研究背景冠狀動(dòng)脈粥樣硬化是一種伴隨多種嚴(yán)重并發(fā)癥與后果的慢性炎癥性反應(yīng),是影響全球死亡率與殘疾率的重要原因。氧化應(yīng)激損傷產(chǎn)生活性氧物質(zhì),從而造成的內(nèi)皮細(xì)胞損傷被普遍認(rèn)為是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生的起始因素。細(xì)胞自噬是一種真核細(xì)胞依賴溶酶體分解代謝受損細(xì)胞器及錯(cuò)誤蛋白的生命過程,可通過抑制炎癥通路,減少細(xì)胞凋亡與壞死,抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激等方式逆轉(zhuǎn)氧化應(yīng)激反應(yīng)帶來的不良后果。以自噬溶酶體的形成為界限,分為早期自噬與終末期自噬。盡管,近年來在氧化應(yīng)激反應(yīng)中細(xì)胞自噬被廣泛研究,但其發(fā)揮的保護(hù)作用仍存在爭議,尤其是對于終末期自噬研究尚少。細(xì)胞焦亡作為一種新型程序性細(xì)胞死亡方式與心血管系統(tǒng)疾病密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn),抑制終末期自噬后,自噬溶酶體無法正常行使功能,細(xì)胞內(nèi)自噬小體與相關(guān)蛋白累積,直接導(dǎo)致難以降解的NLRP3炎癥小體增加與聚集,最終加重細(xì)胞炎癥反應(yīng)。由此,在氧化應(yīng)激反應(yīng)介導(dǎo)的冠狀動(dòng)脈粥樣硬化疾病中,內(nèi)皮細(xì)胞終末期自噬是否對細(xì)胞焦亡產(chǎn)生影響仍需要進(jìn)一步的研究。MicroRNAs是由20-40個(gè)核苷酸組成的,具有高度保守序列的單鏈非編碼RNA,調(diào)控眾多生命過程的基因表達(dá)。其中,microRNA-103（... 

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【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
中英文縮略詞對照表
第一章 綜述
    1 冠狀動(dòng)脈粥樣硬化與氧化應(yīng)激損傷
        1.1 冠狀動(dòng)脈粥樣硬化疾病現(xiàn)狀
        1.2 冠狀動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病機(jī)制
            1.2.1 血管細(xì)胞功能障礙
            1.2.2 糖類與脂質(zhì)代謝紊亂
            1.2.3 免疫炎癥反應(yīng)
        1.3 冠狀動(dòng)脈粥樣硬化與氧化應(yīng)激損傷
            1.3.1 線粒體氧化應(yīng)激
            1.3.2 高血糖氧化應(yīng)激
            1.3.3 氮氧化物氧化應(yīng)激
            1.3.4 脂質(zhì)氧化應(yīng)激
    2 自噬
        2.1 自噬與心血管疾病
            2.1.1 自噬與心肌肥大
            2.1.2 自噬與心律失常
            2.1.3 自噬與心臟缺血再灌注損傷
            2.1.4 自噬與心力衰竭
            2.1.5 自噬與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化
            2.1.6 自噬與心臟衰老
        2.2 自噬與氧化應(yīng)激反應(yīng)
        2.3 自噬與細(xì)胞焦亡
    3 MicroRNA-103
        3.1 MicroRNA
        3.2 MicroRNA-103
            3.2.1 MicroRNA-103 與心血管疾病相關(guān)疾病
            3.2.2 MicroRNA-103 與其他代謝疾病
        3.3 MicroRNA-103 與細(xì)胞自噬
        3.4 前景與展望
    4 BNIP3
        4.1 BNIP3 與細(xì)胞自噬
        4.2 BNIP3 與細(xì)胞焦亡
        4.3 BNIP3 與心血管系統(tǒng)疾病
第二章 實(shí)驗(yàn)研究
    1 氧化應(yīng)激損傷對HCAECs與細(xì)胞自噬的影響
        1.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.3 實(shí)驗(yàn)方法
            1.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)、傳代、凍存與復(fù)蘇
            1.3.2 MTS檢測細(xì)胞生存率
            1.3.3 細(xì)胞內(nèi)ROS檢測
            1.3.4 Western blot蛋白定量
        1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            1.4.1 氧化應(yīng)激反應(yīng)對HCAECs的損傷作用
        1.5 討論
    2 抑制終末期細(xì)胞自噬加劇氧化應(yīng)激反應(yīng)對HCAECs的損傷作用
        2.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.3 實(shí)驗(yàn)方法
            2.3.1 細(xì)胞自噬抑制劑刺激
            2.3.2 免疫熒光染色
            2.3.3 透射電子顯微鏡
        2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            2.4.1 自噬對氧化應(yīng)激內(nèi)皮細(xì)胞的影響
            2.4.2 終末期自噬對氧化應(yīng)激內(nèi)皮細(xì)胞的影響
        2.5 討論
    3 MicroRNA-103 對自噬的調(diào)控及氧化應(yīng)激反應(yīng)中HCAECs的影響
        3.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.3 實(shí)驗(yàn)方法
            3.3.1 慢病毒轉(zhuǎn)染
            3.3.2 細(xì)胞總RNA提取
            3.3.3 miRNA逆轉(zhuǎn)錄
            3.3.4 實(shí)時(shí)定量PCR
        3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.4.1 檢測mi R-103 在氧化應(yīng)激反應(yīng)中的表達(dá)
            3.4.2 高表達(dá)miR-103 在內(nèi)皮氧化應(yīng)激中的作用
            3.4.3 低表達(dá)miR-103 在內(nèi)皮氧化應(yīng)激中的作用
        3.5 討論
    4 MicroRNA-103 下游基因BNIP3 在內(nèi)皮氧化應(yīng)激損傷模型中作用
        4.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.3 實(shí)驗(yàn)方法
            4.3.1 siBNIP3 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染
        4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            4.4.1 氧化應(yīng)激與細(xì)胞自噬對BNIP3 表達(dá)水平的影響
            4.4.2 Micro RNA-103對BNIP3 的調(diào)控作用
            4.4.3 siBNIP3 在內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激模型中發(fā)揮的作用
        4.5 討論
第三章 結(jié)論
創(chuàng)新點(diǎn)及研究意義
參考文獻(xiàn)
作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Expression of miR-15/107 Family MicroRNAs in Human Tissues and Cultured Rat Brain Cells[J]. Wang-Xia Wang,Robert J.Danaher,Craig S.Miller,Joseph R.Berger,Vega G.Nubia,Bernard S.Wilfred,Janna H.Neltner,Christopher M.Norris,Peter T.Nelson.  Genomics,Proteomics ＆ Bioinformatics. 2014(01)



本文編號：3681236