研究背景冠狀動脈粥樣硬化是一種伴隨多種嚴重并發(fā)癥與后果的慢性炎癥性反應,是影響全球死亡率與殘疾率的重要原因。氧化應激損傷產生活性氧物質,從而造成的內皮細胞損傷被普遍認為是冠狀動脈粥樣硬化發(fā)生的起始因素。細胞自噬是一種真核細胞依賴溶酶體分解代謝受損細胞器及錯誤蛋白的生命過程,可通過抑制炎癥通路,減少細胞凋亡與壞死,抑制內質網應激等方式逆轉氧化應激反應帶來的不良后果。以自噬溶酶體的形成為界限,分為早期自噬與終末期自噬。盡管,近年來在氧化應激反應中細胞自噬被廣泛研究,但其發(fā)揮的保護作用仍存在爭議,尤其是對于終末期自噬研究尚少。細胞焦亡作為一種新型程序性細胞死亡方式與心血管系統(tǒng)疾病密切相關。研究發(fā)現(xiàn),抑制終末期自噬后,自噬溶酶體無法正常行使功能,細胞內自噬小體與相關蛋白累積,直接導致難以降解的NLRP3炎癥小體增加與聚集,最終加重細胞炎癥反應。由此,在氧化應激反應介導的冠狀動脈粥樣硬化疾病中,內皮細胞終末期自噬是否對細胞焦亡產生影響仍需要進一步的研究。MicroRNAs是由20-40個核苷酸組成的,具有高度保守序列的單鏈非編碼RNA,調控眾多生命過程的基因表達。其中,microRNA-103（... 

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【學位級別】：博士

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中文摘要
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中英文縮略詞對照表
第一章 綜述
    1 冠狀動脈粥樣硬化與氧化應激損傷
        1.1 冠狀動脈粥樣硬化疾病現(xiàn)狀
        1.2 冠狀動脈粥樣硬化發(fā)病機制
            1.2.1 血管細胞功能障礙
            1.2.2 糖類與脂質代謝紊亂
            1.2.3 免疫炎癥反應
        1.3 冠狀動脈粥樣硬化與氧化應激損傷
            1.3.1 線粒體氧化應激
            1.3.2 高血糖氧化應激
            1.3.3 氮氧化物氧化應激
            1.3.4 脂質氧化應激
    2 自噬
        2.1 自噬與心血管疾病
            2.1.1 自噬與心肌肥大
            2.1.2 自噬與心律失常
            2.1.3 自噬與心臟缺血再灌注損傷
            2.1.4 自噬與心力衰竭
            2.1.5 自噬與冠狀動脈粥樣硬化
            2.1.6 自噬與心臟衰老
        2.2 自噬與氧化應激反應
        2.3 自噬與細胞焦亡
    3 MicroRNA-103
        3.1 MicroRNA
        3.2 MicroRNA-103
            3.2.1 MicroRNA-103 與心血管疾病相關疾病
            3.2.2 MicroRNA-103 與其他代謝疾病
        3.3 MicroRNA-103 與細胞自噬
        3.4 前景與展望
    4 BNIP3
        4.1 BNIP3 與細胞自噬
        4.2 BNIP3 與細胞焦亡
        4.3 BNIP3 與心血管系統(tǒng)疾病
第二章 實驗研究
    1 氧化應激損傷對HCAECs與細胞自噬的影響
        1.1 實驗儀器
        1.2 實驗試劑
        1.3 實驗方法
            1.3.1 細胞培養(yǎng)、傳代、凍存與復蘇
            1.3.2 MTS檢測細胞生存率
            1.3.3 細胞內ROS檢測
            1.3.4 Western blot蛋白定量
        1.4 實驗結果
            1.4.1 氧化應激反應對HCAECs的損傷作用
        1.5 討論
    2 抑制終末期細胞自噬加劇氧化應激反應對HCAECs的損傷作用
        2.1 實驗儀器
        2.2 實驗試劑
        2.3 實驗方法
            2.3.1 細胞自噬抑制劑刺激
            2.3.2 免疫熒光染色
            2.3.3 透射電子顯微鏡
        2.4 實驗結果
            2.4.1 自噬對氧化應激內皮細胞的影響
            2.4.2 終末期自噬對氧化應激內皮細胞的影響
        2.5 討論
    3 MicroRNA-103 對自噬的調控及氧化應激反應中HCAECs的影響
        3.1 實驗儀器
        3.2 實驗試劑
        3.3 實驗方法
            3.3.1 慢病毒轉染
            3.3.2 細胞總RNA提取
            3.3.3 miRNA逆轉錄
            3.3.4 實時定量PCR
        3.4 實驗結果
            3.4.1 檢測mi R-103 在氧化應激反應中的表達
            3.4.2 高表達miR-103 在內皮氧化應激中的作用
            3.4.3 低表達miR-103 在內皮氧化應激中的作用
        3.5 討論
    4 MicroRNA-103 下游基因BNIP3 在內皮氧化應激損傷模型中作用
        4.1 實驗儀器
        4.2 實驗試劑
        4.3 實驗方法
            4.3.1 siBNIP3 瞬時轉染
        4.4 實驗結果
            4.4.1 氧化應激與細胞自噬對BNIP3 表達水平的影響
            4.4.2 Micro RNA-103對BNIP3 的調控作用
            4.4.3 siBNIP3 在內皮細胞氧化應激模型中發(fā)揮的作用
        4.5 討論
第三章 結論
創(chuàng)新點及研究意義
參考文獻
作者簡介及在學期間所取得的科研成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Expression of miR-15/107 Family MicroRNAs in Human Tissues and Cultured Rat Brain Cells[J]. Wang-Xia Wang,Robert J.Danaher,Craig S.Miller,Joseph R.Berger,Vega G.Nubia,Bernard S.Wilfred,Janna H.Neltner,Christopher M.Norris,Peter T.Nelson.  Genomics,Proteomics ＆ Bioinformatics. 2014(01)



本文編號：3681236