發(fā)布時間：2021-11-18 01:33

　　金黃色葡萄球菌廣泛分布于自然界中,可分泌多種毒力因子以及表面黏附蛋白,能引起菌血癥、肺炎、心內(nèi)膜炎、化膿性關(guān)節(jié)炎、中耳炎、深部膿腫等嚴(yán)重感染。金黃色葡萄球菌具有較強(qiáng)的存活能力和免疫逃逸能力,常導(dǎo)致慢性遷延性感染。其免疫逃逸機(jī)制,一方面與細(xì)菌本身的毒力因子,如毒素、酶和表面黏附因子等因素有關(guān);另一方面可能通過與宿主細(xì)胞的相互作用,消減或抑制宿主免疫防御功能。近年來,隨著萬古霉素廣泛應(yīng)用于臨床,異質(zhì)性萬古霉素中介金黃色葡萄球菌（hVISA）菌株不斷出現(xiàn)。針對hVISA的研究顯示,不但抗菌藥物難以發(fā)揮作用,機(jī)體免疫系統(tǒng)也難以將其清除。hVISA在宿主體內(nèi)免疫逃逸的分子機(jī)制尚不清楚,因此,深入探討hVISA與宿主免疫系統(tǒng)之間的相互作用,將有助于我們理解金黃色葡萄球菌逃避宿主免疫反應(yīng)并實現(xiàn)持續(xù)性感染的分子機(jī)制,為尋找新的治療靶點(diǎn)提供理論依據(jù)。巨噬細(xì)胞是人體固有免疫系統(tǒng)重要的組成部分,具有強(qiáng)大的識別、吞噬、清除細(xì)菌及外來異物的功能。自噬是廣泛存在于真核細(xì)胞中的一種機(jī)體生存,分化,發(fā)育,代謝所必須的自穩(wěn)機(jī)制,作為天然免疫中重要的組成部分,同時也作為機(jī)體自我保護(hù)的生理學(xué)行為,在抵抗病原微生物感染以及其... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：115 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

pET28a-VraR表達(dá)產(chǎn)物Westernblotting鑒定M．預(yù)染標(biāo)準(zhǔn)蛋白分子量1：鼠源性抗His抗體對重組rVraR蛋白的識別

安徽醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文33結(jié)果可以在25KDa附近檢測到清晰而深染的條帶，見圖2，說明抗VraR多克隆抗體的特異性良好。圖1.pET28a-VraR表達(dá)產(chǎn)物Westernblotting鑒定M．預(yù)染標(biāo)準(zhǔn)蛋白分子量1：鼠源性抗His抗體對重組rVraR蛋白的識別Fig1.IndentificationofrecombinatVraRproteinbyWesternblottingM:Prestainedproteinmolecularmarker1:DetectionofrecombinateVraRproteinwithHis.Tagmonoclonalantibody圖2.抗-rVraR多克隆抗體的Westernblotting驗證M：蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)1：1:20000倍稀釋抗體2：1:10000倍稀釋抗體Fig2.IndentificationofAnti-rVraRpolyclonalantibodybyWesternblotting

安徽醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文34M:Proteinmolecularmarker1:Detectionof1:20000timesdilutedantibody2：Detectionof1:10000timesdilutedantibody4.1.2VraSR缺失株和回補(bǔ)株的鑒定：通過qRT-PCR對Mu3，Mu3ΔvraSR和Mu3ΔvraSR-C菌株中vraSR基因的轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行了確認(rèn)，在Mu3ΔvraSR株中vraSR基因的轉(zhuǎn)錄完全缺失，Mu3ΔvraSR-C菌株回復(fù)了vraSR基因的轉(zhuǎn)錄，見圖3。Westernblotting分析結(jié)果顯示，Mu3ΔvraSR株不表達(dá)VraR蛋白，而Mu3ΔvraSR-C菌株部分回復(fù)了VraR蛋白的表達(dá)，見圖4。以上結(jié)果均證實Mu3ΔvraSR和Mu3ΔvraSR-C菌株敲除和回補(bǔ)成功。圖3.qRT-PCR檢測Mu3，Mu3ΔvraSR和Mu3ΔvraSR-C菌株vraR轉(zhuǎn)錄水平Figure3.DetectionofvraSRtranscriptionlevelsinMu3,Mu3ΔvraSRandMu3ΔvraSR-CstrainsbyqRT-PCR圖4.Westernblotting檢測Mu3，Mu3ΔvraSR和Mu3ΔvraSR-C菌株VraR蛋白表達(dá)水平Figure4.DetectionofVraRproteinlevelsinMu3,Mu3ΔvraSRandMu3ΔvraSR-CstrainsbyWesternblotting

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]萬古霉素耐藥金黃色葡萄球菌致病性研究[J]. 張濤,馬筱玲,戴媛媛,陳多炎,魯懷偉.  中國人獸共患病雜志. 2005(11)



本文編號：3501956