胰腺癌是惡性程度最高的消化道腫瘤之一,發(fā)病率和死亡率較高。胰腺癌早期診斷困難、治療手段有限、預(yù)后極差。造成不良預(yù)后的一個(gè)主要原因是胰腺癌對(duì)化療藥物的耐藥性。目前以吉西他濱為基礎(chǔ)的化療方案是胰腺癌術(shù)后輔助治療、新輔助治療和晚期化療的一線方案,但只有少部分病人能從化療中獲益,胰腺癌對(duì)吉西他濱的原發(fā)和獲得性耐藥是影響療效的主要原因。因此,對(duì)胰腺癌吉西他濱耐藥的機(jī)制進(jìn)行深入研究有助于我們發(fā)現(xiàn)新的治療靶標(biāo),從而提高化療效果,改善病人預(yù)后。吉西他濱發(fā)揮功能的主要機(jī)制是促進(jìn)癌細(xì)胞的凋亡,而癌細(xì)胞凋亡信號(hào)途徑的失調(diào)是導(dǎo)致吉西他濱耐藥的重要原因之一。Bcl-XL是胰腺癌中主要的抗凋亡蛋白,但具體調(diào)控機(jī)制仍不明確。GATA結(jié)合蛋白1(GATA1)是最早發(fā)現(xiàn)的GATA轉(zhuǎn)錄因子家族成員,在胰腺癌中的功能尚未有報(bào)道。我們發(fā)現(xiàn),GATA1在胰腺癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁組織。高表達(dá)GATA1的胰腺癌病人總生存期(OS)和無復(fù)發(fā)生存期(RF S)較短。GATA 1表達(dá)水平可以預(yù)測(cè)吉西他濱治療病人的預(yù)后,在接受吉西他濱治療的病人中,高表達(dá)GATA1的病人OS和RFS較短,而在未接受西他濱治療的病人中,GATA1的表達(dá)...

【文章頁數(shù)】：104 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
縮略詞表
中文摘要
Abstract
前言
材料與方法
    1、材料
        1.1 細(xì)胞株、菌株及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 質(zhì)粒及小RNA
        1.3 主要試劑
        1.4 主要儀器
        1.5 臨床組織樣本
        1.6 常用溶液配方
    2. 方法
        2.1 質(zhì)粒構(gòu)建
        2.2 細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染
        2.3 慢病毒包裝及穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株獲取
        2.4 吉西他濱耐藥細(xì)胞株的獲取
        2.5 實(shí)時(shí)定量PCR
        2.6 蛋白質(zhì)免疫印跡(Western blot)
        2.7 細(xì)胞生長及存活曲線實(shí)驗(yàn)
        2.8 平板克隆形成
        2.9 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)
        2.10 染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)實(shí)驗(yàn)
        2.11 細(xì)胞凋亡檢測(cè)
        2.12 裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)
        2.13 免疫組化及免疫熒光
        2.14 TUNEL凋亡檢測(cè)
        2.15 統(tǒng)計(jì)分析
結(jié)果
    一、GATA1通過調(diào)控抗凋亡通路誘導(dǎo)胰腺癌對(duì)吉西他濱耐藥
        1.1 GATA1在胰腺癌標(biāo)本中高表達(dá)
        1.2 GATA1表達(dá)與胰腺癌病人OS與RFS相關(guān)
        1.3 GATA1促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞增殖
        1.4 GATA1誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞吉西他濱耐藥
        1.5 GATA1誘導(dǎo)胰腺癌耐藥的下游基因篩選
        1.6 GATA1通過結(jié)合Bcl-XL的啟動(dòng)子調(diào)控其轉(zhuǎn)錄
        1.7 GATA1通過調(diào)控Bcl-XL誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞耐藥
        1.8 GATA1在裸鼠體內(nèi)通過調(diào)控Bcl-XL誘導(dǎo)胰腺癌耐藥
        1.9 Bcl-XL和GATA1的表達(dá)呈正相關(guān)
        1.10 Bcl-XL與胰腺癌病人OS與RFS相關(guān)
        1.11 GATA1和Bcl-XL表達(dá)水平是胰腺癌的獨(dú)立預(yù)后因素
    二、miR-1197通過下調(diào)hENT1表達(dá)誘導(dǎo)胰腺癌吉西他濱耐藥
        2.1 miR-1197在胰腺癌吉西他濱耐藥細(xì)胞株中表達(dá)水平上調(diào)
        2.2 miR-1197誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞吉西他濱耐藥
        2.3 miR-1197通過結(jié)合hENT1 mRNA的3'UTR序列調(diào)控hENT1表達(dá)
        2.4 miR-1197通過調(diào)控hENT1介導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞吉西他濱耐藥
        2.5 miR-1197在裸鼠體內(nèi)通過hENT1介導(dǎo)胰腺癌耐藥
        2.6 胰腺癌標(biāo)本中miR-1197與hENT1表達(dá)呈負(fù)相關(guān)
        2.7 miR-1197與吉西他濱化療組胰腺癌病人預(yù)后相關(guān)
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況
致謝



本文編號(hào)：3846192