發(fā)布時(shí)間：2023-04-04 11:25

　　目的:前列腺癌(Prostate Cancer)是男性泌尿生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤。最新流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示,近年來隨著我國人口老齡化加劇、飲食習(xí)慣改變等不良因素影響,我國前列腺癌發(fā)病率及致死病例呈上升趨勢,發(fā)病人群呈年輕化趨勢,形勢嚴(yán)峻。前列腺癌起病常隱匿、臨床表現(xiàn)缺乏特異性、潛伏期較長,多半患者在出現(xiàn)較嚴(yán)重的血尿、尿路梗阻、骨痛及病理性骨折等被確診時(shí)已是中晚期。局灶性病灶行根治性術(shù)后預(yù)后良好,但中晚期治療手段有限、預(yù)后差。因此,早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療對于前列腺癌尤為重要,然而目前尚缺乏前列腺癌早期篩查的可靠生化指標(biāo)及行之有效的靶向治療位點(diǎn);故深入探究前列腺癌發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)制,尋找新的篩查指標(biāo)及靶向治療位點(diǎn)一直是臨床與相關(guān)研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)。ATP酶蛋白酶體26S亞基2(proteasome 26S subunit,ATPase 2,PSMC2)是蛋白編碼基因,是26S蛋白酶體的19S調(diào)節(jié)顆粒的必要組分,它能與ATP及核苷酸結(jié)合,具有水解酶及核苷三磷酸酶的功能,在胞內(nèi)選擇性降解蛋白質(zhì)中發(fā)揮了關(guān)鍵作用,參與調(diào)節(jié)細(xì)胞分化及增殖、細(xì)胞凋亡、能量代謝及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等諸多生物學(xué)活動。有研究表明PS...

【文章頁數(shù)】：97 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
英文縮略詞表
第1章 前言
第2章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備
        2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑的配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 Celigo細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測細(xì)胞生長
        2.2.3 細(xì)胞克隆形成檢測
        2.2.4 細(xì)胞劃痕試驗(yàn)
        2.2.5 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡
        2.2.6 細(xì)胞Transwell實(shí)驗(yàn)
        2.2.7 HE、免疫組織化學(xué)染色(HE staining,IHC)
            2.2.7.1 HE染色:
            2.2.7.2 IHC染色:
            2.2.7.3 結(jié)果觀察:
        2.2.8 Western Blot檢測
            2.2.8.1 細(xì)胞總蛋白抽提
            2.2.8.2 SDS-PAGE
            2.2.8.3 免疫印跡(濕轉(zhuǎn))
            2.2.8.4 免疫顯色:
            2.2.8.5 加ECL、曝光、顯影、定影
        2.2.9 Real-time qPCR檢測
            2.2.9.1 引物設(shè)計(jì)
            2.2.9.2 總RNA抽提
            2.2.9.3 反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA
            2.2.9.4 Real-time PCR檢測
            2.2.9.5 數(shù)據(jù)分析
        2.2.10 目的基因RNA干擾慢病毒載體制備
            2.2.10.1 實(shí)驗(yàn)質(zhì)粒
            2.2.10.2 實(shí)驗(yàn)菌株
            2.2.10.3 RNA干擾靶點(diǎn)設(shè)計(jì)及雙鏈DNA oligo制備
            2.2.10.4 線性化載體制備
        2.2.11 慢病毒包裝與質(zhì)量檢測
            2.2.11.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.2.11.2 質(zhì)粒的制備:
            2.2.11.3 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染與慢病毒收獲
            2.2.11.4 慢病毒濃縮與純化
            2.2.11.5 慢病毒質(zhì)量檢測
            2.2.11.6 滴度分析
        2.2.12 慢病毒感染細(xì)胞
            2.2.12.1 目的細(xì)胞復(fù)蘇
            2.2.12.2 目的細(xì)胞慢病毒感染
        2.2.13 動物成瘤實(shí)驗(yàn)
        2.2.14 蛋白抗體芯片
        2.2.15 PSMC2 過表達(dá)與Akt信號通路驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)
        2.2.16 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 PSMC2 在前列腺癌組織及細(xì)胞系中高表達(dá)
    3.2 成功構(gòu)建PSMC2 表達(dá)敲減的細(xì)胞模型
    3.3 下調(diào)PSMC2 基因表達(dá)可抑制前列腺癌細(xì)胞增殖、克隆形成、二維遷移及侵襲并促進(jìn)其凋亡
    3.4 下調(diào)PSMC2 基因表達(dá)可抑制前列腺細(xì)胞體內(nèi)成瘤能力
    3.5 PSMC2 抗前列腺癌細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵分子篩查
    3.6 PSMC2 抗前列腺癌細(xì)胞凋亡的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路驗(yàn)證
    3.7 PSMC2/PI3K/Akt/Cyclin D1/CDK6 作用通路驗(yàn)證
第4章 討論
第5章 結(jié)論
第6章 主要創(chuàng)新點(diǎn)
    不足之處
第7章 全文總結(jié)
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號：3781995