發(fā)布時間：2023-05-11 03:06

　　目的:觀察慢性乙型肝炎脾胃濕熱證和肝郁脾虛證患者的腸道菌群變化情況,初步探討腸道差異菌群與甲基化相關蛋白之間的關系。方法:采用病例--對照研究的方案,從四川省成都市郫縣中醫(yī)院門診招募慢性乙肝患者12例,其中脾胃濕熱證有5例、肝郁脾虛證7例,正常健康對照組由6名健康志愿者構(gòu)成,采用16SrDNA高通量測序技術觀察三組樣本的菌群多樣性和豐度變化情況,比較各組菌群結(jié)構(gòu)特征;全自動生化儀檢測肝功能指標;Elisa法檢測甲基化感染相關蛋白DNMT1、MeCp2、E-cad、P53的濃度;Pearson相關系數(shù)分析腸道菌群與DNMT1、MeCp2、E-cad、P53之間的關系。結(jié)果:1.本次研究的三組18個樣本DNA共檢測出1980988條高質(zhì)量的Clean reads,得到8352條OTUs,這些OTUs分屬于11個菌門,19個綱,25個目,45個科,89個種,146個屬,其中健康對照組(3399)>脾胃濕熱組(2654)>肝郁脾虛組(2299),三組樣本共有的OTUs有263個,健康對照組和脾胃濕熱組之間有469個交叉OTU,和肝郁脾虛組之間有445個交叉OTU,脾胃濕熱組和肝郁脾...

【文章頁數(shù)】：115 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞對照表
引言
第一部分 文獻研究
    1 中醫(yī)學對乙肝的認識
        1.1 病名認識
        1.2 病因病機概述
        1.3 證候探索
        1.4 中醫(yī)藥治療
    2 現(xiàn)代醫(yī)學對乙肝的認識
        2.1 病原學
        2.2 流行病學
        2.3 發(fā)病機制
        2.4 治療
    3 腸道菌群的研究概況
        3.1 腸道菌群的結(jié)構(gòu)
        3.2 腸道菌群的主要功能
        3.3 影響腸道菌群結(jié)構(gòu)的因素
        3.4 腸道菌群研究方法
    4 腸道菌群在乙肝中的研究現(xiàn)狀
    5 腸道菌群應用于中醫(yī)證候的研究現(xiàn)狀
        5.1 脾虛證的微生態(tài)研究
        5.2 濕熱證的微生態(tài)研究
        5.3 腎陽虛證的微生態(tài)研究
        5.4 其它證型的微生態(tài)研究
第二部分 實驗部分
    一.利用16SrDNA測序技術對慢性乙肝脾胃濕熱證和肝郁脾虛證患者腸道菌群結(jié)構(gòu)的實驗研究
        1 研究目的
        2 研究對象
            2.1 病例來源及分組
            2.2 診斷標準
            2.3 排除納入標準
        3 實驗材料
            3.1 主要試劑
            3.2 主要儀器
        4 實驗方法
            4.1 糞便標本采集
            4.2 腸道菌群DNA的提取
            4.3 腸道菌群DNA的 PCR擴增
            4.4 PCR產(chǎn)物的混樣和純化
            4.5 文庫構(gòu)建和上機測序
            4.6 測序數(shù)據(jù)處理
            4.7 統(tǒng)計學分析
        5 結(jié)果
            5.1 一般資料
            5.2 腸道菌群檢測結(jié)果
            5.3 OTU聚類分析
            5.4 Alpha多樣性分析
            5.5 Beta多樣性分析
            5.6 組間顯著性差異metastats分析
            5.7 群落結(jié)構(gòu)分析與熱圖
            5.8 群落相似度比較
            5.9 LEfSe分析
    二.腸道菌群與DNA甲基化相關指標的關聯(lián)研究
        1 研究對象
        2 實驗材料
            2.1 主要試劑
            2.2 主要儀器
        3 實驗方法
            3.1 血液標本采集
            3.2 血清生化指標檢測
            3.3 ELISA法檢測血漿HBV慢性感染相關指標
        4 統(tǒng)計學分析
        5 實驗結(jié)果
            5.1 HBV-DNA定量
            5.2 肝功能檢測結(jié)果
            5.3 DNA甲基化相關蛋白檢測結(jié)果
            5.4 腸道菌群與DNA甲基化相關指標的關聯(lián)性分析
第三部分 綜合討論
    1 四川地區(qū)慢性乙肝脾胃濕熱證和肝郁脾虛證現(xiàn)狀分析
    2 慢性乙肝相關菌屬分析
    3 慢性乙肝不同證型相關菌屬分析
        3.1 脾胃濕熱證菌群分析
        3.2 肝郁脾虛證腸道菌群分析
    4 DNA甲基化相關蛋白分析
    5 DNA甲基化與中醫(yī)證型分析
    6 腸道菌群與甲基化相關蛋白的關聯(lián)性分析
結(jié)論
創(chuàng)新點
問題與展望
致謝
參考文獻
綜述
    參考文獻
附錄



本文編號：3814033