一、研究目的高血壓腎損傷機制復雜,現有治療方案療效有限,需要尋找新的治療靶點及治療方案。表觀遺傳學是高血壓腎損傷的潛在病機,而潛陽育陰顆粒早期的臨床及實驗研究已證實有高血壓腎損傷的保護作用。本課題研究目的是結合體內、體外模型,證實潛陽育陰顆粒可以通過表觀遺傳通路干預高血壓腎損傷。二.研究方法1.體內基礎實驗--潛陽育陰顆粒通過NNMT介導的表觀遺傳通路改善SHR大鼠腎功能體外實驗SHR大鼠分組為正常組、模型組、潛陽育陰顆粒低劑量組（2.1 g/kg/d）、高劑量組（8.4 g/kg/d）、纈沙坦組,血管緊張素Ⅱ造模2周,潛陽育陰顆粒治療8周后,觀察各組血、尿肌酐、尿微量白蛋白等腎功能指標的改變。應用Western-blot檢測目的蛋白NNMT、H3K4甲基化、皮層蛋白乙�；谋磉_。應用液質聯用方法檢測NNMT的活性指標MNA。2.體外基礎實驗（1）潛陽育陰顆粒抑制HEK293T細胞增殖。細胞實驗分為正常組、模型組、潛陽育陰顆粒組及纈沙坦組。應用MTT方法觀察不同時間（6 h、12 h、24 h、48 h、72 h）、不同濃度（10-4,10-5,10-6,10-7,10-8,1 0-9... 

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前言
第一部分 理論研究
    1. 高血壓腎損傷流行病學調查
    2. 高血壓腎損傷組織以及血管改變
    3. 高血壓腎損傷的機制研究
    4. 表觀遺傳學在高血壓腎損傷中的研究
    5. NNMT與表觀遺傳學
    6. 高血壓腎損傷的現代醫(yī)學治療
    7. 潛陽育陰顆粒對高血壓腎損傷干預效應
第二部分 實驗研究
    實驗一 潛陽育陰顆粒通過NNMT介導表觀遺傳通路改善SHR大鼠腎損傷
        1. 實驗材料
        2. 實驗方法
            2.1 實驗動物分組及給藥
            2.2 大鼠標本采集
            2.3 Western-Blot法檢測目標蛋白的表達
            2.4 LC-MS/MS測定大鼠血清中MNA濃度
            2.5 統(tǒng)計處理
        3. 實驗結果
        4. 實驗討論
    實驗二 潛陽育陰顆粒抑制HEK293T細胞增殖
        1. 實驗材料
        2. 實驗方法
            2.1 HEK293T細胞培養(yǎng)
            2.2 潛陽育陰顆粒培養(yǎng)液制備
            2.3 MTT細胞增殖檢測實驗
            2.4 Edu檢測細胞增殖
            2.5 細胞周期測定
            2.6 統(tǒng)計處理
        3. 實驗結果
        4. 實驗討論
    實驗三 潛陽育陰顆粒通過表觀遺傳機制抑制HEK293T細胞增殖
        1. 實驗材料
        2. 實驗方法
            2.1 細胞蛋白提取
            2.2 Western-blot檢測蛋白表達
            2.3 組蛋白提取
            2.4 免疫沉淀實驗
            2.5 DNA提取
            2.6 DNA甲基化檢測(ELISA)
            2.7 DNA甲基化檢測(全基因組甲基化捕獲測序)
            2.8 統(tǒng)計處理
        3. 實驗結果
        4. 實驗討論
    實驗四 NNMT影響表觀遺傳因素的體外實驗
        1. 實驗材料
        2. 實驗方法
            2.1 慢病毒轉染
            2.2 Real-time PCR檢測NNMT表達
            2.3 Western-blot檢測NNMT對表觀遺傳因素的作用
            2.4 統(tǒng)計處理
        3. 實驗結果
        4. 實驗討論
    實驗五 潛陽育陰顆粒對NNMT相關酶作用的體外實驗
        1. 實驗材料
        2. 實驗方法
            2.1 細胞蛋白提取
            2.2 Western-blot
            2.3 Real-time PCR
            2.4 統(tǒng)計處理
        3. 實驗結果
        4. 實驗討論
總結
參考文獻
攻讀博士學位期間取得的學術成果
致謝
作者簡介


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]基于二維斑點追蹤成像技術評價潛陽育陰顆粒改善高血壓左室功能早期損害的臨床研究[D]. 陳怡.南京中醫(yī)藥大學 2017
[2]基于SPECT技術評價潛陽育陰顆粒改善高血壓患者早期腎臟損害作用的研究[D]. 杜金玲.南京中醫(yī)藥大學 2017
[3]潛陽育陰顆粒對老年高血壓患者血壓變異性的影響[D]. 趙菁.南京中醫(yī)藥大學 2014
[4]潛陽育陰顆粒對高血壓患者血壓短時變異性的影響[D]. 馬諾莎.南京中醫(yī)藥大學 2013
[5]潛陽育陰顆粒對高血壓腎損害保護作用的研究[D]. 黃洋.南京中醫(yī)藥大學 2012



本文編號：3690059