宮頸癌是女性常見(jiàn)惡性腫瘤,放療是其主要治療手段之一,臨床上約有80%子宮頸癌患者曾接受放療,而其中30%～50%的晚期患者出現(xiàn)了放療抵抗。因此,提高放射敏感性對(duì)晚期宮頸癌患者十分重要。靶向放射增敏劑將極大地提高腫瘤對(duì)放療的敏感性,是改善放療療效的有效途徑。但目前尚無(wú)理想的靶向放射增敏劑應(yīng)用于臨床。納米科技的發(fā)展為研發(fā)新的靶向放射增敏劑提供了大量的理論依據(jù)及技術(shù)支持。金納米顆粒（Gold nanoparticles,AuNPs or GNPs）具有獨(dú)特理化性能、強(qiáng)光電吸收、表面等離子共振等效應(yīng),易制備且粒徑與形態(tài)可控,與腫瘤組織具有高滲透性和滯留效應(yīng),同時(shí)易于修飾、生物相容性好等優(yōu)點(diǎn),是一種比較理想的放射增敏劑。本項(xiàng)目擬用體內(nèi)噬菌體展示技術(shù)篩選的宮頸癌特異性結(jié)合肽（cervical cancer specific binding peptides,CSPs）修飾 AuNPs,以實(shí)現(xiàn)其對(duì)宮頸癌的主動(dòng)靶向目的,增強(qiáng)其腫瘤放射增敏療效,降低毒副作用,為宮頸癌的靶向放射增敏治療提供嶄新思路和有益探索。本實(shí)驗(yàn)分三部分研發(fā)這種新型宮頸癌靶向放射增敏劑,并探討其對(duì)宮頸癌細(xì)胞的靶向性及體外放射增敏作用。... 

【文章頁(yè)數(shù)】：175 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
主要縮略詞中英文索引
前言
第一部分 宮頸癌特異性結(jié)合肽的篩選
    第1章 緒論
    第2章 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 主要試劑及耗材
            2.1.2 主要儀器
            2.1.3 腫瘤細(xì)胞株
            2.1.4 菌株
            2.1.5 噬菌體展示肽庫(kù)試劑盒
            2.1.6 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            2.1.7 組織芯片
            2.1.8 主要試劑的配制
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.2 細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇
            2.2.3 荷瘤裸鼠動(dòng)物模型的建立
            2.2.4 ER2738菌的活化及培養(yǎng)
            2.2.5 ER2738菌生長(zhǎng)曲線繪制
            2.2.6 噬菌體滴度測(cè)定
            2.2.7 噬菌體展示肽庫(kù)荷瘤裸鼠體內(nèi)篩選
            2.2.8 免疫組化對(duì)噬菌體富集效果的分析
            2.2.9 陽(yáng)性噬菌體的單克隆化
            2.2.10 噬菌斑的擴(kuò)增及純化(用于ELISA鑒定與DNA測(cè)序)
            2.2.11 細(xì)胞ELISA檢測(cè)噬菌體單克隆對(duì)人宮頸癌細(xì)胞的親和性
            2.2.12 噬菌體DNA提取
            2.2.13 噬菌體DNA測(cè)序及結(jié)果分析
            2.2.14 體內(nèi)回輸驗(yàn)證CSPs噬菌體對(duì)宮頸癌移植瘤的特異靶向能力
            2.2.15 細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)CSPs對(duì)宮頸癌細(xì)胞的體外靶向能力
            2.2.16 組織免疫熒光檢測(cè)CSPs對(duì)人宮頸癌組織的體外靶向能力
            2.2.17 特異性結(jié)合肽的基本理化性質(zhì)及同源性分析
            2.2.18 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    第3章 結(jié)果
        3.1 人宮頸癌細(xì)胞裸鼠移植瘤模型的建立及觀察
        3.2 宿主菌E.coli ER2738的生長(zhǎng)曲線繪制
        3.3 噬菌體展示環(huán)七肽庫(kù)和十二肽庫(kù)原庫(kù)滴度測(cè)定結(jié)果
        3.4 靶向?qū)m頸癌移植瘤的噬菌體體內(nèi)篩選
            3.4.1 腫瘤組織中回收的噬菌體滴度測(cè)定及數(shù)據(jù)分析
            3.4.2 免疫組化實(shí)驗(yàn)對(duì)噬菌體在腫瘤組織中富集效果分析
        3.5 ELISA鑒定篩選所得噬菌體單克隆對(duì)宮頸癌細(xì)胞的親和力
        3.6 噬菌體單克隆DNA測(cè)序及結(jié)果分析
        3.7 體內(nèi)回輸驗(yàn)證CSPs噬菌體對(duì)宮頸癌的特異靶向能力
        3.8 特異性結(jié)合短肽基本理化性質(zhì)及同源性分析
            3.8.1 CSP-KQ
            3.8.2 CSP-SI
            3.8.3 CSP-GD
            3.8.4 CSP-FT
            3.8.5 CSP-TL
        3.9 CSPs對(duì)人宮頸癌細(xì)胞的體外靶向能力
        3.10 CSPs對(duì)人宮頸癌組織的特異性結(jié)合能力
    第4章 討論
    第5章 結(jié)論
第二部分 金納米顆粒靶向載體體系A(chǔ)uNPs-PEG-(CSP-GD)的制備及表征
    第1章 緒論
    第2章 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
            2.1.3 主要試劑的配制
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 CSP多肽修飾金納米顆粒的制備
            2.2.2 AuNPs-PEG-(CSP-GD)納米顆粒制備的處方工藝優(yōu)化
            2 2.3 AuNPs-PEG-(CSP-GD)的表征及檢測(cè)
    第3章 結(jié)果
        3.1 AuNPs-PEG-(CSP-GD)納米顆粒制備的處方工藝優(yōu)化
            3.1.1 AuNPs-PEG與CSP-GD反應(yīng)質(zhì)量比的優(yōu)化
            3.1.2 AuNPs-PEG與CSP-GD反應(yīng)時(shí)長(zhǎng)的優(yōu)化
            3.1.3 AuNPs-PEG與CSP-GD反應(yīng)溫度的優(yōu)化
            3.1.4 AuNPs-PEG與CSP-GD反應(yīng)體系pH值的優(yōu)化
        3.2 透射電子顯微鏡表征
        3.3 馬爾文激光粒度儀表征
        3.4 X射線光電子能譜表征
        3.5 紫外可見(jiàn)吸收光譜表征
        3.6 熒光分光光度法檢測(cè)
        3.7 AuNPs-PEG-(CSP-GD)表面偶聯(lián)的CSP-GD濃度測(cè)定
        3.8 AuNPs-PEG-(CSP-GD)溶液的金質(zhì)量濃度測(cè)定
        3.9 AuNPs-PEG-(CSP-GD)體外穩(wěn)定性檢測(cè)
    第4章 討論
    第5章 結(jié)論
第三部分 AuNPs-PEG-(CSP-GD)的靶向性及體外放射增敏研究
    第1章 緒論
    第2章 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
            2.1.3 腫瘤細(xì)胞株
            2.1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            2.1.5 主要試劑的配制
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 金納米顆粒的制備
            2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)、凍存與復(fù)蘇
            2.2.3 荷瘤裸鼠動(dòng)物模型的建立
            2.2.4 香豆素-6標(biāo)記的金納米顆粒制備
            2.2.5 Cy5.5熒光標(biāo)記的金納米顆粒制備
            2.2.6 CCK-8實(shí)驗(yàn)
            2.2.7 細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)宮頸癌細(xì)胞靶向內(nèi)吞金納米顆粒能力
            2.2.8 流式細(xì)胞儀檢測(cè)AuNPs-PEG-(CSP-GD)對(duì)宮頸癌細(xì)胞的體外靶向性
            2.2.9 小動(dòng)物活體成像觀察AuNPs-PEG-(CSP-GD)對(duì)宮頸癌組織的體內(nèi)靶向性
            2.2.10 細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)
            2.2.11 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡
            2.2.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    第3章 結(jié)果
        3.1 AuNPs-PEG-(CSP-GD)對(duì)宮頸癌細(xì)胞的體外靶向性
            3.1.1 細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)
            3.1.2 流式細(xì)胞儀檢測(cè)
        3.2 AuNPs-PEG-(CSP-GD)對(duì)宮頸癌組織的體內(nèi)靶向性
        3.3 CSP-GD對(duì)宮頸癌SiHa、C-33A細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用
        3.4 金納米顆粒對(duì)宮頸癌SiHa、C-33A細(xì)胞的毒性研究
        3.5 AuNPs-PEG-(CSP-GD)對(duì)宮頸癌細(xì)胞放射增敏的體外研究
            3.5.1 細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)分析細(xì)胞增殖活性
            3.5.2 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡
    第4章 討論
    第5章 結(jié)論
全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀博士期間取得的科研成果
基金資助
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]聚乙二醇和核酸適配體AS1411修飾的金納米粒子對(duì)人宮頸癌HeLa細(xì)胞放射敏感性的影響[J]. 馬洪鴿,林溫文,史盼影,張保國(guó).  中華放射醫(yī)學(xué)與防護(hù)雜志. 2015 (11)
[2]納米金對(duì)SPC-A1肺癌細(xì)胞體外放射增敏作用的研究[J]. 徐國(guó)平,姚志峰,楊航,劉永彪.  臨床腫瘤學(xué)雜志. 2015(06)
[3]胃癌SGC7901細(xì)胞特異性結(jié)合肽的篩選及鑒定[J]. 郭彩霞,梁曉秋,何曉娟.  實(shí)用癌癥雜志. 2012(04)
[4]腫瘤放療增敏研究進(jìn)展[J]. 董濟(jì)民,馮關(guān)力.  陜西醫(yī)學(xué)雜志. 2011(04)
[5]腫瘤放射治療學(xué)新進(jìn)展與發(fā)展設(shè)想[J]. 石梅.  解放軍醫(yī)學(xué)雜志. 2010(05)
[6]復(fù)發(fā)宮頸癌發(fā)病因素及其不同治療方式對(duì)預(yù)后的影響[J]. 王忠民,姜繼勇,喬新民.  中國(guó)實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志. 2010(03)

博士論文
[1]肝癌靶向多肽的篩選及X1/MePEG-PLA-CS納米粒的靶向性研究[D]. 楊璞.中南大學(xué) 2010



本文編號(hào)：3655865