目的:肝細(xì)胞癌（hepatocellularcarcinoma,HCC）是最常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤,在全球腫瘤相關(guān)死亡率中排第四位;在我國(guó)60歲以下的男性中排在腫瘤相關(guān)死亡率的首位。包括肝癌在內(nèi)的絕大多數(shù)實(shí)體腫瘤中存在著缺氧微環(huán)境,缺氧是大多數(shù)實(shí)體瘤的特征之一,缺氧微環(huán)境的存在促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移,增強(qiáng)了腫瘤細(xì)胞對(duì)放化療的耐受,同時(shí)也改變了腫瘤細(xì)胞的基因表達(dá)水平。缺氧微環(huán)境下,腫瘤細(xì)胞通過上調(diào)多個(gè)基因促進(jìn)多種糖酵解關(guān)鍵酶的表達(dá),以增強(qiáng)細(xì)胞糖酵解過程,為腫瘤細(xì)胞適應(yīng)低氧環(huán)境提供生存所必須的能量和物質(zhì)。然而目前對(duì)于肝癌糖酵解調(diào)控分子機(jī)制的研究依然尚不明確,深入探索低氧微環(huán)境下肝癌細(xì)胞糖酵解調(diào)控的分子機(jī)制,將有助于研發(fā)新的肝癌治療方案。Yes相關(guān)蛋白（Yes association protein,YAP）是重要的轉(zhuǎn)錄共激活因子,也是關(guān)鍵的核漿穿梭蛋白,在包括肝癌在內(nèi)的多種惡性腫瘤中異常高表達(dá),主要在細(xì)胞核中發(fā)揮轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。關(guān)于YAP在腫瘤能量代謝過程中的調(diào)控機(jī)制研究,已經(jīng)成為腫瘤治療領(lǐng)域的一個(gè)新的研究熱點(diǎn)。細(xì)胞內(nèi)增強(qiáng)的糖酵解狀態(tài)能夠通過上調(diào)糖酵解關(guān)鍵酶的表達(dá)促進(jìn)YAP蛋白活性的表達(dá),而Y... 

【文章頁(yè)數(shù)】：83 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語(yǔ)
第一部分: YAP在肝癌組織與癌旁組織中的表達(dá)及其與HIF-1α的相關(guān)性分析
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 研究對(duì)象
        2.2 主要試劑和儀器
            2.2.1 主要試劑
            2.2.2 主要儀器
        2.3 主要實(shí)驗(yàn)方法
            2.3.1 Western blotting實(shí)驗(yàn)
            2.3.2 Real-time PCR實(shí)驗(yàn)
            2.3.3 組織免疫熒光實(shí)驗(yàn)
            2.3.4 細(xì)胞核蛋白與細(xì)胞漿蛋白抽提實(shí)驗(yàn)
            2.3.5 免疫組化
        2.4 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果
        3.1 YAP在肝癌組織中高表達(dá)且主要在肝癌細(xì)胞核中表達(dá)
        3.2 YAP與HIF-1α在肝癌組織中的表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)
    4 討論
第二部分: 低氧條件下YAP通過結(jié)合并穩(wěn)定HIF-1α蛋白上調(diào)PKM2表達(dá)的機(jī)制研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 細(xì)胞來(lái)源
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器
        2.2 主要實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 肝癌細(xì)胞系培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染
            2.2.2 Western bloting實(shí)驗(yàn)
            2.2.3 Real-time PCR實(shí)驗(yàn)
            2.2.4 細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)
            2.2.5 細(xì)胞核蛋白與細(xì)胞漿蛋白抽提實(shí)驗(yàn)
            2.2.6 葡萄糖攝取檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
            2.2.7 乳酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
            2.2.8 細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)
            2.2.9 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)
            2.2.10 免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)(Co-IP)
            2.2.11 染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)(ChIP)
            2.2.12 熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)
        2.3 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果
        3.1 低氧激活YAP并促進(jìn)YAP在肝癌細(xì)胞核內(nèi)表達(dá)
        3.2 低氧激活YAP并不依賴HIF-1α
        3.3 低氧促進(jìn)肝癌細(xì)胞糖酵解發(fā)生
        3.4 YAP介導(dǎo)了低氧對(duì)肝癌細(xì)胞糖酵解的促進(jìn)作用
        3.5 YAP結(jié)合并穩(wěn)定HIF-1α蛋白
        3.6 YAP-HIF-1α復(fù)合體促進(jìn)PKM2的表達(dá)
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3733633