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不同樣本中諾如病毒核酸檢測(cè)方法的研究

發(fā)布時(shí)間:2022-10-20 10:52
  諾如病毒(Norovirus,NoV)是引起全球急性胃腸炎的主要致病原,全年均可感染,主要感染兒童、老人和免疫力低下人群。諾如病毒可以食物和水源為載體導(dǎo)致人類患病,又被稱作食源性病毒(Foodborne Virus)和水源性病毒(Waterborne Virus)。食源性病毒和水源性病毒主要通過(guò)糞-口途徑傳播,因其傳染性強(qiáng)和傳播速度快等特征,成為嚴(yán)重威脅人民群眾的健康和生命安全,甚至影響社會(huì)穩(wěn)定的重大因素。在食源性病毒和水源性病毒引起的食品安全事故或突發(fā)公共衛(wèi)生事件中,諾如病毒占據(jù)了重要地位。由于食品種和水源的種類繁多,成分復(fù)雜,污染的病毒含量低,病毒分布不均一,且含有各種抑制病毒檢測(cè)的因子等因素,使得食源性病毒和水源性病毒檢測(cè)成為全球公共衛(wèi)生面臨的重點(diǎn)和難點(diǎn)。我國(guó)已建立了全國(guó)病毒性腹瀉監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò),具備了完整的引起腹瀉病毒病相關(guān)病毒的檢測(cè)技術(shù)體系。但我國(guó)建立食源性病毒和水源性病毒檢測(cè)體系起步晚,體系還不完善。目前我國(guó)僅發(fā)布了食品(硬質(zhì)表面食品、軟質(zhì)水果、生食蔬菜和貝類消化腺)中諾如病毒檢測(cè)的食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(GB 4789.42-2016),該標(biāo)準(zhǔn)是在歐盟的ISO/TS 15216-2的... 

【文章頁(yè)數(shù)】:156 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】:博士

【文章目錄】:
摘要
Abstract
前言
    1. 諾如病毒
        1.1.介紹
        1.2. 基因和病毒結(jié)構(gòu)
        1.3. GII4基因型諾如病毒
    2. 食源性病毒和水源性病毒
        2.1. 介紹
        2.2. 根據(jù)臨床特點(diǎn)分類
        2.3. 食源性和水源性諾如病毒
        2.4. 諾如病毒的傳播途徑
    3. 不同樣本中諾如病毒檢測(cè)
        3.1. 臨床樣本、食品樣本和水樣本
        3.2. 諾如病毒檢測(cè)策略
        3.3. 病毒分離
    3. 本文關(guān)注的科學(xué)問(wèn)題
第一部分 腹瀉樣本中諾如病毒檢測(cè)方法實(shí)驗(yàn)室評(píng)價(jià)與應(yīng)用
    1. 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1. 實(shí)驗(yàn)儀器
        1.2. 常用試劑
        1.3. 常用耗材
        1.4. 實(shí)驗(yàn)病毒株
    2. 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1. 核酸提取
        2.2. 病毒檢測(cè)方法實(shí)驗(yàn)室評(píng)價(jià)
        2.3. 諾如病毒檢測(cè)方法在臨床樣本中的應(yīng)用
    3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1. 病毒Realtime RT-PCR檢測(cè)方法評(píng)估
        3.2. 呼和浩特市諾如病毒分子流行情況
    4. 討論
第二部分 水中諾如病毒檢測(cè)方法建立與應(yīng)用
    1. 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1. 實(shí)驗(yàn)儀器
        1.2. 常用試劑
        1.3. 常用耗材
        1.4. 實(shí)驗(yàn)病毒株
        1.5. 常用溶劑的配置方法
    2. 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1. 細(xì)胞復(fù)蘇、傳代培養(yǎng)和凍存
        2.2. MNV-1病毒培養(yǎng)和病毒滴定測(cè)定
        2.3. 核酸提取
        2.4. 病毒檢測(cè)方法研究
        2.5. 瓶裝或桶裝水中病毒濃縮
        2.6. 大量水中病毒濃縮
        2.7. 高通量測(cè)序
    3. 結(jié)果
        3.1. MNV-1 Realtime RT-PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線建立
        3.2. 瓶裝和桶裝水中病毒回收效果
        3.3. Biotroy半自動(dòng)微生物采集系統(tǒng)回收MNV-1效果評(píng)價(jià)
        3.4. 飲用水中病毒回收
    4. 討論
第三部分 食品中諾如病毒檢測(cè)方法優(yōu)化與評(píng)估
    1. 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1. 實(shí)驗(yàn)儀器
        1.2. 常用試劑
        1.3. 常用耗材
        1.4. 病毒毒株
    2. 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1. 模擬樣本制備
        2.2. 病毒洗脫
        2.3. 二次濃縮
        2.4. 直接RNA提取
        2.5. 病毒檢測(cè)
        2.6. ISC-RT-qPCR檢測(cè)NoVs
    3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1. 碳水化合物類食品中MNV-1回收效果
        3.2. 脂肪、蛋白類食品中MNV-1回收效果
        3.3. 食品中諾如病毒的回收效果
        3.4. 基于受體捕獲諾如病毒檢測(cè)草莓中諾如病毒
    4. 實(shí)驗(yàn)討論
第四部分 貝類中病毒檢測(cè)
    1. 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1. 實(shí)驗(yàn)儀器
        1.2. 常用試劑
        1.3. 常用耗材
        1.4. 過(guò)程對(duì)照病毒MNV-1毒株制備
    2. 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1. 貝類樣本收集
        2.2. 貝類樣本處理
        2.3. 貝類病毒的分離
        2.4. 高通量測(cè)序
    3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1. 比較不同貝類中諾如病毒檢測(cè)方法
        3.2. 貝類中病毒宏基因組分析結(jié)果
        3.3. 貝類中動(dòng)物病毒基因組的分析結(jié)果
        3.4. 貝類中胃腸炎疾病相關(guān)的病毒基因組分析
    4. 討論
全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡(jiǎn)歷
致謝


【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
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[3]2011—2015年安徽省哨點(diǎn)監(jiān)測(cè)醫(yī)院5歲以下兒童病毒性腹瀉的病原學(xué)分析[J]. 陳國(guó)平,史永林,查震球,張進(jìn),宋律,馬婉婉,蘇斌.  公共衛(wèi)生與預(yù)防醫(yī)學(xué). 2018(01)
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[5]一起疑似食源性諾如病毒胃腸炎事件病原分子生物學(xué)特征分析[J]. 王坤明,柯明月,施紅,林英華.  中國(guó)食品衛(wèi)生雜志. 2017(01)
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[9]一起水源性諾如病毒感染性腹瀉暴發(fā)疫情流行病學(xué)分析[J]. 韓會(huì)強(qiáng),黃志剛,李國(guó)維,麻春雷,陳衛(wèi)東,徐曉清.  醫(yī)學(xué)動(dòng)物防制. 2013(02)
[10]水源性諾如病毒[J]. 寇曉霞,吳清平,薛亮.  微生物學(xué)通報(bào). 2012(04)

博士論文
[1]水體和貝類中食源性病毒分子檢測(cè)研究及污染調(diào)查[D]. 寇曉霞.中國(guó)科學(xué)院研究生院(武漢病毒研究所) 2007



本文編號(hào):3694353

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