一、研究目的高血壓腎損傷機制復(fù)雜,現(xiàn)有治療方案療效有限,需要尋找新的治療靶點及治療方案。表觀遺傳學(xué)是高血壓腎損傷的潛在病機,而潛陽育陰顆粒早期的臨床及實驗研究已證實有高血壓腎損傷的保護(hù)作用。本課題研究目的是結(jié)合體內(nèi)、體外模型,證實潛陽育陰顆粒可以通過表觀遺傳通路干預(yù)高血壓腎損傷。二.研究方法1.體內(nèi)基礎(chǔ)實驗--潛陽育陰顆粒通過NNMT介導(dǎo)的表觀遺傳通路改善SHR大鼠腎功能體外實驗SHR大鼠分組為正常組、模型組、潛陽育陰顆粒低劑量組（2.1 g/kg/d）、高劑量組（8.4 g/kg/d）、纈沙坦組,血管緊張素Ⅱ造模2周,潛陽育陰顆粒治療8周后,觀察各組血、尿肌酐、尿微量白蛋白等腎功能指標(biāo)的改變。應(yīng)用Western-blot檢測目的蛋白NNMT、H3K4甲基化、皮層蛋白乙�；谋磉_(dá)。應(yīng)用液質(zhì)聯(lián)用方法檢測NNMT的活性指標(biāo)MNA。2.體外基礎(chǔ)實驗（1）潛陽育陰顆粒抑制HEK293T細(xì)胞增殖。細(xì)胞實驗分為正常組、模型組、潛陽育陰顆粒組及纈沙坦組。應(yīng)用MTT方法觀察不同時間（6 h、12 h、24 h、48 h、72 h）、不同濃度（10-4,10-5,10-6,10-7,10-8,1 0-9... 

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【學(xué)位級別】：博士

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主要縮略語
前言
第一部分 理論研究
    1. 高血壓腎損傷流行病學(xué)調(diào)查
    2. 高血壓腎損傷組織以及血管改變
    3. 高血壓腎損傷的機制研究
    4. 表觀遺傳學(xué)在高血壓腎損傷中的研究
    5. NNMT與表觀遺傳學(xué)
    6. 高血壓腎損傷的現(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療
    7. 潛陽育陰顆粒對高血壓腎損傷干預(yù)效應(yīng)
第二部分 實驗研究
    實驗一 潛陽育陰顆粒通過NNMT介導(dǎo)表觀遺傳通路改善SHR大鼠腎損傷
        1. 實驗材料
        2. 實驗方法
            2.1 實驗動物分組及給藥
            2.2 大鼠標(biāo)本采集
            2.3 Western-Blot法檢測目標(biāo)蛋白的表達(dá)
            2.4 LC-MS/MS測定大鼠血清中MNA濃度
            2.5 統(tǒng)計處理
        3. 實驗結(jié)果
        4. 實驗討論
    實驗二 潛陽育陰顆粒抑制HEK293T細(xì)胞增殖
        1. 實驗材料
        2. 實驗方法
            2.1 HEK293T細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2 潛陽育陰顆粒培養(yǎng)液制備
            2.3 MTT細(xì)胞增殖檢測實驗
            2.4 Edu檢測細(xì)胞增殖
            2.5 細(xì)胞周期測定
            2.6 統(tǒng)計處理
        3. 實驗結(jié)果
        4. 實驗討論
    實驗三 潛陽育陰顆粒通過表觀遺傳機制抑制HEK293T細(xì)胞增殖
        1. 實驗材料
        2. 實驗方法
            2.1 細(xì)胞蛋白提取
            2.2 Western-blot檢測蛋白表達(dá)
            2.3 組蛋白提取
            2.4 免疫沉淀實驗
            2.5 DNA提取
            2.6 DNA甲基化檢測(ELISA)
            2.7 DNA甲基化檢測(全基因組甲基化捕獲測序)
            2.8 統(tǒng)計處理
        3. 實驗結(jié)果
        4. 實驗討論
    實驗四 NNMT影響表觀遺傳因素的體外實驗
        1. 實驗材料
        2. 實驗方法
            2.1 慢病毒轉(zhuǎn)染
            2.2 Real-time PCR檢測NNMT表達(dá)
            2.3 Western-blot檢測NNMT對表觀遺傳因素的作用
            2.4 統(tǒng)計處理
        3. 實驗結(jié)果
        4. 實驗討論
    實驗五 潛陽育陰顆粒對NNMT相關(guān)酶作用的體外實驗
        1. 實驗材料
        2. 實驗方法
            2.1 細(xì)胞蛋白提取
            2.2 Western-blot
            2.3 Real-time PCR
            2.4 統(tǒng)計處理
        3. 實驗結(jié)果
        4. 實驗討論
總結(jié)
參考文獻(xiàn)
攻讀博士學(xué)位期間取得的學(xué)術(shù)成果
致謝
作者簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]組蛋白賴氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶在糖尿病中的研究進(jìn)展[J]. 包志偉,楊天竹,劉洋,王志剛.  中國醫(yī)藥導(dǎo)報. 2019(25)
[2]氧化應(yīng)激及炎癥對糖尿病腎病的影響[J]. 閻婷婷,趙英政,易憲文,徐光翠.  新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報. 2019(08)
[3]促腎上腺激素、腎素、血管緊張素Ⅱ、醛固酮、皮質(zhì)醇聯(lián)合檢測在高血壓診治中的臨床應(yīng)用研究[J]. 陳明星,張婉琳,張力球,黃遠(yuǎn).  現(xiàn)代診斷與治療. 2019(11)
[4]哺乳動物DNA甲基化修飾的動態(tài)調(diào)控機制[J]. 徐彥輝.  生命科學(xué). 2017(10)
[5]慢性腎臟病研究進(jìn)展[J]. 孟令棟,劉昌華,伍剛.  山西醫(yī)藥雜志. 2017(10)
[6]表觀遺傳學(xué)的提出者——沃丁頓[J]. 王華峰,孫瑞嫻.  中學(xué)生物教學(xué). 2017(06)
[7]潛陽育陰顆粒對SHR大鼠腎臟CTGF的影響[J]. 嚴(yán)士海,方祝元,王欣彤,張思奇,高峰,趙寧偉.  中華中醫(yī)藥學(xué)刊. 2017(02)
[8]《中國居民營養(yǎng)與慢性病狀況報告（2015）》解讀[J]. 顧景范.  營養(yǎng)學(xué)報. 2016(06)
[9]中醫(yī)藥治療高血壓腎損害機制研究進(jìn)展[J]. 丁康,方祝元.  河南中醫(yī). 2016(11)
[10]高血壓腎損害的臨床病理特點及預(yù)后分析[J]. 郭雷,廖煜.  中國繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育. 2016(08)

碩士論文
[1]基于二維斑點追蹤成像技術(shù)評價潛陽育陰顆粒改善高血壓左室功能早期損害的臨床研究[D]. 陳怡.南京中醫(yī)藥大學(xué) 2017
[2]基于SPECT技術(shù)評價潛陽育陰顆粒改善高血壓患者早期腎臟損害作用的研究[D]. 杜金玲.南京中醫(yī)藥大學(xué) 2017
[3]潛陽育陰顆粒對老年高血壓患者血壓變異性的影響[D]. 趙菁.南京中醫(yī)藥大學(xué) 2014
[4]潛陽育陰顆粒對高血壓患者血壓短時變異性的影響[D]. 馬諾莎.南京中醫(yī)藥大學(xué) 2013
[5]潛陽育陰顆粒對高血壓腎損害保護(hù)作用的研究[D]. 黃洋.南京中醫(yī)藥大學(xué) 2012



本文編號：3690059