第一部分ZNF471在人食管鱗狀細胞癌中作用和機制研究目的:ZNF471（Zinc finger protein 471）位于19q13.43,是一種包含KRAB結(jié)構(gòu)域的鋅指蛋白。已有文獻報道,ZNF471在胃癌中由于啟動子甲基化而表達降低,并且可以作為抑癌基因誘導細胞凋亡、抑制細胞增殖和轉(zhuǎn)移。但ZNF471在食管鱗狀細胞癌發(fā)生發(fā)展中的具體機制仍未被明確闡述。因此,在本研究中,我們對ZNF471在食管鱗癌中的表觀遺傳學調(diào)控及具體的生物功能和可能的分子機制進行了進一步地探索。方法:采用RT-PCR實驗檢測ZNF471在人正常組織和食管鱗癌細胞株中的表達情況。通過qPCR實驗檢測ZNF471在食管鱗癌配對組織（癌和癌旁）中的表達情況。通過MSP實驗檢測ZNF471在食管鱗癌細胞株和食管鱗癌組織中的甲基化狀態(tài)。質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人食管鱗癌細胞KYSE150和KYSE410,篩選鑒定ZNF471穩(wěn)定過表達的細胞株,用于進行細胞克隆形成、CCK-8、流式細胞術(shù)（周期和凋亡）、劃痕、侵襲、遷移和裸鼠荷瘤實驗,探索實驗組（ZNF471過表達組）和對照組（空載質(zhì)粒組）對人食管鱗癌細胞功能的影響。在人食管鱗癌細胞... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學重慶市

【文章頁數(shù)】：121 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

ZNF471在人正常組織中的表達Figure1.1ZNF471expressioninhumannormaltissueswereassayedbyRT-PCR.

重慶醫(yī)科大學博士研究生學位論文采用RT-PCR對人食管鱗癌細胞株中ZNF471的表達情況進行檢測。結(jié)果顯示，ZNF471 在絕大多數(shù)食管鱗癌細胞中不表達，但是在大多數(shù)正常食管上皮細胞中高表達。MSP 實驗結(jié)果顯示，絕大多數(shù)食管鱗癌細胞中 ZNF471 呈高甲基化水平，而正常食管上皮細胞中 ZNF471 呈低甲基化。（圖 1.2）同時，我們通過在線數(shù)據(jù)庫 CpG Island Searcher 分析發(fā)現(xiàn)，ZNF471 含有一個典型的 CpG 島（圖 1.3）。

71 在絕大多數(shù)食管鱗癌細胞中不表達，但是在大多數(shù)正常食管上皮細。MSP 實驗結(jié)果顯示，絕大多數(shù)食管鱗癌細胞中 ZNF471 呈高甲基化常食管上皮細胞中 ZNF471 呈低甲基化。（圖 1.2）同時，我們通過在G Island Searcher 分析發(fā)現(xiàn)，ZNF471 含有一個典型的 CpG 島（圖 1.3 1.2 RT-PCR 和 MSP 檢測 ZNF471 在人食管鱗癌細胞株中的表達和甲基化情re 1.2 The expression and methylation status of ZNF471 in representative humancells were assayed by RT-PCR and MSP

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Epigenetic therapy of cancer stem and progenitor cells by targeting DNA methylation machineries[J]. Patompon Wongtrakoongate.  World Journal of Stem Cells. 2015(01)
[2]Promoter methylation of tumor suppressor genes in esophageal squamous cell carcinoma[J]. Ji-Sheng Li,Jian-Ming Ying,Xiu-Wen Wang,Zhao-Hui Wang,Qian Tao,Li-Li Li.  Chinese Journal of Cancer. 2013(01)
[3]XAF1 is frequently methylated in human esophageal cancer[J]. Xiang-Yu Chen, Qiao-Yu He, Ming-Zhou Guo, Department of Gastroenterology, The First Affiliated Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450052, Henan Province, China , Department of Gastroenterology and Hepatology, Chinese PLA General Hospital, Beijing 100853, China.  World Journal of Gastroenterology. 2012(22)



本文編號：3525598