胰腺癌是高度惡性的消化系統(tǒng)腫瘤,發(fā)病率和死亡率逐年上升。2018年全球統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示:胰腺癌發(fā)病率2.5%,死亡率4.5%,分別居世界第14位和第7位。胰腺癌發(fā)病隱匿,進(jìn)展迅速,對(duì)放化療均不敏感,診斷時(shí)多已屬于中晚期,手術(shù)切除率僅占20%,且術(shù)后復(fù)發(fā)率、轉(zhuǎn)移率極高,5年生存率僅約8%。因此,現(xiàn)階段深入探索胰腺癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制,尋找有效的治療靶點(diǎn)尤為重要。2003年4月,人類基因組計(jì)劃(Human Genome Project,HGP)的測(cè)序工作完成,揭示了人類基因組中只有1%-1.5%的DNA能夠編碼蛋白,而98%以上的序列屬于非編碼RNA(non-protein coding RNA,ncRNA),即所謂的“junk DNA”。同年9月,美國(guó)國(guó)立人類基因組研究院(US National Human Genome Research Institute,NHGRI)啟動(dòng)了繼HGP之后又一項(xiàng)跨國(guó)基因組學(xué)研究項(xiàng)目——DNA原件百科全書(encyclopedia of DNA Elements,ENCODE),旨在解析人類基因組所有的功能元件,該項(xiàng)目用時(shí)9年的時(shí)間揭示了人類基因組中至少80%...

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語(yǔ)
第一部分 :胰腺癌組織差異表達(dá)長(zhǎng)鏈非編碼RNA的篩選
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 組織樣本
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 提取RNA
            2.2.2 芯片實(shí)驗(yàn)
            2.2.3 數(shù)據(jù)分析
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 RNA及芯片質(zhì)檢結(jié)果
        3.2 差異lncRNA篩選統(tǒng)計(jì)
        3.3 進(jìn)一步篩選出長(zhǎng)鏈非編碼RNA LINC00994
    4 討論
    5 結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
第二部分 :長(zhǎng)鏈非編碼RNA LINC00994 在胰腺癌中的表達(dá)及生物學(xué)功能
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 組織樣本
            2.1.2 細(xì)胞和動(dòng)物
            2.1.3 主要試劑
            2.1.4 主要儀器
            2.1.5 主要引物
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 篩選細(xì)胞系
            2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.3 細(xì)胞和組織總RNA提取
            2.2.4 real-time qPCR檢測(cè)RNA表達(dá)
            2.2.5 CCK-8 檢測(cè)細(xì)胞增殖
            2.2.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期
            2.2.7 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡
            2.2.8 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移
            2.2.9 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲
            2.2.10 Western blot檢測(cè)蛋白表達(dá)
            2.2.11 裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)
            2.2.12 統(tǒng)計(jì)分析
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 LINC00994 在胰腺癌組織和細(xì)胞中的表達(dá)
        3.2 LINC00994 穩(wěn)定低表達(dá)細(xì)胞株的構(gòu)建
        3.3 體外沉默LINC00994 抑制胰腺癌細(xì)胞增殖
        3.4 體外沉默LINC00994 使胰腺癌細(xì)胞G0/G1 期阻滯
        3.5 體外沉默LINC00994 促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞凋亡
        3.6 體外沉默LINC00994 抑制胰腺癌細(xì)胞遷移
        3.7 體外沉默LINC00994 抑制胰腺癌細(xì)胞侵襲
        3.8 體外沉默LINC00994 抑制裸鼠移植瘤生長(zhǎng)
    4 討論
    5 結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
第三部分 :LINC00994 發(fā)揮促癌作用的分子機(jī)制
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 組織樣本
            2.1.2 細(xì)胞和質(zhì)粒載體
            2.1.3 主要試劑
            2.1.4 主要儀器
            2.1.5 主要引物
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1芯片實(shí)驗(yàn)
            2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.3 細(xì)胞和組織總RNA提取
            2.2.4 real-time q PCR檢測(cè)RNA表達(dá)
            2.2.5 Western blot檢測(cè)蛋白表達(dá)
            2.2.6 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 差異miRNA篩選統(tǒng)計(jì)
        3.2 miR-765-3p的篩選及靶基因預(yù)測(cè)
        3.3 miR-765-3p在胰腺癌組織中的表達(dá)及與 LINC00994 的相關(guān)性
        3.4 RUNX2 在胰腺癌組織中的表達(dá)及與LINC00994 的相關(guān)性
        3.5 LINC00994 正向調(diào)控RUNX2 的表達(dá)
        3.6 RUNX2 正向調(diào)控LINC00994 的表達(dá)
        3.7 miR-765-3p負(fù)向調(diào)控LINC00994 和RUNX2 的表達(dá)
        3.8 miR-765-3p直接作用于LINC00994 和RUNX2
        3.9 LINC00994 競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合miR-765-3p
        3.10 miR-765-3p逆轉(zhuǎn)LINC00994 對(duì)RUNX2 表達(dá)的調(diào)控
        3.11 miR-765-3p-inhibitor逆轉(zhuǎn)sh-LINC00994 對(duì)細(xì)胞增殖的抑制
        3.12 miR-765-3p-inhibitor逆轉(zhuǎn)sh-LINC00994 對(duì)細(xì)胞遷移的抑制
    4 討論
    5 結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的科研成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3836603