目的本研究探討β-arrestin1通過GSK-3β/β-catenin信號(hào)通路調(diào)控大腸癌上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化及侵襲轉(zhuǎn)移的作用,并深入研究丹參酮ⅡA抑制大腸癌EMT及轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制,為丹參酮ⅡA抗大腸癌轉(zhuǎn)移的靶向治療提供理論依據(jù)。方法（1）利用GSE41258數(shù)據(jù)庫(kù)分析大腸癌患者原發(fā)灶及肝肺轉(zhuǎn)移灶中β-arrestin1的表達(dá)和大腸癌預(yù)后之間的關(guān)系。（2）利用生物信息學(xué)分析β-arrestin1的作用靶點(diǎn)和作用途徑,構(gòu)建“β-arrestin1-作用靶點(diǎn)”的生物網(wǎng)絡(luò)。（3）通過免疫組化分析β-arrestin1蛋白在大腸癌原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)情況,探討β-arrestin1表達(dá)與大腸癌臨床病理特征之間的相關(guān)性。（4）構(gòu)建β-arrestin1基因干擾和過表達(dá)的重組慢病毒載體,感染并篩選獲得β-arrestin1基因穩(wěn)定干擾和過表達(dá)的大腸癌細(xì)胞株。（5）采用Transwell、細(xì)胞劃痕、Western blot和免疫熒光等方法,研究β-arrestin1對(duì)大腸癌細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化及侵襲轉(zhuǎn)移的影響;包括Western blot檢測(cè)β-arrestin1對(duì)Wnt/β-catenin信號(hào)通路及下游... 

【文章頁(yè)數(shù)】：135 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
英文縮略詞
中文摘要
Abstract
引言
第一部分 人大腸癌組織標(biāo)本中β-arrestin1 的差異性表達(dá)及臨床意義
    1 材料與方法
        1.1 β-arrestin1 生物信息學(xué)分析
        1.2 臨床大腸癌手術(shù)標(biāo)本的生物信息學(xué)分析
        1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    2.結(jié)果
        2.1 β-arrestin1 生物學(xué)信息分析
        2.2 β-arrestin1 對(duì)患者生存期的影響
        2.3 β-arrestin1 作用靶點(diǎn)分析
        2.4 β-arrestin1 在大腸癌組織中的表達(dá)分析
    3.分析與討論
第二部分 β-arrestin1 對(duì)大腸癌細(xì)胞EMT及侵襲轉(zhuǎn)移的影響
    1.材料
        1.1 細(xì)胞株
        1.2 試劑
        1.3 儀器設(shè)備
        1.4 主要實(shí)驗(yàn)試劑的配制
    2.方法
        2.1 人大腸癌細(xì)胞株 HCT-8、Caco-2、HT-29、SW620、RKO、HCT-116及 Lo Vo 的培養(yǎng)
        2.2 慢病毒感染及篩選
        2.3 RT-PCR 檢測(cè) HCT-8、Caco-2、HT-29、SW620、RKO、HCT-116及 Lo Vo 細(xì)胞中β-arrestin1 m RNA 的表達(dá)
        2.4 Western blot 檢測(cè)人腸癌細(xì)胞 HCT-8、Caco-2、HT-29、SW620、RKO、HCT-116 及 Lo Vo 中β-arrestin1 蛋白的表達(dá)
        2.5 RT-PCR 檢測(cè)干擾及過表達(dá) HCT-116 及 Lo Vo 細(xì)胞中β-arrestin1mRNA 的表達(dá)
        2.6 Western blot 檢測(cè)干擾及過表達(dá) HCT-116 及 Lo Vo 細(xì)胞中β-arrestin1蛋白的表達(dá)
        2.7 免疫熒光檢測(cè)干擾及過表達(dá) HCT-116 及 Lo Vo 細(xì)胞中β-arrestin1 蛋白的表達(dá)和定位
        2.8 Western blot檢測(cè)中β-arrestin1對(duì)人大腸癌細(xì)胞中E-cadherin、N-cadherin、Snai及 Vimentin蛋白表達(dá)的影響
        2.9 免疫熒光檢測(cè)β-arrestin1 對(duì)人大腸癌細(xì)胞中E-cadherin和Vimentin表達(dá)和定位的影響
        2.10 Transwell 檢測(cè)β-arrestin1 對(duì)人大腸癌 HCT-116 和 Lo Vo 細(xì)胞遷移能力的影響
        2.11 細(xì)胞劃痕檢測(cè)β-arrestin1 對(duì)人大腸癌 HCT-116 和 Lo Vo 細(xì)胞遷移能力的影響
        2.12 Western blot檢測(cè)β-arrestin1 對(duì)人大腸癌細(xì)胞中MMP2、MMP9蛋白表達(dá)的影響
        2.13 β-arrestin1 對(duì)裸鼠大腸癌肺轉(zhuǎn)移及EMT的影響
        2.14 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    3.結(jié)果
        3.1 人大腸癌 HCT-8、Caco-2、HT-29、SW620、RKO、HCT-116 及Lo Vo 細(xì)胞中β-arrestin1 mRNA 的表達(dá)
        3.2 人大腸癌 HCT-8、Caco-2、HT-29、SW620、RKO、HCT-116 及Lo Vo 細(xì)胞中β-arrestin1 蛋白的表達(dá)水平
        3.3 干擾和過表達(dá)β-arrestin1 對(duì) HCT-116 及 Lo Vo 細(xì)胞中β-arrestin1mRNA 表達(dá)的影響
        3.4 干擾和過表達(dá)β-arrestin1 對(duì) HCT-116 及 Lo Vo 細(xì)胞中β-arrestin1 蛋白表達(dá)的影響
        3.5 干擾和過表達(dá)各組中β-arrestin1 蛋白的表達(dá)和定位
        3.6 β-arrestin1 對(duì)人大腸癌 HCT-116 及 Lo Vo 細(xì)胞 EMT 關(guān)鍵基因表達(dá)的影響
        3.7 β-arrestin1 對(duì)人大腸癌 HCT-116 及 Lo Vo 細(xì)胞中 E-cadherin 及Vimentin 表達(dá)和定位的影響
        3.8 β-arrestin1 對(duì)人大腸癌 HCT-116 及 Lo Vo 細(xì)胞遷移能力的影響
        3.9 β-arrestin1 對(duì)人大腸癌 HCT-116 及 Lo Vo 細(xì)胞遷移能力的影響
        3.10 β-arrestin1 對(duì)人大腸癌細(xì)胞中MMP2及MMP9 蛋白表達(dá)的影響
        3.11 β-arrestin1 對(duì)裸鼠大腸癌肺轉(zhuǎn)移及EMT的影響
    4 分析與討論
第三部分 β-arrestin1 通過GSK-3β/β-catenin信號(hào)通路調(diào)控大腸癌EMT的機(jī)制
    1.材料
        1.1 藥物與試劑
        1.2 主要儀器設(shè)備
        1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑的配制
    2 方法
        2.1 Western blot檢測(cè)β-arrestin1對(duì)GSK-3β/β-catenin信號(hào)通路及下游蛋白表達(dá)的影響
        2.2 Western blot檢測(cè)β-arrestin1 對(duì)胞內(nèi)、胞漿及胞核β-catenin蛋白表達(dá)的影響
        2.3 免疫熒光檢測(cè)β-arrestin1 對(duì)癌細(xì)胞β-catenin 表達(dá)和定位的影響
        2.4 Western blot檢測(cè)ICG001對(duì)GSK-3β/β-catenin信號(hào)通路及下游蛋白表達(dá)的影響
        2.5 Western blot檢測(cè)ICG001對(duì)E-cadherin、N-cadherin、Snai及Vimentin蛋白表達(dá)的影響
        2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    3 結(jié)果
        3.1 β-arrestin1對(duì)GSK-3β/β-catenin信號(hào)通路及下游蛋白表達(dá)的影響
        3.2 β-arrestin1 對(duì)胞內(nèi)、胞漿及胞核β-catenin 蛋白表達(dá)的影響
        3.3 β-arrestin1 對(duì)大腸癌細(xì)胞中β-catenin 表達(dá)和定位的影響
        3.4 ICG001 對(duì) GSK-3β/β-catenin 信號(hào)通路及下游蛋白表達(dá)的影響
        3.5 ICG001對(duì)E-cadherin、N-cadherin、Snai及 Vimentin蛋白表達(dá)的影響
    4 分析與討論
第四部分 丹參酮ⅡA通過β-arrestin1介導(dǎo)的GSK-3β/β-catenin通路調(diào)控大腸癌EMT和侵襲轉(zhuǎn)移
    1.材料
        1.1 藥物與試劑
        1.2 主要儀器設(shè)備
        1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑的配制
    2 方法
        2.1 CCK-8 檢測(cè)Tan IIA對(duì) HCT-116及Lo Vo細(xì)胞增殖的影響
        2.2 Transwell檢測(cè)丹參酮ⅡA對(duì)人大腸癌細(xì)胞的遷移能力
        2.3 細(xì)胞劃痕檢測(cè)丹參酮ⅡA對(duì)人大腸癌細(xì)胞的遷移能力
        2.4 Wertern blot 檢測(cè)丹參酮 IIA 對(duì) EMT 關(guān)鍵基因表達(dá)的影響
        2.5 Wertern blot 檢測(cè)丹參酮 IIA 對(duì) MMP2 和 MMP9 表達(dá)的影響
        2.6 Wertern blot檢測(cè)丹參酮IIA對(duì)對(duì)β-arrestin1/β-catenin信號(hào)通路的影響
        2.7 丹參酮IIA對(duì)裸鼠大腸癌肺轉(zhuǎn)移的作用
        2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    3 結(jié)果
        3.1 丹參酮ⅡA 對(duì)人大腸癌 HCT-116 和 Lo Vo 細(xì)胞增殖抑制作用
        3.2 丹參酮ⅡA 對(duì)人大腸癌 HCT-116 和 Lo Vo 細(xì)胞遷移能力的影響
        3.3 丹參酮ⅡA 對(duì)人大腸癌 HCT-116 和 Lo Vo 細(xì)胞遷移能力的影響
        3.4 丹參酮IIA對(duì) EMT關(guān)鍵基因表達(dá)的影響
        3.5 丹參酮IIA對(duì) MMP2、MMP9 蛋白表達(dá)的影響
        3.6 丹參酮IIA對(duì)β-arrestin1/β-catenin信號(hào)通路的影響
        3.7 丹參酮IIA對(duì)裸鼠大腸癌肺轉(zhuǎn)移的作用
    4 分析與討論
第五部分 創(chuàng)新點(diǎn)
第六部分 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄一 文獻(xiàn)綜述 The role and mechanisms of β-arrestins in cancer invasion and metastasis
    References
附錄二
附錄三
博士在讀期間發(fā)表論文、參與課題等


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化介導(dǎo)腫瘤轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制[J]. 張青云,傅俊江,陳漢春.  生命科學(xué)研究. 2018(06)
[2]MMPs和TIMPs與腫瘤關(guān)系的研究進(jìn)展[J]. 楊錫彤,秦燕,王光明.  廣東醫(yī)學(xué). 2018(16)
[3]大腸癌的中醫(yī)藥研究進(jìn)展[J]. 劉佳麗,楊坤,孫平良.  湖南中醫(yī)雜志. 2018(07)
[4]丹參活性成分及藥理作用研究進(jìn)展[J]. 姜雪,史磊.  藥學(xué)研究. 2017(03)
[5]大腸癌現(xiàn)階段治療進(jìn)展[J]. 朱正杰,李猛,余昌俊,歐陽(yáng)歡,龍滕云.  安徽醫(yī)學(xué). 2015(04)
[6]消化道腫瘤血瘀證研究進(jìn)展[J]. 成匯.  現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué). 2014(05)
[7]惡性腫瘤高凝狀態(tài)——血瘀證——活血化瘀的思考[J]. 錢麗燕,郭勇.  中華中醫(yī)藥學(xué)刊. 2013(04)
[8]丹參酮ⅡA對(duì)COX-2激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路介導(dǎo)的人腸癌細(xì)胞VEGF表達(dá)的調(diào)控作用[J]. 劉宣,王炎,李丹光,周利紅,殷佩浩,隋華,范忠澤,李琦.  中華中醫(yī)藥雜志. 2013(01)
[9]β-arrestin對(duì)惡性腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移過程的影響[J]. 常玓,張晨,趙虹,李慶昌.  醫(yī)學(xué)綜述. 2011(09)
[10]β-arrestin信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在炎癥性腸病發(fā)生過程中的作用機(jī)制[J]. 范恒,廖奕,唐慶,梁麗,陳小艷.  世界華人消化雜志. 2010(29)

碩士論文
[1]血瘀證辯證與大腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)性的臨床研究[D]. 孫筧.浙江中醫(yī)藥大學(xué) 2014



本文編號(hào)：3648566