第一部分ZNF471在人食管鱗狀細(xì)胞癌中作用和機(jī)制研究目的:ZNF471（Zinc finger protein 471）位于19q13.43,是一種包含KRAB結(jié)構(gòu)域的鋅指蛋白。已有文獻(xiàn)報(bào)道,ZNF471在胃癌中由于啟動(dòng)子甲基化而表達(dá)降低,并且可以作為抑癌基因誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、抑制細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移。但ZNF471在食管鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展中的具體機(jī)制仍未被明確闡述。因此,在本研究中,我們對(duì)ZNF471在食管鱗癌中的表觀遺傳學(xué)調(diào)控及具體的生物功能和可能的分子機(jī)制進(jìn)行了進(jìn)一步地探索。方法:采用RT-PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)ZNF471在人正常組織和食管鱗癌細(xì)胞株中的表達(dá)情況。通過qPCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)ZNF471在食管鱗癌配對(duì)組織（癌和癌旁）中的表達(dá)情況。通過MSP實(shí)驗(yàn)檢測(cè)ZNF471在食管鱗癌細(xì)胞株和食管鱗癌組織中的甲基化狀態(tài)。質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人食管鱗癌細(xì)胞KYSE150和KYSE410,篩選鑒定ZNF471穩(wěn)定過表達(dá)的細(xì)胞株,用于進(jìn)行細(xì)胞克隆形成、CCK-8、流式細(xì)胞術(shù)（周期和凋亡）、劃痕、侵襲、遷移和裸鼠荷瘤實(shí)驗(yàn),探索實(shí)驗(yàn)組（ZNF471過表達(dá)組）和對(duì)照組（空載質(zhì)粒組）對(duì)人食管鱗癌細(xì)胞功能的影響。在人食管鱗癌細(xì)胞... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：121 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

ZNF471在人正常組織中的表達(dá)Figure1.1ZNF471expressioninhumannormaltissueswereassayedbyRT-PCR.

重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文采用RT-PCR對(duì)人食管鱗癌細(xì)胞株中ZNF471的表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示，ZNF471 在絕大多數(shù)食管鱗癌細(xì)胞中不表達(dá)，但是在大多數(shù)正常食管上皮細(xì)胞中高表達(dá)。MSP 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，絕大多數(shù)食管鱗癌細(xì)胞中 ZNF471 呈高甲基化水平，而正常食管上皮細(xì)胞中 ZNF471 呈低甲基化。（圖 1.2）同時(shí)，我們通過在線數(shù)據(jù)庫 CpG Island Searcher 分析發(fā)現(xiàn)，ZNF471 含有一個(gè)典型的 CpG 島（圖 1.3）。

71 在絕大多數(shù)食管鱗癌細(xì)胞中不表達(dá)，但是在大多數(shù)正常食管上皮細(xì)。MSP 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，絕大多數(shù)食管鱗癌細(xì)胞中 ZNF471 呈高甲基化常食管上皮細(xì)胞中 ZNF471 呈低甲基化。（圖 1.2）同時(shí)，我們通過在G Island Searcher 分析發(fā)現(xiàn)，ZNF471 含有一個(gè)典型的 CpG 島（圖 1.3 1.2 RT-PCR 和 MSP 檢測(cè) ZNF471 在人食管鱗癌細(xì)胞株中的表達(dá)和甲基化情re 1.2 The expression and methylation status of ZNF471 in representative humancells were assayed by RT-PCR and MSP

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3525598