大葉蛇葡萄（Ampelopsis megalophylla Diels et Gilg）為葡萄科蛇葡萄屬植物,其主要藥用部位為葉,臨床上可用于治療高血壓等。課題組前期研究表明,黃酮類化合物為其主要活性成分,包括二氫楊梅素（蛇葡萄素）、楊梅苷、楊梅素和槲皮素等。這些黃酮類次生代謝產(chǎn)物在不同時(shí)期的葉中含量差異顯著。本研究采用雙向電泳技術(shù)對(duì)大葉蛇葡萄進(jìn)行了蛋白組學(xué)研究,采用Illumina測(cè)序技術(shù)對(duì)其不同季節(jié)的葉片進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,獲得了豐富的基因功能注釋信息。同時(shí)基于不同季節(jié)葉片之間基因表達(dá)量的差異性,探討了相關(guān)功能基因在該植物黃酮類化合物生物合成中發(fā)揮的作用。具體研究如下:1.采用高效液相色譜法分別同時(shí)測(cè)定了5月、8月及10月采收的大葉蛇葡萄葉中二氫楊梅素和楊梅苷兩種活性成分的含量。結(jié)果表明,二氫楊梅素:5月>8月>10月;楊梅苷:5月>10月>8月。2.采用酚抽提法提取了5月、8月及10月大葉蛇葡萄葉片中的蛋白質(zhì),并進(jìn)行了雙向電泳分析。用考馬斯亮藍(lán)G-250染色,蛋白質(zhì)在水平和垂直兩個(gè)方向均得到了較好的分離,獲得了背景清晰、分辨率和重復(fù)性均較好的圖譜。選用了pH... 

【文章來(lái)源】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)湖北省

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

混合對(duì)照品及樣品色譜圖

湖北中醫(yī)藥大學(xué)2020屆博士學(xué)位論文6按照表1-5配制胎牛血清測(cè)定溶液。表1-5不同比例標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制Table1-5Thepreparationofstandardsolutionwithdifferentproportion蛋白質(zhì)濃度（μg/mL）5101520253035BSA（μL）1234567ddH2O（μL）9876543Bradford試劑（μL）1,0001,0001,0001,0001,0001,0001,000將以上各溶液混合于1.5mLEppendorf離心管中，渦旋振蕩20s，充分混勻后用酶標(biāo)儀測(cè)定最大吸收值，測(cè)定波長(zhǎng)為595nm，根據(jù)測(cè)定結(jié)果繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖1-2）。圖1-2BSA標(biāo)準(zhǔn)曲線圖Fig.1-2TheBSAstandardcurve2.1.3.2含量測(cè)定蛋白質(zhì)團(tuán)塊溶解干燥后的蛋白質(zhì)團(tuán)塊中加入200μL裂解液（表1-6），后反復(fù)吹打，直至蛋白質(zhì)全部分散均勻。超聲（80W，0.8s開，0.8s關(guān)）助溶后于冰上冷卻。重復(fù)操作一次。后于4℃，12,000rpm，離心20min，吸取上清，轉(zhuǎn)移至另一新的Eppendorf管中，備用。含量測(cè)定為了減小誤差，使所測(cè)的數(shù)值準(zhǔn)確，蛋白質(zhì)進(jìn)行兩次定量：初步定量計(jì)算得到各樣品的濃度，依據(jù)結(jié)果將所有樣品的濃度盡量調(diào)整至接近；后進(jìn)行第二次定量，結(jié)果見表1-7。

大葉蛇葡萄不同生長(zhǎng)期黃酮類化合物的生物合成機(jī)制研究15圖1-3電泳掃描圖Fig.1-3Theelectrophoreticscanninggraph注：A、B、C分別代表N1、N2、N3樣品的兩次掃描結(jié)果，N1、N2、N3分別為5月、8月、10月采集的樣品。樣品等電點(diǎn)分布特點(diǎn)：5月和8月的大葉蛇葡萄葉片中蛋白質(zhì)等電點(diǎn)主要在5.0~5.5之間，分別占21.38%、22.97%，而10月的樣品蛋白質(zhì)等電點(diǎn)ABC

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3504621