目的:探究鹿筋膠原健骨的生物學(xué)機(jī)制。方法:采用酸酶結(jié)合方法建立鹿筋膠原的提取制備工藝;采用CCK-8方法觀察鹿筋膠原對(duì)成骨細(xì)胞的增殖影響;通過轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)觀察鹿筋膠原對(duì)成骨細(xì)胞的基因表達(dá)變化;在細(xì)胞和分子水平上揭示鹿筋膠原健骨功效的生物學(xué)機(jī)制。通過細(xì)胞增殖法和轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)對(duì)人參和鹿筋的協(xié)同作用進(jìn)行了相關(guān)研究。結(jié)果:1.通過單因素分析及正交試驗(yàn),建立了鹿筋膠原提取制備工藝,具體工藝為應(yīng)用5%醋酸體積溶液浸泡鹿筋顆粒48h,煎煮1.5h后按照酶底比1:1000加入胃蛋白酶,繼續(xù)酶解6h,收率可達(dá)58.56%,純度可達(dá)48.4%;2.采用CCK-8法,闡明了鹿筋膠原在4mg/ml至10mg/ml濃度范圍內(nèi)對(duì)MC-3T3細(xì)胞具有促增殖作用,且呈一定的量效關(guān)系,在濃度為8mg/ml時(shí)促增殖作用最明顯。3.通過RNA-seq測(cè)序技術(shù)和手段,建立了鹿筋膠原的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫,通過生物信息學(xué)分析方法,共鑒定出到852個(gè)差異表達(dá)基因,與空白組比較,鹿筋膠原處理組顯著上調(diào)的差異表達(dá)基因502個(gè),這些基因主要參與調(diào)控成骨的細(xì)胞代謝、增殖調(diào)節(jié);顯著下調(diào)的差異表達(dá)基因350個(gè),這些基因主要參與調(diào)控成骨生物進(jìn)程。... 

【文章來源】：長春中醫(yī)藥大學(xué)吉林省

【文章頁數(shù)】：134 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

不同醋酸體積分?jǐn)?shù)對(duì)鹿筋回收率的影響

不同煎煮時(shí)間對(duì)鹿筋回收率的影響

長春中醫(yī)藥大學(xué)2020屆博士學(xué)位論文36圖1-3不同浸提時(shí)間對(duì)鹿筋回收率的影響注：圖中橫坐標(biāo)為不同浸提時(shí)間，縱坐標(biāo)為DSC的回收率。3.1.4酶種類的確定對(duì)于加入消化酶的種類的判定，我們選取了最常用的兩種消化酶，即胃蛋白酶及胰蛋白酶。實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，加入胰蛋白酶與未加酶的相比較回收率基本一樣，且加入胰蛋白酶會(huì)引入大量的鹽，但加入胃蛋白酶回收率會(huì)顯著增加，因此加入胃蛋白酶效果更佳。結(jié)果如圖1-4所示。圖1-4不同酶的種類對(duì)鹿筋回收率的影響3.1.5不同酶底比的確定以不加酶處理的組別做為空白對(duì)照組，加入胃蛋白酶處理的鹿筋收率明顯高于空


本文編號(hào)：3599760