肺動(dòng)脈高壓是一種慢性進(jìn)行性心血管疾病,通常以肺動(dòng)脈壓力升高、肺血管阻力增加（mPAP≥25mmHg、PAWP≤15mmHg、PVR>3WU）為主要特征,患者通常會(huì)因誘發(fā)右心衰竭而導(dǎo)致死亡。由于該病發(fā)病隱匿、發(fā)病初期無(wú)特異性癥狀,通常患者在被確診時(shí)病情已經(jīng)非常嚴(yán)重。其發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜,目前認(rèn)為主要的病理學(xué)改變有肺血管重構(gòu),肺中小動(dòng)脈壁中層平滑肌細(xì)胞增殖加快、內(nèi)層內(nèi)皮細(xì)胞出現(xiàn)功能損傷、新生內(nèi)膜形成、內(nèi)膜纖維化、叢狀病變等。遺傳性肺動(dòng)脈高壓屬于肺動(dòng)脈高壓第一分類。目前發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致肺動(dòng)脈高壓的突變基因有BMPRⅡ、SMAD9、CAV1、KCNK3,其中BMPRⅡ突變所占比例最高,有70%～80%的家族性肺動(dòng)脈高壓均有BMPRⅡ突變。即使在特發(fā)性肺動(dòng)脈高壓患者中也有20%～40%的患者有BMPRⅡ突變。部分沒(méi)有BMPRⅡ突變的病情嚴(yán)重的肺動(dòng)脈高壓患者也被發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)BMPRⅡ表達(dá)量下降的情況。相比沒(méi)有BMPRⅡ突變的患者,BMPRⅡ突變患者具有發(fā)病時(shí)間更早,病情更嚴(yán)重的特點(diǎn)。盡管近十年我國(guó)已引入一系列藥物用于肺動(dòng)脈高壓的治療,患者5年生存率有所提高,但是遠(yuǎn)期生存率仍然很低,而且目前臨床應(yīng)用的治療藥... 

【文章頁(yè)數(shù)】：120 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中英文縮略詞表
中文摘要
Abstract
前言
    1.1. 選題的目的和意義
    1.2. BMPRⅡ信號(hào)通路與肺動(dòng)脈高壓的關(guān)系
    1.3. 血管內(nèi)皮細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞的功能
    1.4. 目前的肺動(dòng)脈高壓的藥物治療
    1.5. 藥物篩選方法
        1.5.1. 傳統(tǒng)藥物篩選方法
        1.5.2. 高通量藥物篩選
        1.5.3. 基于基因表達(dá)譜的篩選方法
        1.5.4. HTS~2高通量篩選方法
第一章 建立遺傳性肺動(dòng)脈高壓細(xì)胞模型
    1.1. 材料
        1.1.1. 主要試劑和耗材
        1.1.2. 主要儀器設(shè)備
        1.1.3. 細(xì)胞來(lái)源
        1.1.4. 載體信息
    1.2. 方法
        1.2.1. 細(xì)胞培養(yǎng)
        1.2.2. 感受態(tài)細(xì)胞制備和轉(zhuǎn)化
        1.2.3. 搖菌和菌液保存
        1.2.4. 質(zhì)粒提取
        1.2.5. 慢病毒包裝
        1.2.6. 嘌呤霉素最佳殺滅濃度測(cè)定
        1.2.7. 慢病毒感染原代細(xì)胞
        1.2.8. Trizol法提取細(xì)胞RNA
        1.2.9. RT-qPCR
        1.2.10. 免疫印跡
        1.2.11. MTS檢測(cè)細(xì)胞增殖能力
        1.2.12. RNA-seq建庫(kù)
        1.2.13. Qubit檢測(cè)測(cè)序樣本濃度
        1.2.14. 測(cè)序數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析
    1.3. 結(jié)果
        1.3.1. 慢病毒感染的人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞BMPRⅡ表達(dá)變化
        1.3.2. BMPRⅡ敲低對(duì)人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖能力的影響
        1.3.3. BMPRⅡ敲低的人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組水平的變化
        1.3.4. 慢病毒感染的人肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞BMPRⅡ表達(dá)變化
        1.3.5. BMPRⅡ敲低的人肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)觀察
        1.3.6. BMPRⅡ敲低的人肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞αSMA表達(dá)量變化
        1.3.7. BMPRⅡ敲低的人肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組水平的改變
    1.4. 本章討論
    1.5. 本章小結(jié)
第二章 建立遺傳性肺動(dòng)脈高壓藥物篩選體系
    2.1. 材料
        2.1.1. 主要試劑和耗材
        2.1.2. 主要儀器設(shè)備
        2.1.3. 實(shí)驗(yàn)溶液配制
        2.1.4. 篩選細(xì)胞來(lái)源
    2.2. 方法
        2.2.1. 探針磷酸化和回收
        2.2.2. 篩選細(xì)胞處理
        2.2.3. 藥物處理方式
        2.2.4. RASL-seq建庫(kù)
        2.2.5. 瓊脂糖凝膠電泳
        2.2.6. 瓊脂糖凝膠回收
        2.2.7. Qubit檢測(cè)測(cè)序樣本濃度
        2.2.8. 測(cè)序數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析
    2.3. 結(jié)果
        2.3.1. 基因表達(dá)譜的確定
        2.3.2. 樣本重復(fù)性檢測(cè)
        2.3.3. 化合物篩選結(jié)果分析
        2.3.4. 6H05對(duì)BMPRⅡ敲低的人肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞的作用
    2.4. 本章討論
    2.5. 本章小結(jié)
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]第六屆世界肺高血壓會(huì)議:聚焦肺高血壓定義與診斷分類更新[J]. 徐希奇,荊志成.  協(xié)和醫(yī)學(xué)雜志. 2018(03)



本文編號(hào)：3659716