目的:分析血管因子與絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥（肝腎不足證）患者骨代謝標志物、骨密度的相關(guān)性。觀察芪骨膠囊對絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥（肝腎不足證）患者中醫(yī)癥候積分、骨代謝標志物及循環(huán)水平血管因子的變化并分析其治療作用,從體內(nèi)體外實驗探討芪骨膠囊促成骨成血管效應(yīng)防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的分子生物學機制。方法:（1）采用橫斷面研究方法,通過一般情況調(diào)查、記錄患者中醫(yī)癥候積分,測量患者骨密度、骨代謝標志物,運用ELISA法檢測患者外周循環(huán)水平神經(jīng)軸突生長因子3（Slit3）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、胰島素樣生長因子1（IGF-1）、內(nèi)皮素1（Endothelin）的含量。采用t檢驗、Spearman相關(guān)分析,分析血管相關(guān)因子與絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥（肝腎不足證）患者骨代謝標志物、骨密度的相關(guān)性。（2）采用隨機對照試驗,隨機分為試驗組和對照組,對照組采用口服鈣爾奇D的基礎(chǔ)治療,試驗組在基礎(chǔ)治療基礎(chǔ)上口服芪骨膠囊,芪骨膠囊口服每日三次,每次三粒;3個月為治療周期。（入組0天）檢測指標作為基線,治療后（12周±3天）評價安全性指標、中醫(yī)癥候積分、骨代謝標志物、循環(huán)內(nèi)血管因子水平變化。（3）體外實驗:分離提取原代骨髓間充... 

【文章頁數(shù)】：110 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
引言
第一部分 血管因子與絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥患者骨代謝標志物及骨密度的相關(guān)性研究
    1 研究方法
        1.1 病例納入
        1.2 診斷標準
        1.3 納入標準
        1.4 排除標準
        1.5 研究方法
            1.5.1 主要檢測的細胞因子
            1.5.2 實驗主要試劑及儀器
            1.5.3 實驗原理
            1.5.4 實驗操作步驟
            1.5.5 骨密度測定與管理
        1.6 倫理學原則
        1.7 技術(shù)路線
        1.8 統(tǒng)計學方法及描述
    2 結(jié)果
        2.1 患者年齡、身高、體重及BMI指數(shù)的正態(tài)性分析
        2.2 患者骨代謝標志物表達量的正態(tài)性分析
        2.3 患者DXA骨密度表達量的正態(tài)性分析
        2.4 患者血管相關(guān)因子表達量的正態(tài)性分析
        2.5 患者血管相關(guān)因子與年齡、BMI的相關(guān)性分析
        2.6 患者血管因子之間相關(guān)性分析
        2.7 患者血管因子之間偏相關(guān)性分析
        2.8 患者血管因子與骨密度的相關(guān)性分析
        2.9 患者血管因子表達量與骨代謝標志物的相關(guān)性分析
    3 分析與討論
        3.1 血管因子在骨質(zhì)疏松癥發(fā)病及治療中的作用與意義
        3.2 骨代謝標志物在骨質(zhì)疏松癥診斷及治療中作用
    4 小結(jié)
第二部分 芪骨膠囊對絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥患者血管因子影響的隨機對照研究
    1 臨床資料
        1.1 研究對象
        1.2 診斷標準
        1.3 入選標準
        1.4 排除標準
        1.5 退出(脫落)病例標準及處理
        1.6 剔除病例標準
        1.7 知情同意
    2 研究設(shè)計
        2.1 總體設(shè)計
        2.2 研究病例樣本量計算
        2.3 隨機分組方法
    3 治療方法
        3.1 用藥方法
        3.2 試驗周期
    4 觀察指標
        4.1 一般資料
        4.2 安全性指標
        4.3 效應(yīng)性指標
    5 統(tǒng)計方法
        5.1 統(tǒng)計描述
    6 結(jié)果
        6.0 研究完成情況
        6.1 研究對象一般情況比較
        6.2 治療前研究對象各指標情況
        6.3 兩組患者治療前后療效比較
        6.4 治療后兩組患者療效比較
        6.5 治療后各療效評價指標前后差值變化情況比較
        6.6 安全性指標分析
    7 分析與討論
        7.1 芪骨膠囊在絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥(肝腎不足證)治療探討
        7.2 中藥治療骨質(zhì)疏松癥優(yōu)勢與不足
        7.3 中藥治療骨質(zhì)疏松安全性探討
    8 小結(jié)
第三部分 芪骨膠囊及有效組分促進大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞成骨成血管作用的分子機制
    1 材料與方法
        1.1 主要試劑與儀器設(shè)備
        1.2 實驗動物
        1.3 實驗藥物、分組及含藥血清制備
        1.4 大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞的分離與培養(yǎng)
        1.5 細胞增殖率CCK-8檢測
        1.6 藥物對成骨細胞堿性磷酸酶表達的影響
        1.7 Western blotting法檢測細胞相關(guān)蛋白表達水平
        1.8 定量PCR檢測成骨細胞相關(guān)基因表達水平
        1.9 統(tǒng)計學方法
    2 結(jié)果
        2.1 細胞形態(tài)學觀察及鑒定
        2.3 細胞增殖功能檢測
        2.4 堿性磷酸酶表達的檢測
        2.5 藥物對大鼠BMSCs細胞蛋白表達的影響
        2.6 藥物對大鼠BMSCs細胞基因表達的影響
        2.7 藥物對大鼠間充質(zhì)干細胞成骨分化Slit3、β-catenin蛋白影響
    3 分析與討論
        3.1 骨髓間充質(zhì)干細胞特點
        3.2 BMSCs成骨、內(nèi)皮分化意義及臨床應(yīng)用價值
        3.3 Slit3與β-catenin通路研究
    4 小結(jié)
第四部分 芪骨膠囊及有效組分通過Slit3 激活Wnt-βcatenin通路促進OVX大鼠H血管形成及骨形成的作用機制研究
    1 試驗方法
        1.1 主要試劑與儀器設(shè)備
        1.2 試驗動物
        1.3 骨質(zhì)疏松癥動物模型的建立及動物分組
        1.4 藥物干預(yù)方案
        1.5 micro-ct測量骨微結(jié)構(gòu)
        1.6 Microfil血管造影
        1.7 大鼠脛骨HE染色
        1.8 大鼠脛骨免疫組化染色
        1.9 RT-PCR法檢測大鼠股骨內(nèi)成骨成血管基因m RNA的表達
        1.10 Westernblot法檢測大鼠骨組織相關(guān)蛋白表達水平
        1.11 統(tǒng)計學方法
    2 結(jié)果
        2.1 骨質(zhì)疏松大鼠模型的建立
        2.2 藥物干預(yù)后Micro-CT股骨遠端骨密度、骨量及骨微結(jié)構(gòu)變化
        2.3 藥物干預(yù)后股骨遠端骨內(nèi)血管體積變化
        2.4 大鼠脛骨上段HE染色情況
        2.5 大鼠脛骨上段免疫組化染色情況
        2.6 藥物干預(yù)后大鼠股骨相關(guān)mRNA表達情況
        2.7 藥物干預(yù)后大鼠股骨相關(guān)蛋白表達情況
        2.8 藥物干預(yù)后Wnt通路相關(guān)蛋白表達情況
    3 討論
        3.1 靶向骨內(nèi)血管與骨質(zhì)疏松癥的治療
    4 小結(jié)
創(chuàng)新點
主要結(jié)論
致謝
參考文獻
附錄
    附錄一 文獻綜述 骨內(nèi)血管形成與骨形成偶聯(lián)調(diào)控
        參考文獻
    附錄二 在讀期間發(fā)表學術(shù)論文


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3692117