近年來,植物多糖因具有多途徑、多靶點(diǎn)及多環(huán)節(jié)的特點(diǎn)在抗腫瘤方面的研究一直比較活躍。黃芪多糖(Astragalus polysaccharides,APS)因可通過直接的殺傷腫瘤細(xì)胞或增強(qiáng)機(jī)體免疫活性途徑發(fā)揮抗腫瘤的作用受到研究者的關(guān)注。藥物抗腫瘤活性的研究離不開腫瘤模型,其中三維體外組織工程腫瘤培養(yǎng)系統(tǒng)因能更好模擬體內(nèi)腫瘤微環(huán)境,逐漸成為研究腫瘤生物學(xué)及預(yù)測(cè)新型藥物的重要組成部分。作為構(gòu)建組織工程腫瘤基本因素之一,支架的選擇尤為重要。脫細(xì)胞支架因可較好保留原細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellular matrix,ECM)成分、生理生化及機(jī)械性能,已被廣泛用于腫瘤模型的構(gòu)建。本研究制備一種新型的脫細(xì)胞豬肺衍生支架并進(jìn)一步構(gòu)建3D腫瘤模型,從體外2D、3D培養(yǎng)和小鼠皮下種植瘤等多種腫瘤模型綜合考察了 APS的抗乳腺癌作用及機(jī)制。同時(shí),利用網(wǎng)絡(luò)拓?fù)涞纳镄畔W(xué)方法獲得樞紐基因并實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證APS體內(nèi)抗乳腺癌的其它可能機(jī)制,以便為APS的臨床應(yīng)用提供更多的實(shí)驗(yàn)及理論依據(jù)。多糖的結(jié)構(gòu)及組成與其生物活性有直接關(guān)系,本研究選用美國(guó)泛華醫(yī)藥的同一批次APS作為研究對(duì)象,通過紫外光譜、IR光譜、NMR及HPL...

【文章頁數(shù)】：193 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
附錄 英文縮略詞
1 緒論
    1.1 研究背景和意義
    1.2 多糖抗腫瘤研究進(jìn)展
        1.2.1 多糖結(jié)構(gòu)與抗腫瘤的關(guān)系
        1.2.2 多糖抗腫瘤機(jī)制
    1.3 APS的生物活性研究
        1.3.1 APS的結(jié)構(gòu)及組成
        1.3.2 APS的抗腫瘤活性
        1.3.3 APS的其他活性
    1.4 腫瘤模型
        1.4.1 腫瘤模型種類
        1.4.2 3D培養(yǎng)及其優(yōu)勢(shì)
        1.4.3 3D腫瘤模型分類
    1.5 基于生物信息學(xué)的功能富集及關(guān)鍵基因分析
        1.5.1 生物信息學(xué)和基因表達(dá)數(shù)據(jù)庫
        1.5.2 差異表達(dá)基因的分析
        1.5.3 功能富集分析
        1.5.4 蛋白的相互作用及關(guān)鍵基因分析
    1.6 本文選題依據(jù)及主要研究思路
2 APS的結(jié)構(gòu)和組分分析
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)藥品
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.3 APS理化性質(zhì)及結(jié)構(gòu)分析
        2.3.1 多糖含量的測(cè)定
        2.3.2 糖醛酸含量測(cè)定
        2.3.3 UV分析
        2.3.4 FTIR分析
        2.3.5 NMR分析
        2.3.6 場(chǎng)發(fā)射掃描電鏡分析
        2.3.7 HPLC分析
        2.3.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.4 結(jié)果與討論
        2.4.1 APS的多糖和糖醛酸含量
        2.4.2 APS的純度
        2.4.3 APS的結(jié)構(gòu)特征
        2.4.4 APS的糖苷鍵構(gòu)型
        2.4.5 APS的微觀結(jié)構(gòu)及元素組成
        2.4.6 APS的單糖組成
    2.5 小結(jié)
3 APS介導(dǎo)巨噬細(xì)胞激活及其體外抗乳腺癌活性
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備
        3.2.1 藥品與試劑
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 試劑配制
        3.3.2 巨噬細(xì)胞和乳腺癌細(xì)胞的培養(yǎng)
        3.3.3 APS對(duì)乳腺癌細(xì)胞株的作用
        3.3.4 APS對(duì)巨噬細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)活性
        3.3.5 CM對(duì)乳腺癌細(xì)胞毒作用的評(píng)價(jià)
        3.3.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        3.4.1 APS對(duì)MCF-7和4T1無細(xì)胞毒性
        3.4.2 APS介導(dǎo)巨噬細(xì)胞激活
        3.4.3 CM抑制MCF-7和4T1細(xì)胞的增殖
        3.4.4 CM誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯
        3.4.5 CM促進(jìn)細(xì)胞凋亡
        3.4.6 CM通過線粒體通路介導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡
    3.5 本章小結(jié)
4 體外3D腫瘤模型的構(gòu)建及CM對(duì)3D培養(yǎng)MCF-7細(xì)胞的抑制作用
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備
        4.2.1 藥品與試劑
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 試劑配制
        4.3.2 脫細(xì)胞豬肺支架制備及脫細(xì)胞效率
        4.3.3 脫細(xì)胞豬肺支架的物理性能檢測(cè)
        4.3.4 脫細(xì)胞豬肺支架的生物相容性
        4.3.5 乳腺癌特定標(biāo)志物的表達(dá)
        4.3.6 CM對(duì)3D腫瘤細(xì)胞毒性作用的評(píng)估
        4.3.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        4.4.1 脫細(xì)胞效率
        4.4.2 交聯(lián)前后脫細(xì)胞豬肺支架的物理性能
        4.4.3 脫細(xì)胞豬肺衍生支架良好的生物相容性
        4.4.4 3D脫細(xì)胞豬肺培養(yǎng)上調(diào)MCF-7乳腺癌特定蛋白的表達(dá)
        4.4.5 CM抑制3D環(huán)境中MCF-7細(xì)胞的生長(zhǎng)
        4.4.6 CM促進(jìn)3D培養(yǎng)MCF-7細(xì)胞的凋亡
        4.4.7 CM上調(diào)Bax/Bcl-2比例
    4.5 本章小結(jié)
5 三種不同來源支架構(gòu)建的腫瘤模型的評(píng)估及比較
    5.1 引言
    5.2 實(shí)驗(yàn)材料
        5.2.1 藥品與試劑
        5.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備
        5.2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    5.3 實(shí)驗(yàn)方法
        5.3.1 試劑配制
        5.3.2 三種材料的制備及微觀形貌
        5.3.3 細(xì)胞活性分析
        5.3.4 乳腺癌特定標(biāo)志物蛋白表達(dá)
        5.3.5 體內(nèi)局部組織反應(yīng)
        5.3.6 2D及3D培養(yǎng)的細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性檢測(cè)
        5.3.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    5.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        5.4.1 三種支架的微觀結(jié)構(gòu)及元素組成
        5.4.2 三種支架良好的生物相容性
        5.4.3 3D培養(yǎng)提高乳腺癌特定蛋白表達(dá)
        5.4.4 4T1細(xì)胞在3D支架不同的生長(zhǎng)模式
        5.4.5 3D培養(yǎng)促進(jìn)小鼠體內(nèi)致瘤性和血管形成
        5.4.6 3D培養(yǎng)降低MCF-7細(xì)胞對(duì)5-FU的敏感性
    5.5 本章小結(jié)
6 APS體內(nèi)抗乳腺癌作用及機(jī)制
    6.1 引言
    6.2 實(shí)驗(yàn)試劑和設(shè)備
        6.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        6.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        6.2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    6.3 實(shí)驗(yàn)方法
        6.3.1 試劑配制
        6.3.2 小鼠乳腺癌模型的建立
        6.3.3 小鼠分組及給藥
        6.3.4 體重及臟器指數(shù)測(cè)定
        6.3.5 小鼠腫瘤及免疫組織病理切片觀察
        6.3.6 小鼠巨噬細(xì)胞中性紅吞噬實(shí)驗(yàn)
        6.3.7 小鼠淋巴細(xì)胞的制備及增殖
        6.3.8 APS對(duì)淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響
        6.3.9 腫瘤組織中Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白的表達(dá)
        6.3.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
    6.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        6.4.1 APS抑制小鼠體內(nèi)腫瘤的生長(zhǎng)
        6.4.2 APS提高小鼠體重和免疫器官指數(shù)
        6.4.3 APS對(duì)小鼠腫瘤組織病理形態(tài)的影響
        6.4.4 APS改善小鼠胸腺和脾臟組織結(jié)構(gòu)
        6.4.5 APS提高小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬能力
        6.4.6 APS促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖
        6.4.7 APS提高小鼠血清中細(xì)胞因子含量
        6.4.8 APS對(duì)腫瘤組織Bcl-2,Bax和Caspase-3蛋白表達(dá)的影響
    6.5 本章小結(jié)
7 APS體內(nèi)抗乳腺癌作用的生物信息學(xué)研究
    7.1 引言
    7.2 實(shí)驗(yàn)材料和設(shè)備
        7.2.1 藥品與試劑
        7.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備
        7.2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    7.3 研究方法
        7.3.1 差異表達(dá)基因的篩選
        7.3.2 差異表達(dá)基因的GO和KEGG富集分析
        7.3.3 差異表達(dá)基因的蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建
        7.3.4 關(guān)鍵基因的篩選
        7.3.5 小鼠乳腺癌模型的建立
        7.3.6 小鼠給藥
        7.3.7 免疫組化分析
        7.3.8 統(tǒng)計(jì)分析
    7.4 研究結(jié)果與討論
        7.4.1 識(shí)別差異基因
        7.4.2 差異表達(dá)基因的GO富集分析
        7.4.3 差異基因的KEGG富集通路
        7.4.4 特定BP差異基因的PPI網(wǎng)絡(luò)
        7.4.5 特定BP-PPI共同表達(dá)基因
        7.4.6 APS對(duì)腫瘤組織中EGFR和ANXA1蛋白表達(dá)的影響
    7.5 本章小結(jié)
8 結(jié)論與展望
    8.1 結(jié)論
    8.2 創(chuàng)新點(diǎn)
    8.3 展望
參考文獻(xiàn)
攻讀博士學(xué)位期間科研項(xiàng)目及科研成果
致謝
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3759763