發(fā)布時間：2017-05-10 17:02

  本文關鍵詞：Toll樣受體7激活對胰腺癌細胞株（BxPC-3）增殖、遷移與凋亡的影響及機制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：近年來,胰腺癌在惡性腫瘤中的發(fā)病率及死亡率均呈現(xiàn)明顯上升趨勢。由于其起病隱匿、臨床早期表現(xiàn)缺乏特征性,目前篩查還缺乏有效手段,大多數(shù)胰腺癌確診時已屬于中晚期,具有惡性程度高、手術切除率較低、易于復發(fā)、預后差、生存率低等特點。故針對胰腺癌的發(fā)病原因、腫瘤發(fā)生發(fā)展及侵襲、轉移機制方面的基礎研究取得了一定進展的同時,在外科手術、輔助與新輔助治療及靶向治療等方面不斷有新技術、新方法及新藥物問世。尋找胰腺癌的基因治療靶點,一直是胰腺癌研究領域中的熱點。在分子靶向治療中,仍存在許多問題有待解決。目前的研究表明,Toll蛋白受體(Toll-like receptors,TLRs)作用:啟動先天性免疫,以及橋接天然免疫與獲得性免疫;在慢性炎癥促進腫瘤的演進過程中,特別注意的是發(fā)現(xiàn)TLRs在一些腫瘤細胞胞膜內外表達,并且對于腫瘤的發(fā)生、演進及治療上等方面,均起著重要作用。tlr7是tlrs家族的重要成員之一,近來研究發(fā)現(xiàn),更多表明tlr7主要表達于某些類型腫瘤細胞,包括肺癌、腎臟癌、膀胱癌、皮膚癌、結直腸癌細胞,原因可能涉及有關于腫瘤細胞的來源和其所處的微環(huán)境。在這些細胞內,tlr7作為病原體的識別受體在于它結合其配體如單鏈rna(single-strandedrna,ssrna)或某些小干擾rna;tlr7結合其配體被激活后通過激發(fā)干擾素-Ⅰ型、細胞因子和化學增活素等產(chǎn)物,從而啟動先天性和適應性的抗病毒免疫,主要識別病毒單鏈rna和一些人工合成的抗病毒小分子咪唑喹啉衍生物,包括gardiquimod、imiquimod、resiquimod等。tlr7激動劑已經(jīng)應用實驗與臨床研究上,但其對腫瘤的作用仍存在爭議;tlr7激動劑在腫瘤細胞免疫治療中的應用,還需要進一步的研究。目前,尚無文獻報道有關gardiquimod與胰腺癌關系的研究。本課題通過觀察tlr7激動劑gardiquimod對胰腺癌細胞株(bxpc-3)增殖、遷移與凋亡的作用,旨意探究gardiquimod與胰腺癌之間的相互關系,并循證其可能存在作用的分子機制,tlr7激動劑gardiquimod可能對胰腺癌的靶向治療提供一種新的策略。目的:tlr7的激活對胰腺癌細胞株(bxpc-3)增殖、遷移與凋亡的影響及其機制研究。方法:培養(yǎng)人原位胰腺腺癌bxpc-3細胞,通過實時熒光定量(real-time)pcr和westernblot分析,檢測tlr7受體在mrna和蛋白水平上的表達。以不同劑量(0μg/ml、1.5μg/ml、3.0μg/ml、5.0μg/ml)的tlr7配體gardiquimod經(jīng)不同的時間(1d、2d、3d、4d、5d)體外刺激bxpc-3細胞,mts及流式細胞術分析tlr7的激活對bxpc-3細胞增殖的影響。tlr7配體gardiquimod(3μg/ml)處理bxpc-3細胞(1-6d),劃痕實驗方法分析,檢測其對bxpc-3細胞的遷移影響。tlr7配體gardiquimod(3μg/ml)經(jīng)不同的時間(1-5d),體外刺激bxpc-3細胞,流式細胞術分析其對bxpc-3細胞的凋亡影響。培養(yǎng)bxpc-3細胞,tlr7配體gardiquimod(3μg/ml)經(jīng)不同的時間(0min、12min、30min、1h、3h、6h、12h、24h、48h),體外刺激bxpc-3細胞,作用12h后,通過westernblot的方法分析,從而探討細胞周期蛋白cyclinb1、cycline、bcl-2及bax在gardiquimod對人胰腺癌BxPC-3細胞增殖、遷移及凋亡調控中的作用。結果:Real-time PCR和Western blot分析證實,在人原位胰腺腺癌BxPC-3細胞中,mRNA及蛋白水平檢查到TLR7表達,TLR7受體表達量低于人外周血單核細胞,表達相差20.12±7.254倍,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01)。MTS、流式細胞術及劃痕試驗分析結果顯示:TLR7配體Gardiquimod抑制BxPC-3細胞增殖,且具有時間及劑量依賴性(P0.05);Gardiquimod誘導胰腺癌BxPC-3細胞凋亡,且具有時間依賴性(P0.05);Gardiquimod能夠抑制胰腺癌BxPC-3細胞遷移,6天后傷痕愈合度僅達到60%,且具有時間依賴性依賴性(P0.01)。機制研究發(fā)現(xiàn):通過western-blotting的方法來分析,TLR7受體激動劑Gardiquimod能夠降低cyclin B1、cyclin E和Bcl-2,同時,Gardiquimod能夠上調Bax,6h后可出現(xiàn)明顯升高。結論:TLR7受體在人原位胰腺腺癌Bx PC-3細胞存在表達;TLR7激動劑Gardiquimod能夠抑制胰腺癌BxPC-3細胞的增殖、遷移和誘導細胞凋亡。Gardiquimod對胰腺癌BxPC-3細胞增殖抑制及細胞凋亡誘導可能依賴細胞周期蛋白cyclin B1、cyclin E、Bcl-2及Bax的調控。
【關鍵詞】：BxPC-3細胞 TLR7 Gardiquimod 增殖 遷移 凋亡
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.9
【目錄】：

• 中英文縮略詞表5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-14
• 1 前言14-18
• 2 材料與方法18-43
• 2.1 實驗材料18-22
• 2.2 主要器材和儀器設備22-24
• 2.3 方法24-43
• 2.4 統(tǒng)計學處理43
• 3 結果43-52
• 3.1 TLR7在Bx PC-3 細胞中m RNA及蛋白質的表達43-45
• 3.2 Gardiquimod抑制Bx PC-3 細胞增殖45-48
• 3.3 Gardiquimod誘導Bx PC-3 細胞凋亡48-49
• 3.4 Gardiquimod對Bx PC-3 細胞增殖抑制與誘導凋亡機制49-51
• 3.5 Gardiquimod對胰腺癌Bx PC-3 細胞遷移能力的影響51-52
• 4 討論52-57
• 5 結論57
• 參考文獻57-65
• 附錄65-67
• 致謝67-68
• 綜述68-104
• 參考文獻92-104

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 胡鵬;張雷達;;曲古抑菌素A增強細胞因子誘導的殺傷細胞對胰腺癌細胞株殺傷效果的體外研究[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2013年23期

2 李興華,徐云虹,龔燕芳,鄒曉平,吳紅玉,屠振興,李兆申;健擇對胰腺癌細胞株蛋白質表達的影響[J];現(xiàn)代消化及介入診療;2004年03期

3 李非;劉大川;孫家邦;;生長激素對胰腺癌細胞株增殖活性的調控[J];中華肝膽外科雜志;2005年10期

4 劉勝利,Helmut Friess,Jorg Kleeff,Markus W B

本文編號：355156