第一部分胰腺癌中TFEB與腫瘤生物學(xué)行為關(guān)系的研究背景胰腺癌是一種高致死的疾病,多項(xiàng)研究表明自噬參與了胰腺癌的多種惡性生物學(xué)行為,并與其侵襲轉(zhuǎn)移能力密切相關(guān)。目前TFEB被認(rèn)為是調(diào)控自噬溶酶體通路的關(guān)鍵因子。因此,進(jìn)一步明確TFEB與胰腺癌惡性生物學(xué)行為的關(guān)系有望成為改善胰腺癌治療現(xiàn)狀的關(guān)鍵。方法采用免疫組化、實(shí)時(shí)PCR和蛋白印跡等方式檢測(cè)TFEB在臨床胰腺導(dǎo)管腺癌組織中水平,探究其與胰腺癌病理分級(jí)、臨床分期和預(yù)后的關(guān)系。采用慢病毒技術(shù)干預(yù)胰腺癌細(xì)胞中TFEB的表達(dá),利用體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蜋z測(cè)其與胰腺癌惡性生物學(xué)行為的關(guān)系。結(jié)果通過(guò)免疫組化、實(shí)時(shí)PCR和蛋白印跡實(shí)驗(yàn),我們發(fā)現(xiàn)TFEB在胰腺癌腫瘤組織中表達(dá)水平高于正常胰腺組織。免疫組化中胰腺癌TFEB的表達(dá)情況與胰腺癌的分化程度密切相關(guān),病理分化越差,TFEB反而表達(dá)量高。通過(guò)Kaplan-Meier分析癌組織中TFEB表達(dá)與胰腺癌患者總體存活之間的相關(guān)性,發(fā)現(xiàn)高表達(dá)組TFEB患者預(yù)后更差。利用CCK8、平板克隆和皮下成瘤實(shí)驗(yàn),我們發(fā)現(xiàn)在胰腺癌細(xì)胞中抑制TFEB能抑制胰腺癌細(xì)胞的增殖能力。利用劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell和小鼠脾包膜注射胰腺... 

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【部分圖文】：

TFEB在胰腺癌組織芯片中結(jié)果及其與臨床資料的相關(guān)分析

estern Blot 檢測(cè)胰腺癌細(xì)胞系 MIA PaCa-2 和 PANC-1 中穩(wěn)定轉(zhuǎn)的表達(dá)。IA PaCa-2 和 PANC-1 細(xì)胞中，轉(zhuǎn)染 shCtrl 和 shTFEB 后，我們?cè)诓煌瑫r(shí)間點(diǎn)兩組細(xì)胞活力，發(fā)現(xiàn) MIAPaCa-2-shTFEB 在 72 小68±0.08191) 明 顯 低 于 MIA PaCa-2-shCtrl 在 72 小 時(shí) 的 平091 ； t=3.774, p=0.0092) ，在 96 小時(shí)這 差距進(jìn) 步增 ； PANC-1-shTFEB 在 72 小時(shí)的平均吸光度 (1.278±0.06636hCtrl 在 72 小時(shí)的平均吸光度(1.647±0.04840；t=4.490, p=0.004 差距進(jìn) 步加大(t=6.518, p=0.0006)；表明下調(diào) TFEB 減弱胰-4A)。在 PANC-1 細(xì)胞中，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 shCtrl 和 shTFEB 后，我們驗(yàn)來(lái)檢測(cè)兩組細(xì)胞的增殖能力，發(fā)現(xiàn)下調(diào) TFEB 組和對(duì)照組相比均有減少，統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示 shTFEB 組的克隆形成的平均數(shù)量為(1

27圖 1-4 體外實(shí)驗(yàn)研究 TFEB 對(duì)胰腺癌腫瘤生物學(xué)特性的影響。ACCK8 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)下調(diào)TFEB 后不同時(shí)間點(diǎn)胰腺癌細(xì)胞 MIA PaCa-2 和 PANC-1 的活力。B 平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)下調(diào)TFEB后胰腺癌細(xì)胞PANC-1克隆形成的能力。C Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)下調(diào)TFEB后胰腺癌細(xì)胞 MIA PaCa-2 和 PANC-1 的遷移能力。D 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)下調(diào) TFEB 后胰腺癌細(xì)胞 PANC-1 的爬行遷移能力。1.3.4 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究 TFEB 對(duì)胰腺癌腫瘤生物學(xué)特性的影響利用穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株(PANC-1-shCtrl 和 PANC-1-shTFEB)在 Balb/c 裸鼠體內(nèi)建立裸鼠皮下移植瘤模型。接種腫瘤細(xì)胞以后，繼續(xù)培育裸鼠 個(gè)半月，每星期記錄老鼠體重和瘤體大小。結(jié)果顯示，PANC-1-shTFEB 組中皮下瘤的生長(zhǎng)速度慢于


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