目的:神經(jīng)管畸形（neural tube defects,NTDs）是一種由多種因素引發(fā)的疾病,給社會(huì)和家庭帶來(lái)沉重的經(jīng)濟(jì)和精神負(fù)擔(dān),嚴(yán)重影響著人口質(zhì)量,但其發(fā)生機(jī)制并未完全闡明。體外全胚胎培養(yǎng)（Whole embryo culture,WEC）是可以實(shí)現(xiàn)高度模擬子宮內(nèi)胚胎暴露于特定環(huán)境的一項(xiàng)技術(shù),通過(guò)精準(zhǔn)控制遺傳和環(huán)境因素、精確定位神經(jīng)管閉合相對(duì)狹窄的窗口期、縮小與母嬰遺傳相關(guān)敏感性差異等優(yōu)勢(shì),為研究神經(jīng)管畸形發(fā)病機(jī)制提供了便利途徑。卵黃囊血循環(huán)建立早于神經(jīng)系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)形成,它的發(fā)育程度決定著胚胎發(fā)育速度,有研究表明卵黃囊發(fā)育與胚胎畸形率呈負(fù)相關(guān),課題組擬利用WEC平臺(tái)研究NTDs的發(fā)生機(jī)制,為干預(yù)神經(jīng)管畸形發(fā)生提供新思路。本研究目的主要內(nèi)容有:1利用小鼠體外WEC平臺(tái)將E（embryo,E）7.0胎鼠體外培養(yǎng)5天,并在神經(jīng)管閉合階段詳盡研究其形態(tài)學(xué)發(fā)生。2利用小鼠體外WEC平臺(tái)分別建立丙戊酸、酒精、stavudine致NTDs模型并研究其發(fā)生機(jī)制;3利用小鼠體外WEC平臺(tái)建立高糖誘導(dǎo)NTDs模型并探討二甲雙胍干防效果及機(jī)制。方法:1將E 7.0胎鼠體外培養(yǎng)5天和E 8.5胎鼠體... 

【文章來(lái)源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁(yè)數(shù)】：121 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

提取大鼠即可離心血清注：A：大鼠腹主動(dòng)脈采血術(shù)；B：采血管收集大鼠血清；C：血液離心；D：擠壓纖維凝塊；E：取上清；F：溶血血清；G：血清再次離心；H：箭頭示凍存后的溶血血清

山西醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文6E7.0的孕鼠通過(guò)頸椎脫臼處死，入75%酒精浸泡5min[50-51]。以下所有操作均需保持無(wú)菌程序。剖開(kāi)孕鼠的腹部，取出子宮，無(wú)菌生理鹽水沖洗，去除滲出的血液，并修剪多余的脂肪及子宮動(dòng)脈，轉(zhuǎn)移到室溫?zé)o菌培養(yǎng)皿中，體式顯微鏡下用5號(hào)精細(xì)鐘表鑷對(duì)胚胎進(jìn)行小心剝離：將鑷子插入子宮壁和蛻膜之間的縫隙，用力撕開(kāi)一個(gè)小口，然后一點(diǎn)點(diǎn)機(jī)械力撕，直到剝?nèi)ト孔訉m壁。全程使用機(jī)械力量撕除子宮，避免將胚胎擠出。定位蛻膜：從胚胎顏色較紅、較寬的部分（胎盤）插入鑷子，向兩側(cè)鈍性分離，逐步將胚胎從蛻膜組織中分離出來(lái)，請(qǐng)注意保護(hù)胚胎頂端的外胎盤錐完整性，撕去卵黃囊表面的Reichert’s膜，需要保持卵黃囊、羊膜以及胚胎的完整性以及外胎盤錐和卵黃囊的連接性（見(jiàn)圖1-2）。透過(guò)卵黃囊可以清晰的看到胚胎，選取具有完整外胎盤錐和卵黃囊的胚胎進(jìn)行培養(yǎng)，E10.5之后的胚胎需要打開(kāi)卵黃囊以及羊膜開(kāi)放培養(yǎng)，詳見(jiàn)本方法1.3.2.3部分。圖1-2E7.0胚胎的提取注：A：從孕鼠腹腔取出子宮；B：將胚胎從子宮中剝出；C：將胚胎從脫膜組織內(nèi)剝出；D：具有完整的外胎盤錐以及卵黃囊胚胎，可用于體外WEC。A和B標(biāo)尺為500μm，C為200μm,D標(biāo)尺為100μm。1.4.2.2E8.5胚胎的提取E8.5的孕鼠通過(guò)頸椎脫臼處死，入75%酒精浸泡5min[52]。以下所有操作詳見(jiàn)1.3.2.1。簡(jiǎn)述為：剖開(kāi)腹部，取出子宮（見(jiàn)圖1-3A），清理子宮表面多余脂肪血管（見(jiàn)圖1-3B）體式顯微鏡撕開(kāi)蛻膜組織，外胎盤錐頂端血紅色，似帽子覆蓋于

E8.5胚胎的提取注：A：取出子宮；B：去除子宮周圍多余的脂肪以及血管；C：將胚胎從子宮中剝出后將胚胎從脫膜組織內(nèi)剝出一半；D：具有完整的外胎盤錐以及卵黃囊的胚胎，可用于體外WEC；；E：由


本文編號(hào)：3553209