甲狀腺癌是最常見的內(nèi)分泌惡性腫瘤,其發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)。甲狀腺乳頭狀癌（Papillary thyroid carcinoma,PTC）是最常見的甲狀腺腫瘤類型,約占所有甲狀腺癌病例的80%。目前,PTC的主要療法包括手術(shù)、化療和放療,大多數(shù)PTC患者經(jīng)系統(tǒng)治療后反應(yīng)良好,然而,PTC復(fù)發(fā)率較高,且有些患者會(huì)發(fā)生預(yù)后不良。因此,揭示PTC發(fā)生和發(fā)展的潛在分子機(jī)制對(duì)于有效治療方案的制定以及提高PTC患者的治愈率至關(guān)重要。MicroRNAs（miRNAs）是一類小的非編碼RNA,可以結(jié)合特定基因的3’-非翻譯區(qū)（3’-UTR）以抑制相應(yīng)靶mRNA的翻譯。研究表明miRNAs的異常表達(dá)與人類惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。miRNAs作為癌基因或抑癌基因,參與腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡和侵襲。多項(xiàng)研究證實(shí),miR-200b/c在多種腫瘤中表達(dá)異常,包括胃癌、乳腺癌、結(jié)腸直腸癌、膽管癌等。然而,關(guān)于miR-200b/c在PTC中的具體作用及機(jī)制尚不明確。RAP1是一種小的Ras樣GTP酶,它可以調(diào)節(jié)多種細(xì)胞過程,包括細(xì)胞粘附、遷移、極性、分化、生長(zhǎng)和血管生成。Ras相關(guān)蛋白1B（Ras-relate... 

【文章頁數(shù)】：128 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
中英文縮略詞表
引言
第一部分 miR-200b/c和RAP1B在PTC中的表達(dá)研究
    1 前言
    2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1 組織和細(xì)胞來源
        2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.4 實(shí)驗(yàn)主要試劑的配制
    3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 細(xì)胞培養(yǎng)、傳代及凍存
        3.2 HE染色觀察PTC組織形態(tài)
        3.3 免疫組化檢測(cè)PTC組織中RAP1B蛋白的表達(dá)情況
        3.4 qRT-PCR檢測(cè)miR-200b/c及RAP1B mRNA在PTC組織和細(xì)胞中的表達(dá)
        3.5 Western blot檢測(cè)RAP1B蛋白在PTC組織和細(xì)胞中的表達(dá)
        3.6 數(shù)據(jù)分析
    4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.1 PTC組織形態(tài)與癌旁組織形態(tài)的差別
        4.2 miR-200b、miR-200c在PTC組織中的表達(dá)情況
        4.3 RAP1B mRNA在PTC組織中的表達(dá)情況
        4.4 RAP1B蛋白在PTC組織中的表達(dá)情況
        4.5 PTC組織中miR-200b、miR-200c與RAP1B表達(dá)的相關(guān)性分析
        4.6 miR-200b、miR-200c在PTC細(xì)胞中的表達(dá)
        4.7 RAP1B mRNA在PTC細(xì)胞中的表達(dá)
        4.8 RAP1B蛋白在PTC細(xì)胞中的表達(dá)
    5 討論
    6 結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
第二部分 miR-200b/c靶向RAP1B對(duì)PTC細(xì)胞生物學(xué)特性的影響及機(jī)制研究
    1 前言
    2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.4 實(shí)驗(yàn)主要試劑的配制
    3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)miR-200b、miR-200c與RAP1B的結(jié)合位點(diǎn)
        3.2 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)
        3.3 miR-200b、miR-200c過表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.4 RAP1B過表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.5 對(duì)重組慢病毒載體進(jìn)行包裝和滴度測(cè)定
        3.6 LV-miR-200b、LV-miR-200c、LV-RAP1B和LV-vector分別感染TPC-1和K1細(xì)胞
        3.7 qRT-PCR檢測(cè)miR-200b/c過表達(dá)載體轉(zhuǎn)染效率
        3.8 MTT檢測(cè)miR-200b/c-RAP1B axis對(duì)TPC-1、K1細(xì)胞增殖的影響
        3.9 克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-200b/c-RAP1B axis對(duì)TPC-1、K1細(xì)胞克隆形成的影響
        3.10 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-200b/c-RAP1B axis對(duì)TPC-1、K1細(xì)胞遷移的影響
        3.11 Transwell檢測(cè)miR-200b/c-RAP1B axis對(duì)TPC-1、K1細(xì)胞侵襲的影響
        3.12 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)miR-200b/c-RAP1B axis對(duì)TPC-1、K1細(xì)胞凋亡的影響
        3.13 Western blot
        3.14 ELISA檢測(cè)miR-200b/c-RAP1B axis對(duì)NF-κB活性的影響
        3.15 數(shù)據(jù)分析
    4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.1 生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)miR-200b、miR-200c與RAP1B的結(jié)合位點(diǎn)
        4.2 pmiR-GLO-RAP1B-3'UTR和pmiR-GLO-RAP1B-3'UTRM構(gòu)建
        4.3 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果
        4.4 miR-200b、miR-200c過表達(dá)載體的構(gòu)建
        4.5 RAP1B過表達(dá)載體的構(gòu)建
        4.6 重組慢病毒進(jìn)行包裝和滴定
        4.7 穩(wěn)定細(xì)胞系TPC-1、K1的構(gòu)建
        4.8 TPC-1、K1細(xì)胞中miR-200b、miR-200c的轉(zhuǎn)染效率
        4.9 miR-200b/c對(duì)PTC細(xì)胞中RAP1B表達(dá)的影響
        4.10 miR-200b/c-RAP1B axis對(duì)TPC-1、K1細(xì)胞增殖的影響
        4.11 miR-200b/c-RAP1B axis對(duì)TPC-1、K1細(xì)胞克隆形成能力的影響
        4.12 miR-200b/c-RAP1B axis對(duì)TPC-1、K1細(xì)胞遷移的影響
        4.13 miR-200b/c-RAP1B axis對(duì)TPC-1、K1細(xì)胞侵襲的影響
        4.14 miR-200b/c-RAP1B axis對(duì)TPC-1、K1細(xì)胞凋亡的影響
        4.15 miR-200b/c-RAP1B axis對(duì)TPC-1、K1細(xì)胞EMT的影響
        4.16 miR-200b/c-RAP1B axis對(duì)TPC-1、K1細(xì)胞中NF-κB/Twist1信號(hào)通路的影響
        4.17 miR-200b/c-RAP1B axis對(duì)NF-κB活性的影響
    5 討論
    6 結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
第三部分 miR-200b/c靶向RAP1B對(duì)裸鼠皮下PTC移植瘤生長(zhǎng)的影響及機(jī)制研究
    1 前言
    2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.4 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.5 實(shí)驗(yàn)主要試劑的配制
    3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 構(gòu)建PTC移植瘤裸鼠模型
        3.2 荷瘤小鼠腫瘤體積和質(zhì)量檢測(cè)
        3.3 HE染色檢測(cè)各組PTC移植瘤組織形態(tài)
        3.4 Western blot檢測(cè)各組移植瘤中RAP1B、EMT以及NF-κB/Twist1信號(hào)通路相關(guān)蛋白蛋白的表達(dá)
        3.5 ELISA檢測(cè)各組移植瘤中NF-κB的活性
        3.6 數(shù)據(jù)分析
    4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.1 PTC移植瘤裸鼠模型構(gòu)建結(jié)果
        4.2 miR-200b/c對(duì)PTC移植瘤生長(zhǎng)的影響
        4.3 miR-200b/c對(duì)PTC移植瘤重量的影響
        4.4 miR-200b/c對(duì)PTC移植瘤內(nèi)RAP1B表達(dá)的影響
        4.5 miR-200b/c對(duì)PTC移植瘤組織形態(tài)的影響
        4.6 miR-200b/c對(duì)PTC移植瘤內(nèi)EMT的影響
        4.7 miR-200b/c對(duì)PTC移植瘤內(nèi)NF-κB/Twist1信號(hào)通路的影響
        4.8 miR-200b/c對(duì)PTC移植瘤內(nèi)NF-κB活性的影響
    5 討論
    6 結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
全文結(jié)論
綜述 miR-200b/c在人類疾病中的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡(jiǎn)歷及在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Twist1通過NF-κB信號(hào)通路對(duì)人乳頭狀甲狀腺癌上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的調(diào)控機(jī)制研究[J]. 毛沖舟,何海山,杜尖,付小蘭.  臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志. 2016(14)
[2]Diabetic retinopathy-ocular complications of diabetes mellitus[J]. Martin M Nentwich,Michael W Ulbig.  World Journal of Diabetes. 2015(03)
[3]Annual report on status of cancer in China, 2011[J]. Wanqing Chen,Rongshou Zheng,Hongmei Zeng,Siwei Zhang,Jie He.  Chinese Journal of Cancer Research. 2015(01)
[4]miRNA-103: Molecular link between insulin resistance and nonalcoholic fatty liver disease[J]. Qian Xu,Ying Li,Yong-Fang Shang,Hui-Ling Wang,Min-Xiu Yao.  World Journal of Gastroenterology. 2015(02)



本文編號(hào)：3702538