng)絡構建分析、對潛在藥效靶點的富集分析,對健脾清腸方在潰瘍性結腸炎治療中的潛在藥效機制進行系統(tǒng)性的探索;3.提取與分離小鼠骨髓來源巨噬細胞,同時為更好模擬機體生理環(huán)境,構建Caco2細胞與小鼠骨髓來源巨噬細胞的共培養(yǎng)試驗,給予TNF-α刺激構建細胞炎癥模型,并分別給予健脾清腸方含藥血清及陽性對照藥吡咯烷二硫基甲酸酯、雷帕霉素干預治療,采用RT-PC...

【文章頁數(shù)】：104 頁

【學位級別】：博士

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中文摘要
ABSTRACT
引言
實驗研究
    實驗一 健脾清腸方顯著改善DSS誘導結腸炎模型小鼠的炎癥反應
        1 實驗材料
        2 實驗方法
            2.1 實驗藥品制備
            2.2 實驗分組、造模及給藥
            2.3 實驗樣本采集
            2.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗
            2.5 蘇木素-伊紅染色
            2.6 免疫組化
            2.7 逆轉錄聚合酶鏈反應
            2.8 統(tǒng)計分析
        3 實驗結果
            3.1 小鼠的一般情況
            3.2 小鼠給藥期間體重變化
            3.3 小鼠給藥期間結腸形態(tài)變化
            3.4 小鼠給藥期間結腸組織病理學變化
            3.5 小鼠給藥期間結腸免疫組織化學變化
            3.6 小鼠給藥期間血清TNF-α、IL-1β表達情況
            3.7 小鼠給藥期間結腸組織TNF-α、IL-1β、IL-10 基因表達情況
        4 實驗小結
    實驗二 基于系統(tǒng)藥理學探索健脾清腸方治療UC的潛在藥效機制
        1 實驗材料
        2 實驗方法
            2.1 藥物活性成分篩選及化合物-靶點網(wǎng)絡構建
            2.2 疾病相關靶點收集及蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡構建
            2.3 藥效靶點篩查及富集分析
        3 實驗結果
            3.1 健脾清腸方的藥物活性成分檢索及篩選
            3.2 健脾清腸方的藥物活性成分相關靶點篩選及化合物-靶點網(wǎng)絡構建
            3.3 健脾清腸方的藥物-化合物-靶點網(wǎng)絡構建
            3.4 UC疾病相關靶點收集
            3.5 健脾清腸方治療UC蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡構建及潛在藥效靶點篩選
            3.6 基于Omics Bean平臺對健脾清腸方治療UC潛在藥效靶點的富集分析
            3.7 基于Cytoscape軟件對健脾清腸方治療UC潛在藥效靶點的富集分析
        4 實驗小結
    實驗三 健脾清腸方調(diào)控TNF-α誘導炎癥模型細胞中NF-κB/HIF-1α信號通路的機制研究
        1 實驗材料
        2 實驗方法
            2.1 實驗藥品制備
            2.2 細胞培養(yǎng)
            2.3 Caco2細胞與骨髓來源巨噬細胞共培養(yǎng)試驗
            2.4 CCK8法測定健脾清腸方含藥血清對細胞活性的影響
            2.5 逆轉錄聚合酶鏈反應
            2.6 蛋白免疫印跡分析
            2.7 細胞免疫熒光染色
            2.8 統(tǒng)計分析
        3 實驗結果
            3.1 小鼠骨髓來源巨噬細胞形態(tài)學觀察
            3.2 健脾清腸方含藥血清濃度測定
            3.3 健脾清腸方對TNF-α刺激下BMDMs中 IL-1β、TNF-α、IL-10基因表達量的影響
            3.4 健脾清腸方對TNF-α刺激下BMDMs中 HIF-1α表達情況的影響
            3.5 健脾清腸方對TNF-α刺激下BMDMs中 NF-κB及 m TOR表達情況的影響
            3.6 健脾清腸方對TNF-α刺激下BMDMs中 TRAF2、IκB、PI3K及 Akt蛋白表達量的影響
            3.7 Caco2細胞株形態(tài)學觀察
            3.8 健脾清腸方對TNF-α刺激下Caco2 細胞中IL-1β、TNF-α、IL-10基因表達量的影響
            3.9 健脾清腸方對TNF-α刺激下Caco2 細胞中HIF-1α及 NF- κB表達情況的影響
            3.10 健脾清腸方對TNF-α刺激下Caco2 細胞中Claudin-1及ZO-1表達的影響
        4 實驗小結
    實驗四 健脾清腸方調(diào)控DSS誘導結腸炎模型小鼠中NF-κB/HIF-1α信號通路的機制研究
        1 實驗材料
        2 實驗方法
            2.1 實驗藥品制備
            2.2 實驗分組、造模及給藥
            2.3 逆轉錄聚合酶鏈反應
            2.4 蛋白免疫印跡分析
            2.5 組織免疫熒光染色
            2.6 統(tǒng)計分析
        3 實驗結果
            3.1 健脾清腸方對DSS誘導結腸炎模型小鼠結腸組織中HIF-1α表達情況的影響
            3.2 健脾清腸方對DSS誘導結腸炎模型小鼠結腸組織中NF-κB及mTOR蛋白表達量的影響
            3.3 健脾清腸方對DSS誘導結腸炎模型小鼠結腸組織中TRAF2、IκB、PI3K及 Akt蛋白表達量的影響
            3.4 健脾清腸方對DSS誘導結腸炎模型小鼠結腸組織中Claudin-1及ZO-1 表達的影響
        4 實驗小結
討論
    1 立論依據(jù)
    2 健脾清腸方的組方分析
    3 實驗研究的機制探討
    4 問題與展望
創(chuàng)新點
結論
致謝
參考文獻
附錄
    附錄一 :文獻綜述 基于細胞自噬的中醫(yī)藥防治潰瘍性結腸炎的作用研究
        參考文獻
    附錄二 :博士期間發(fā)表論著



本文編號：3881207