第一部分 內(nèi)源性膽固醇在BMSCs成骨分化中的作用及機制目的:研究內(nèi)源性膽固醇在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）成骨分化中的作用;明確Hedgehog（Hh）信號通路在此過程中發(fā)揮的調(diào)控機制。方法:采用“體外細(xì)胞內(nèi)膽固醇去除試驗”去除BMSCs（包括ST2細(xì)胞和原代BMSCs）的內(nèi)源性膽固醇:饑餓處理BMSCs 24小時,使用含1.5%環(huán)糊精的α-MEM完全培養(yǎng)基去除細(xì)胞內(nèi)膽固醇,細(xì)胞孵育半小時,使用含40uM普伐他汀鈉的α-MEM完全培養(yǎng)基阻斷細(xì)胞內(nèi)膽固醇的生物合成。使用“細(xì)胞內(nèi)膽固醇熒光染色”法,分別在熒光顯微鏡放大4倍、10倍、20倍時檢測ST2細(xì)胞內(nèi)源性膽固醇的熒光量。同時,光學(xué)顯微鏡放大相同倍數(shù)觀察去除內(nèi)源性膽固醇前后ST2細(xì)胞的密度變化。向含有去除內(nèi)源性膽固醇的ST2細(xì)胞和原代BMSCs的α-MEM完全培養(yǎng)基內(nèi)加入5%Shh上清,以293T上清為對照。3天后使用ALP染色法檢測ST2細(xì)胞和原代BMSCs的ALP染色陽性程度,使用實時定量聚合酶鏈反應(yīng)（Quantitative real-time polyme... 

【文章來源】：蘇州大學(xué)江蘇省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：152 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１提取小鼠原代ＢＭＳＣｓ的方法??（２）使用臺式離心機ｌＯＯＯＯｘ轉(zhuǎn)速快速離心幾秒，配平心機，關(guān)閉心，??

第－部分?膽固醇在ＢＭＳＣｓ成骨分化中的雙重作用及機制研究??結(jié)?果??１．小鼠原代ＢＭＳＣｓ的形態(tài)??使用Ｏｌｙｍｐｕｓ顯微鏡觀察小鼠原代ＢＭＳＣｓ的形態(tài)。細(xì)胞培養(yǎng)５天后，放大１０??倍視野時可見：ＢＭＳＣｓ形態(tài)為不規(guī)則的多角形，呈集落式生長（圖２Ａ）；培養(yǎng)７－１０??天、放大２０倍時可見：ＢＭＳＣｓ増殖加速，各集落融合加快（圖２Ｂ）。??ｍｍ??２〇ｘ??圖２小鼠原代ＢＭＳＣｓ在放大１０倍（Ａ）和２０倍（Ｂ）視野時的形態(tài)。??２．明確ＳＴ２細(xì)胞中內(nèi)源性膽固醇的去除情況及其去除效率??２．１明確ＳＴ２細(xì)胞中內(nèi)源性膽固醇的去除情況??使用環(huán)糊精和普伐他汀去除ＳＴ２細(xì)胞的內(nèi)源性膽固醇，檢測膽固醇是否被去除。??使用含Ｆｉｌｉｐｉｎ?ＩＩ丨液的熒光染色試劑盒對ＳＴ２細(xì)胞進行染色。熒光顯微鏡分析顯示：??在放大４倍、１０倍和２０倍時，內(nèi)源性膽固醇去除組ＳＴ２細(xì)胞的熒光強度均明顯弱于??對照組（圖３）。實驗證實：內(nèi)源性膽固醇確實己被去除。??２６??

膽固醇在ＢＭＳＣｓ成骨分化中的雙重作用及機制研究?第？部分??Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ?ｄｅｐｌｅｔｅｄ?（－）??■■■??？?１０Ｘ?２０Ｘ??Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ?ｄｅｐｉｃｔｅｄ?（■？■）??■■■??圖３證實ＳＴ２細(xì)胞中的內(nèi)源性肌固醇已被去除。Ａ－Ｆ．己被熒光化合物Ｆｉｌｉｐｉｎ?ＩＩ丨液??進行染色的ＳＴ２細(xì)胞在放大４倍（Ａ，?Ｄ）、１０倍（Ｂ，?Ｅ）和２０倍（Ｃ，?Ｆ）時，對??照組（Ａ－Ｃ）和內(nèi)源性膽固醇去除組（Ｄ－Ｆ）的熒光強度變化比較。??２．２明確ＳＴ２細(xì)胞中內(nèi)源性ＨＵＮ醇的去除效率??使用熒光定量法明確內(nèi)源性Ｍ固醇的去除效率。選取１０倍視野下對照組和內(nèi)源??性膽固醇去除組的代表性熒光（圖４Ａ，Ｂ），采用Ｉｍａｇｅ?Ｊ軟件獲得總細(xì)胞的熒光量，??進－步對背景熒光進行標(biāo)準(zhǔn)化。結(jié)果顯示：內(nèi)源性膽固醇去除組中相對總細(xì)胞的熒光??量顯著Ｆ降，ＳＴ２細(xì)胞中內(nèi)源性丨ｊｌｌ固醇的去除率為７２％?（圖４Ｃ），與對照纟丨Ｕ１丨比，??差異具打統(tǒng)丨１？學(xué)意義（ｐ＜〇．（）５）。??Ｄｅｐｌｅｔｅｄ?？?＋??■?（１２０??Ｉ．??Ｄｅｐｌｅｔｅｄ?？??圖４明確ＳＴ２細(xì)胞中內(nèi)源性膽固醇的去除率。１０倍視野下對照組（Ａ）和內(nèi)源性職??固醇去除組（Ｂ）代表性熒光圖；Ｃ．內(nèi)源性肌固醇的上？除宇．。＊＾＜０．０５，?ｎ＝３。??２７??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]植物甾醇降血脂作用的研究進展[J]. 薛延團,張曉鳳,張得鈞.  華西藥學(xué)雜志. 2019(01)
[2]圍絕經(jīng)期女性預(yù)防骨質(zhì)疏松癥研究進展[J]. 趙丹,施丹,史曉.  遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報. 2019(02)
[3]膽固醇-25-羥化酶基因抗病毒功能研究進展[J]. 呂麗霞,趙貴民,王洪梅,侯佩莉,潘偉,何洪彬.  中國動物傳染病學(xué)報. 2019(04)
[4]住院患者骨質(zhì)疏松高危人群疾病因素與干預(yù)措施[J]. 顏曉東.  中國臨床新醫(yī)學(xué). 2018(12)
[5]GDF15在腫瘤骨轉(zhuǎn)移中的作用及機制的研究進展[J]. 段煉,龐海林,陳文娟,曹培培,張賀龍.  現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué). 2019(04)
[6]乳腺癌轉(zhuǎn)移形成的分子機制及器官特異性[J]. 郭繼雪,康欣梅,張清媛.  現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué). 2019(04)
[7]絕經(jīng)后女性骨質(zhì)疏松癥與胰島素樣生長因子關(guān)系的臨床研究[J]. 劉新娟,黎東梅,王靜,張棟武.  中國計劃生育和婦產(chǎn)科. 2018(12)
[8]血清前列腺干細(xì)胞抗原和前列腺特異性抗原聯(lián)合檢測在前列腺癌骨轉(zhuǎn)移診斷中的意義[J]. 王深,沈亞勛,凌揚,歐陽駿.  廣東醫(yī)學(xué). 2018(24)
[9]中老年人維生素D水平對骨質(zhì)疏松的影響及相關(guān)性分析[J]. 滑麗美,薛蘇娟,曹婧然,李紹建,雷敏,于建敏.  臨床誤診誤治. 2018(12)
[10]脊柱轉(zhuǎn)移性腫瘤的研究進展[J]. 蔣煒騫,柯珍勇,汪洋,程思,敖劍.  中國腫瘤外科雜志. 2018(06)

博士論文
[1]HedgeHog信號通路和EMT相關(guān)LncRNAs在瘢痕疙瘩中的表達研究[D]. 黃和平.南昌大學(xué) 2018
[2]Sufu在皮膚創(chuàng)傷修復(fù)和皮膚纖維化中的作用及其機制研究[D]. 楊蓓蓓.浙江大學(xué) 2018

碩士論文
[1]Hedgehog信號通路配體Shh在肺鱗癌中發(fā)病的分子機制[D]. 熊歡婷.南昌大學(xué) 2018
[2]骨細(xì)胞Wnt/β-Catenin信號在BMSCs成骨分化中的作用研究[D]. 任磊.重慶醫(yī)科大學(xué) 2018



本文編號：3575582