宮頸癌是女性常見惡性腫瘤,放療是其主要治療手段之一,臨床上約有80%子宮頸癌患者曾接受放療,而其中30%～50%的晚期患者出現(xiàn)了放療抵抗。因此,提高放射敏感性對晚期宮頸癌患者十分重要。靶向放射增敏劑將極大地提高腫瘤對放療的敏感性,是改善放療療效的有效途徑。但目前尚無理想的靶向放射增敏劑應(yīng)用于臨床。納米科技的發(fā)展為研發(fā)新的靶向放射增敏劑提供了大量的理論依據(jù)及技術(shù)支持。金納米顆粒（Gold nanoparticles,AuNPs or GNPs）具有獨特理化性能、強光電吸收、表面等離子共振等效應(yīng),易制備且粒徑與形態(tài)可控,與腫瘤組織具有高滲透性和滯留效應(yīng),同時易于修飾、生物相容性好等優(yōu)點,是一種比較理想的放射增敏劑。本項目擬用體內(nèi)噬菌體展示技術(shù)篩選的宮頸癌特異性結(jié)合肽（cervical cancer specific binding peptides,CSPs）修飾 AuNPs,以實現(xiàn)其對宮頸癌的主動靶向目的,增強其腫瘤放射增敏療效,降低毒副作用,為宮頸癌的靶向放射增敏治療提供嶄新思路和有益探索。本實驗分三部分研發(fā)這種新型宮頸癌靶向放射增敏劑,并探討其對宮頸癌細胞的靶向性及體外放射增敏作用。... 

【文章頁數(shù)】：175 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
主要縮略詞中英文索引
前言
第一部分 宮頸癌特異性結(jié)合肽的篩選
    第1章 緒論
    第2章 材料與方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 主要試劑及耗材
            2.1.2 主要儀器
            2.1.3 腫瘤細胞株
            2.1.4 菌株
            2.1.5 噬菌體展示肽庫試劑盒
            2.1.6 實驗動物
            2.1.7 組織芯片
            2.1.8 主要試劑的配制
        2.2 實驗方法
            2.2.1 細胞培養(yǎng)
            2.2.2 細胞的凍存與復蘇
            2.2.3 荷瘤裸鼠動物模型的建立
            2.2.4 ER2738菌的活化及培養(yǎng)
            2.2.5 ER2738菌生長曲線繪制
            2.2.6 噬菌體滴度測定
            2.2.7 噬菌體展示肽庫荷瘤裸鼠體內(nèi)篩選
            2.2.8 免疫組化對噬菌體富集效果的分析
            2.2.9 陽性噬菌體的單克隆化
            2.2.10 噬菌斑的擴增及純化(用于ELISA鑒定與DNA測序)
            2.2.11 細胞ELISA檢測噬菌體單克隆對人宮頸癌細胞的親和性
            2.2.12 噬菌體DNA提取
            2.2.13 噬菌體DNA測序及結(jié)果分析
            2.2.14 體內(nèi)回輸驗證CSPs噬菌體對宮頸癌移植瘤的特異靶向能力
            2.2.15 細胞免疫熒光檢測CSPs對宮頸癌細胞的體外靶向能力
            2.2.16 組織免疫熒光檢測CSPs對人宮頸癌組織的體外靶向能力
            2.2.17 特異性結(jié)合肽的基本理化性質(zhì)及同源性分析
            2.2.18 統(tǒng)計學分析
    第3章 結(jié)果
        3.1 人宮頸癌細胞裸鼠移植瘤模型的建立及觀察
        3.2 宿主菌E.coli ER2738的生長曲線繪制
        3.3 噬菌體展示環(huán)七肽庫和十二肽庫原庫滴度測定結(jié)果
        3.4 靶向?qū)m頸癌移植瘤的噬菌體體內(nèi)篩選
            3.4.1 腫瘤組織中回收的噬菌體滴度測定及數(shù)據(jù)分析
            3.4.2 免疫組化實驗對噬菌體在腫瘤組織中富集效果分析
        3.5 ELISA鑒定篩選所得噬菌體單克隆對宮頸癌細胞的親和力
        3.6 噬菌體單克隆DNA測序及結(jié)果分析
        3.7 體內(nèi)回輸驗證CSPs噬菌體對宮頸癌的特異靶向能力
        3.8 特異性結(jié)合短肽基本理化性質(zhì)及同源性分析
            3.8.1 CSP-KQ
            3.8.2 CSP-SI
            3.8.3 CSP-GD
            3.8.4 CSP-FT
            3.8.5 CSP-TL
        3.9 CSPs對人宮頸癌細胞的體外靶向能力
        3.10 CSPs對人宮頸癌組織的特異性結(jié)合能力
    第4章 討論
    第5章 結(jié)論
第二部分 金納米顆粒靶向載體體系A(chǔ)uNPs-PEG-(CSP-GD)的制備及表征
    第1章 緒論
    第2章 材料與方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
            2.1.3 主要試劑的配制
        2.2 實驗方法
            2.2.1 CSP多肽修飾金納米顆粒的制備
            2.2.2 AuNPs-PEG-(CSP-GD)納米顆粒制備的處方工藝優(yōu)化
            2 2.3 AuNPs-PEG-(CSP-GD)的表征及檢測
    第3章 結(jié)果
        3.1 AuNPs-PEG-(CSP-GD)納米顆粒制備的處方工藝優(yōu)化
            3.1.1 AuNPs-PEG與CSP-GD反應(yīng)質(zhì)量比的優(yōu)化
            3.1.2 AuNPs-PEG與CSP-GD反應(yīng)時長的優(yōu)化
            3.1.3 AuNPs-PEG與CSP-GD反應(yīng)溫度的優(yōu)化
            3.1.4 AuNPs-PEG與CSP-GD反應(yīng)體系pH值的優(yōu)化
        3.2 透射電子顯微鏡表征
        3.3 馬爾文激光粒度儀表征
        3.4 X射線光電子能譜表征
        3.5 紫外可見吸收光譜表征
        3.6 熒光分光光度法檢測
        3.7 AuNPs-PEG-(CSP-GD)表面偶聯(lián)的CSP-GD濃度測定
        3.8 AuNPs-PEG-(CSP-GD)溶液的金質(zhì)量濃度測定
        3.9 AuNPs-PEG-(CSP-GD)體外穩(wěn)定性檢測
    第4章 討論
    第5章 結(jié)論
第三部分 AuNPs-PEG-(CSP-GD)的靶向性及體外放射增敏研究
    第1章 緒論
    第2章 材料與方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
            2.1.3 腫瘤細胞株
            2.1.4 實驗動物
            2.1.5 主要試劑的配制
        2.2 實驗方法
            2.2.1 金納米顆粒的制備
            2.2.2 細胞培養(yǎng)、凍存與復蘇
            2.2.3 荷瘤裸鼠動物模型的建立
            2.2.4 香豆素-6標記的金納米顆粒制備
            2.2.5 Cy5.5熒光標記的金納米顆粒制備
            2.2.6 CCK-8實驗
            2.2.7 細胞免疫熒光檢測宮頸癌細胞靶向內(nèi)吞金納米顆粒能力
            2.2.8 流式細胞儀檢測AuNPs-PEG-(CSP-GD)對宮頸癌細胞的體外靶向性
            2.2.9 小動物活體成像觀察AuNPs-PEG-(CSP-GD)對宮頸癌組織的體內(nèi)靶向性
            2.2.10 細胞克隆形成實驗
            2.2.11 流式細胞儀檢測細胞凋亡
            2.2.12 統(tǒng)計學分析
    第3章 結(jié)果
        3.1 AuNPs-PEG-(CSP-GD)對宮頸癌細胞的體外靶向性
            3.1.1 細胞免疫熒光檢測
            3.1.2 流式細胞儀檢測
        3.2 AuNPs-PEG-(CSP-GD)對宮頸癌組織的體內(nèi)靶向性
        3.3 CSP-GD對宮頸癌SiHa、C-33A細胞的生長抑制作用
        3.4 金納米顆粒對宮頸癌SiHa、C-33A細胞的毒性研究
        3.5 AuNPs-PEG-(CSP-GD)對宮頸癌細胞放射增敏的體外研究
            3.5.1 細胞克隆形成實驗分析細胞增殖活性
            3.5.2 流式細胞儀檢測細胞凋亡
    第4章 討論
    第5章 結(jié)論
全文結(jié)論
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀博士期間取得的科研成果
基金資助
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]聚乙二醇和核酸適配體AS1411修飾的金納米粒子對人宮頸癌HeLa細胞放射敏感性的影響[J]. 馬洪鴿,林溫文,史盼影,張保國.  中華放射醫(yī)學與防護雜志. 2015 (11)
[2]納米金對SPC-A1肺癌細胞體外放射增敏作用的研究[J]. 徐國平,姚志峰,楊航,劉永彪.  臨床腫瘤學雜志. 2015(06)
[3]胃癌SGC7901細胞特異性結(jié)合肽的篩選及鑒定[J]. 郭彩霞,梁曉秋,何曉娟.  實用癌癥雜志. 2012(04)
[4]腫瘤放療增敏研究進展[J]. 董濟民,馮關(guān)力.  陜西醫(yī)學雜志. 2011(04)
[5]腫瘤放射治療學新進展與發(fā)展設(shè)想[J]. 石梅.  解放軍醫(yī)學雜志. 2010(05)
[6]復發(fā)宮頸癌發(fā)病因素及其不同治療方式對預后的影響[J]. 王忠民,姜繼勇,喬新民.  中國實用婦科與產(chǎn)科雜志. 2010(03)

博士論文
[1]肝癌靶向多肽的篩選及X1/MePEG-PLA-CS納米粒的靶向性研究[D]. 楊璞.中南大學 2010



本文編號：3655865