背景胃癌(GC,gastric cancer)是全球最常見的惡性腫瘤之一,發(fā)病、死亡的比例逐年增加,這是因為胃癌起病隱襲,易于轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā),多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)時已屬于中晚期。胃癌的發(fā)病機制是一個涉及多基因、多階段的復(fù)雜過程,是宿主遺傳因素與環(huán)境因素交互作用的結(jié)果,其遺傳學(xué)改變主要包括基因組不穩(wěn)定、微衛(wèi)星不穩(wěn)定、Cp G島甲基化等。針對胃癌發(fā)病過程中的遺傳學(xué)改變,近年來已發(fā)現(xiàn)多種可指導(dǎo)胃癌患者臨床預(yù)后的潛在靶點,但目前的臨床試驗發(fā)現(xiàn)只有針對HER2和VEGFR2的靶向治療有效,胃癌的臨床預(yù)后依然較差,因此深入了解胃癌相關(guān)的分子發(fā)病機制,在胃癌中找尋有潛在治療作用的分子靶點,發(fā)現(xiàn)和確定新型的腫瘤分子標(biāo)記對有效治療胃癌有著極其重要的臨床價值。Cl C-3(Chloride Voltage-Gated Channel 3)是近年來備受關(guān)注的氯通道蛋白家族成員之一,功能十分復(fù)雜,主要負責(zé)胞內(nèi)外離子穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)、胞內(nèi)囊泡的酸化以及細胞膜興奮性的調(diào)節(jié)。但近年來研究發(fā)現(xiàn)Cl C-3氯通道蛋白與腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切,在細胞凋亡、細胞周期、腫瘤耐藥等方面起關(guān)鍵作用,但Cl C-3在消化道腫瘤尤其是胃癌中的具體作用機...

【文章頁數(shù)】：117 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
前言
材料與方法
    一、實驗材料
        1、所用細胞系
        2、病理組織樣本
        3、實驗動物
        4、質(zhì)粒和菌種
        5、主要試劑
        6、相關(guān)抗體
        7、主要試劑盒
        8、引物序列
        9、主要儀器
        10、溶液配制
    二、實驗方法
        1、細胞總蛋白及核蛋白的提取
        2、DNA提取
        3、RNA提取
        4、質(zhì)粒構(gòu)建及各啟動子片段雙熒光素酶活性檢測
        5、BSBP(Biotin-Streptavidin-Beads Pull-down)蛋白垂釣
        6、快速銀染及蛋白質(zhì)譜鑒定
        7、免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation, CO-IP)
        8、蛋白免疫印記(Western Blot,WB)
        9、逆轉(zhuǎn)錄及實時熒光定量 PCR(Real time q-PCR)
        10、構(gòu)建穩(wěn)定沉默/過表達的細胞系
        11、染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)
        12、MTS細胞增殖實驗
        13、劃痕實驗
        14、Transwell侵襲實驗
        15、克隆形成實驗
        16、裸鼠皮下成瘤實驗
        17、免疫組織化學(xué)(Immunohistochemistry , IHC)
        18、免疫熒光(Immunofluorescence , IF)
    三、統(tǒng)計學(xué)方法
    四、技術(shù)路線
實驗結(jié)果
    1、ClC-3在胃癌中的表達及臨床意義
        1.1 ClC-3在人胃癌組織中的表達及臨床意義
        1.2 ClC-3在人胃癌細胞系中的表達
    2、ClC-3在胃癌中的生物學(xué)功能及相關(guān)信號通路
        2.1 ClC-3在胃癌中的生物學(xué)功能預(yù)測及驗證
        2.2 ClC-3在胃癌中的相關(guān)信號通路預(yù)測及驗證
    3、ClC-3啟動子特異性結(jié)合蛋白的垂釣及驗證
        3.1 ClC-3啟動子雙熒光素酶報告基因質(zhì)粒及啟動子探針的構(gòu)建
        3.2 ClC-3啟動子特異性結(jié)合蛋白的垂釣及驗證
    4、Cl C-3和XRCC5 在人胃癌組織中的表達及臨床意義
        4.1 Cl C-3和XRCC5 在人胃癌組織中的表達及相關(guān)性
        4.2 Cl C-3和XRCC5 在人胃癌組織中的臨床意義
    5、體外實驗證明Cl C-3 的表達和功能受XRCC5 調(diào)控
        5.1 敲低XRCC5對Cl C-3 表達及胃癌細胞生長遷移的影響
        5.2 過表達XRCC5對Cl C-3 表達及胃癌細胞生長遷移的影響
    6、Cl C-3 表達在轉(zhuǎn)錄水平上受XRCC5 調(diào)控
    7、Cl C-3 表達調(diào)控對下游PI3K/AKT信號通路的影響
    8、ClC-3在胃癌中表達調(diào)控的分子機制
        8.1 細胞核中XRCC5特異性結(jié)合蛋白的檢測
        8.2 XRCC5 特異性結(jié)合蛋白PARP1 的驗證
        8.3 XRCC5與PARP1 相互作用共同調(diào)控Cl C-3 表達
    9、體內(nèi)實驗證明Cl C-3 的表達和功能受XRCC5 調(diào)控
討論及展望
結(jié)論
創(chuàng)新點
參考文獻
主要縮略詞表
綜述 ClC-3氯通道蛋白在腫瘤中的作用
    參考文獻
附錄
博士期間參與的科研項目
博士期間發(fā)表的SCI論文
致謝



本文編號：3805321