研究背景:骨關(guān)節(jié)炎（Osteoarthritis,OA）的發(fā)病機制不清,目前無有效的方法延緩或者阻斷OA的進展。軟骨細胞是關(guān)節(jié)軟骨中僅有的細胞種類,在維持軟骨的合成和分解代謝平衡中起重要作用。研究表明,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激（Endoplasmic reticulum stress,ERS）介導的軟骨細胞凋亡在OA的發(fā)病中起重要作用。軟骨細胞凋亡可以導致軟骨細胞外基質(zhì)合成和降解代謝失衡,而這種改變又促進軟骨細胞凋亡的發(fā)生,從而加速OA的病理進程。ERS介導的細胞凋亡主要受PERK-eIF2α-ATF4通路調(diào)節(jié),激活轉(zhuǎn)錄因子4（activating transcription factor 4,ATF4）是其中的關(guān)鍵分子,其高表達可以激活其下游促凋亡相關(guān)基因的表達,從而引起細胞凋亡。然而ATF4在OA中的表達調(diào)控及其促細胞凋亡作用仍不清楚。明確ERS在OA關(guān)節(jié)軟骨退變中的作用及其表達調(diào)控,對于明確OA的發(fā)病機制以及采取有效方法延緩或者阻斷OA關(guān)節(jié)軟骨退變有著積極的意義。目的:探討ATF4介導的軟骨細胞凋亡在OA中的作用;同時研究OA時是否由于軟骨中降低的組蛋白去乙酰化酶4（histone deace... 

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【學位級別】：博士

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前言
第一部分 人OA軟骨HDAC4、ATF4等ERS因子的變化趨勢及軟骨細胞凋亡的實驗研究
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
        1.3 統(tǒng)計學分析
    2 結(jié)果
        2.1 人相對正常和OA關(guān)節(jié)軟骨的病理學特征
        2.2 人OA軟骨組織軟骨細胞凋亡率高于相對正常軟骨
        2.3 OA軟骨樣本中ATF4的表達增高,而HDAC4的表達降低
        2.4 OA關(guān)節(jié)軟骨中CHOP、GRP78、Caspase12表達較正常軟骨升高
    3 討論
    4 結(jié)論
第二部分 HDAC4通過抑制ERS減少軟骨細胞凋亡的機制研究
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
        1.3 統(tǒng)計學分析
    2 結(jié)果
        2.1 大鼠肋軟骨細胞的特征
        2.2 過氧化氫(H2O2)刺激軟骨細胞可以構(gòu)建體外ERS模型
        2.3 HDAC4質(zhì)粒和HDAC4siRNA可以有效上調(diào)或者下調(diào)HDAC4在軟骨細胞中的表達
        2.4 HDAC4抑制ERS時軟骨細胞ATF4的表達
        2.5 HDAC4降低ERS相關(guān)指標的CHOP、GRP78、Caspase12的表達
        2.6 流式細胞術(shù)結(jié)果表明,在ERS條件下,上調(diào)HDAC4可減少軟骨細胞凋亡,而下調(diào)HDAC4,軟骨細胞的凋亡增加
    3 討論
    4 結(jié)論
第三部分 HDAC4通過抑制ATF4介導的軟骨細胞凋亡延緩大鼠OA關(guān)節(jié)軟骨退變的研究
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
        1.3 統(tǒng)計學分析
    2 結(jié)果
        2.1 腺病毒可有效感染大鼠關(guān)節(jié)軟骨,將HDAC4轉(zhuǎn)入軟骨組織中
        2.2 X線檢查顯示HDAC4可以延緩大鼠OA改變
        2.3 組織學結(jié)果表明,HDAC4可減輕大鼠OA關(guān)節(jié)軟骨退變的嚴重程度
        2.4 免疫組織化學染色表明HDAC4可以抑制關(guān)節(jié)軟骨ERS,同時促進關(guān)節(jié)軟骨合成代謝
        2.5 Real-time qPCR結(jié)果表明HDAC4可以抑制ATF4、CHOP、GRP78、Caspase12 mRNA的表達,同時促進關(guān)節(jié)軟骨合成代謝基因的表達
        2.6 HDAC4可以減少大鼠OA關(guān)節(jié)軟骨細胞的凋亡
    3 討論
    4 結(jié)論
第四部分 HDAC4及其突變體通過抑制軟骨細胞肥大樣改變延緩大鼠OA關(guān)節(jié)軟骨退變的研究
    一 HDAC4通過抑制軟骨細胞肥大樣改變延緩大鼠OA關(guān)節(jié)軟骨退變的研究
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
            1.3 統(tǒng)計學分析
        2 結(jié)果
            2.1 HDAC4抑制IL-1β誘導的大鼠軟骨細胞的分解代謝
            2.2 組織學結(jié)果表明,HDAC4可減輕大鼠OA軟骨退變的嚴重程度
            2.3 HDAC4抑制軟骨細胞肥大樣改變,促進軟骨合成代謝
            2.4 FMT顯示HDAC4降低了大鼠關(guān)節(jié)MMP水平
        3 討論
        4 結(jié)論
    二 HDAC4S246/467/632A mutant延緩大鼠OA關(guān)節(jié)軟骨退變的研究
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
            1.3 統(tǒng)計學分析
        2 結(jié)果
            2.1 腺病毒轉(zhuǎn)入的野生型HDAC4主要位于軟骨細胞質(zhì)中,而突變的HDAC4(m-HDAC4)主要位于細胞核中
            2.2 體外OA模型,m-HDAC4有更強的抑制軟骨細胞肥大因子表達的作用
            2.3 m-HDAC4比野生型HDAC4有更好的延緩OA進展的作用
            2.4 m-HDAC4比野生型HDAC4有更強的抑制軟骨肥大化和促進軟骨合成代謝的作用
        3 討論
        4 結(jié)論
課題結(jié)論
參考文獻
綜述
    參考文獻
附錄
致謝
個人簡介


【參考文獻】：
期刊論文
[1]致炎細胞因子在骨性關(guān)節(jié)炎病理生理中的作用[J]. 張洪亮,王文波,李明宇,李進取,史雪峰.  現(xiàn)代生物醫(yī)學進展. 2014(05)
[2]堿性成纖維細胞生長因子及相關(guān)細胞因子轉(zhuǎn)染對兔骨關(guān)節(jié)炎的作用[J]. 陳彪,陳廖斌,秦俊,Jaques Magdalou,汪暉.  中華實驗外科雜志. 2010 (11)
[3]腺病毒介導的堿性成纖維細胞生長因子對人骨關(guān)節(jié)炎軟骨細胞的作用[J]. 陳彪,秦俊,汪暉,陳廖斌.  武漢大學學報(醫(yī)學版). 2010(04)



本文編號：3647038