心肌梗死(Myocardial infarction,MI)是目前發(fā)病率和致死率較高的全球范圍性疾病,也是形成慢性心衰的主要原因,嚴重影響了患病者的生活質(zhì)量。各種原因引起的心肌梗死主要是通過阻礙心臟冠脈循環(huán),引起心臟組織內(nèi)部供血不足而造成的心肌細胞梗死、進而引起心臟功能減弱甚至消失。目前臨床治療主要采用物理介入的手段,通過移植心臟支架、搭建旁支人工血管等方法恢復(fù)冠脈循環(huán)的正常運行。然而這些介入手段并不適合所有心臟病患者,尤其是已經(jīng)接受多次心臟搭橋手術(shù)的病患。因此,研究拓展不同心臟病患者的治療手段迫在眉睫。細胞外基質(zhì)(ECM)是一類非細胞成分,分布在各個組織、器官內(nèi)。除了作為必需的結(jié)構(gòu)成分外,細胞外基質(zhì)分子還在關(guān)鍵細胞事件中發(fā)揮重要作用。許多疾病的發(fā)生和發(fā)展都與細胞外基質(zhì)成分的變化密切相關(guān),尤其是心血管疾病。研究發(fā)現(xiàn),在心梗發(fā)生后,心臟組織內(nèi)部發(fā)生心肌細胞凋亡、細胞外基質(zhì)降解,膠原分子沉積形成非收縮性瘢痕組織,這些引起心臟組織的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能的非適應(yīng)性改變。為了深入研究心肌梗死后組織微環(huán)境的變化,本研究采用轉(zhuǎn)錄組測序的方法研究心梗對心臟細胞外基質(zhì)基因表達水平上的影響。研究發(fā)現(xiàn)心梗后細胞...

【文章頁數(shù)】：116 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
引言
第1章 緒論
    1.1 細胞外基質(zhì)
        1.1.1 細胞外基質(zhì)的組成和結(jié)構(gòu)
        1.1.2 心臟細胞外基質(zhì)的病理變化
    1.2 HSPG的結(jié)構(gòu)與功能
        1.2.1 HSPG的結(jié)構(gòu)特征
        1.2.2 HSPG的生物合成與調(diào)控
        1.2.3 HSPG的生物功能及研究方法
        1.2.4 HSPG與疾病的關(guān)系
    1.3 HSPG與生長因子
        1.3.1 HSPG與生長因子相互作用
        1.3.2 堿性成纖維細胞生長因子在心梗中的作用
        1.3.3 HSPG對心血管疾病的影響
    1.4 HSPG及其類似物作為生物材料的研究
        1.4.1 生長因子載藥材料
        1.4.2 HSPG及其類似物作為生物材料的價值
    1.5 本論文研究思路與內(nèi)容
        1.5.1 選題背景與研究思路
        1.5.2 研究內(nèi)容
第2章 細胞外基質(zhì)分子在心肌梗死前后的表達變化
    2.1 引言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 實驗試劑
        2.2.3 實驗儀器
        2.2.4 手術(shù)器械
    2.3 實驗方法
        2.3.1 心梗模型構(gòu)建
        2.3.2 測序取樣
        2.3.3 轉(zhuǎn)錄組測序
        2.3.4 測序數(shù)據(jù)分析
        2.3.5 數(shù)據(jù)分析使用的軟件
    2.4 結(jié)果與討論
        2.4.1 大鼠心肌梗死造模
        2.4.2 測序數(shù)據(jù)質(zhì)量評估
        2.4.3 細胞外基質(zhì)差異基因分析
    2.5 本章小結(jié)
第3章 硫酸乙酰肝素蛋白多糖體外對堿性成纖維細胞生長因子的影響
    3.1 引言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 實驗試劑及配制
        3.2.2 實驗藥品及細胞
        3.2.3 實驗儀器
    3.3 實驗方法
        3.3.1 脊髓組織獲取
        3.3.2 蛋白聚糖純化
        3.3.3 堿性成纖維生長因子bFGF的原核表達載體構(gòu)建與蛋白純化
        3.3.4 SDS-PAGE電泳
        3.3.5 體外結(jié)合實驗
        3.3.6 體外釋放實驗
        3.3.7 心肌細胞的原代提取
        3.3.8 心肌細胞粘附實驗
        3.3.9 成纖維細胞的培養(yǎng)
        3.3.10 細胞活性檢測
        3.3.11 HSPG對bFGF生物活性的影響
        3.3.12 MMP2的活性檢測
        3.3.13 Western blotting檢測HSPG對bFGF的保護作用
        3.3.14 統(tǒng)計分析
    3.4 結(jié)果與討論
        3.4.1 堿性成纖維細胞生長因子bFGF在大腸桿菌中表達及后期純化
        3.4.2 體外結(jié)合實驗
        3.4.3 體外釋放實驗
        3.4.4 心肌細胞的培養(yǎng)及粘附實驗
        3.4.5 HSPG對bFGF活性影響
        3.4.6 HSPG抑止MMP2生物活性
        3.4.7 HSPG對bFGF的保護作用
    3.5 本章小結(jié)
第4章 硫酸乙酰肝素蛋白多糖結(jié)合堿性成纖維細胞生長因子對心肌梗死的影響
    4.1 引言
    4.2 實驗材料
        4.2.1 實驗試劑
        4.2.2 實驗動物
        4.2.3 實驗儀器及主要耗材
    4.3 實驗方法
        4.3.1 心肌梗死動物模型構(gòu)建及治療
        4.3.2 心肌梗死動物模型成功構(gòu)建的檢測
        4.3.3 硫酸乙酰肝素蛋白多糖結(jié)合堿性成纖維細胞生長因子對心梗后血管再生的影響
        4.3.4 組織形態(tài)學(xué)分析
        4.3.5 TUNEL染色
        4.3.6 小動物心臟超聲檢測
    4.4 結(jié)果與討論
        4.4.1 TUNEL染色分析
        4.4.2 組織形態(tài)學(xué)分析心室重構(gòu)
        4.4.3 血管再生
        4.4.4 心肌細胞存活
        4.4.5 心臟功能檢測
    4.5 本章小結(jié)
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 綜合討論
    5.2 結(jié)論與展望
參考文獻
附錄
致謝
在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與取得的其他研究成果



本文編號：3771947